API - системы для идентификации микроорганизмов

2 1. взятие образца и транспортировка в лабораторию 2. посев и выделение чистой культуры 3. идентификация микроорганизма 4. определение антибиотикочувствительности Этапы микробиологического исследования

3 Что такое API? Классический метод идентификации – биохимические ряды API ® - это миниатюрный биохимический ряд

4 Что такое API? API ® - ручные системы идентификации микроорганизмов, которые основаны на биохимических тестах и используются в качестве референсного метода идентификации во всем мире

5 Как работает API? В лунки стрипа внесены субстраты: Ферментативные реакции Реакции утилизации изменение состава среды изменение цвета индикатора спонтанное при внесении реактивов

6 Суспензия КолонииИнокуляция Инкубация Как работать с API? Внесение реактивов профиль Интерпретация (apiWEB, книга профилей) РЕЗУЛЬТАТ

7 Спектр API API 20 E - Enterobacteriaceae и другие грам(-) палочки (118 таксонов) API 10 S - Enterobacteriaceae и другие грам(-) палочки 10 реакций (46 таксонов) RapiD 20 E - только Enterobacteriaceae 4.5 – 5 часов (75 таксонов) API Staph - Staphylococcus, Kocuria, Micrococcus spp (30 таксонов) API Strep -Streptococcaceae и родственные роды (48 таксонов) API 20 NE – не ферменты (75 таксонов) API Candida (17 таксонов) API 20 C AUX расширенная база данных (47 таксонов) API 20 A – анаэробы (79 таксонов) API Coryne – коринебактерии (65 таксонов) API Campy – кампилобактерии (16 таксонов) API Listeria – листерии (6 таксонов) API 50 CH - изучение углеводного метаболизма API 50 CHL - лактобациллы и родственные роды+ среда API CHL API 50 CHB/E - бациллы и родственные роды + среда API CHL API ZYM - изучение ферментативной активности Только API

8 Как выбрать стрип API? Источник выделения Морфология колоний Характерные признаки Ориентировочные тесты Окраска по Граму и морфология клеток Каталаза Оксидаза

9 Как выбрать стрип API? Грам(+) кокки Грам(-) кокки Грам(+) палочки Грам(-) палочки Cat(+)Cat(-)Ox(+)Ox(-) StaphylococciStreptococciEnterobacteria Неферменты API StaphAPI StrepAPI 20 EAPI 20 NE ….

10 Распознавание : Реакция распознается По самостоятельному изменению цвета Изменение цвета при добавлении реагентов Используйте кодовую таблицу (прилагается к инструкции) для определения типа реакции + или -. Эти знаки должны быть преобразованы в числовой профиль использую следующий принцип: Тесты на стрипе объединяются в группы по 3 Каждому тесту присваивается номер 1, 2 или 4 Считывание

11 Сложите суммы тестов со знаком «+» в каждой группе Вы получите числовой профиль из 7 цифр Используя программу apiweb или аналитическую таблицу профилей вы получите результат идентификации – название таксона Пример: API Staph, = S. aureus Считывание

12 API идентификация Факторы, которые влияют на результат: Количество тестируемых бактерий (инокулят) Тип питательной среды Температура инкубации Необходима стандартизация всех процессов (инокулят, среда, инкубация)

13 Стандарты Мак Фарланда Серия стандартов с различной мутностью (различные концентрации BaSO4) Стандарт Концентрация бактерий ампул Готовя суспензию, необходимо сравнивать ее со стандартами Российские стандарты мутности не соответствуют стандартам Мак Фарланда!!!

14 VPB - NIT 2 - XYL – VP2 – HER Хранить в темноте : FB - FVB - ZYM B – NIN - PYZ - James 2 - 8°C VPA - VP1 - NIT 1 - Zn BCP - TDA - ZYM A °C Открытые реактивы должны храниться не более 1 месяца Оберните флаконы алюминиевой фольгой Дополнительные реагенты

15 apiweb

16 apiweb apiweb – это программа, позволяющая интерпретировать результаты, полученные на стрипах для идентификации API® и ID®: - internet-версия - apiweb stand alone on CD: программа на диске

17 apiweb internet-версия необходим доступ в internet Вы получаете персональный логин и пароль обновление базы данных происходит постоянно системные требования: операционная система MS Windows 98/2000/XP/NT, интернет-браузер MS Internet Explorer 5.5 или выше, оперативная память RAM 128Mb минимум apiweb stand alone on CD: программа на диске программа автономно устанавливается на Ваш компьютер обновление базы данных - по мере выпуска новой версии диска системные требования: операционная система MS Windows 2000/XP/NT, интернет-браузер MS Internet Explorer 5.5 или выше, оперативная память RAM 128Mb минимум

18 - Выберите стрип, который Вы использовали

19 -Введите числовой профиль или результаты тестов в виде +, -, ? -Нажмите "Подтвердить" -В случае ошибки нажмите "Сброс" и введите данные снова

20 Результат включает: -сообщение о качестве идентификации (Превосходная, Очень хорошая, Хорошая, Приемлемая, Низкая дискриминация, Неприемлемый профиль….) -% ИД – индекс отражает, насколько полученный биохимический профиль соответствует таксону относительно всех остальных таксонов базы данных -Т – индекс отражает, насколько полученный профиль соответствует типичному набору реакций для данного таксона (насколько типичен данный штамм) - Тесты против (нетипичные результаты: в скобочках % "+" реакции) -Программа всегда предлагает следующий таксон (таков алгоритм): см. индексы % ИД, Т, Тесты против, дополнительные тесты.

21 -Когда для окончательной идентификации необходимы дополнительные тесты, программа предлагает дополнительные тесты

22 -Если у Вас сомнения, положительна реакция или отрицательна (цвет можно интерпретировать неоднозначно), нажмите "Коррекция цвета", чтобы посмотреть, как должны выглядеть отрицательные и положительные реакции

23 apiweb -Сравните картинки.

24 Что такое API? Изящное решение биохимического ряда Большой спектр идентификации Готовый продукт Не надо: готовить среды, субстраты, мыть посуду…. экономия времени и средств Стандартизованные реакции воспроизводимый результат Компактность Удобство хранения работы утилизации Возможность поставить большое количество реакций идентифицировать большое количество видов Легкость интерпретации результата