Концепция X-класса анализаторов: Новые клинические возможности расширенной панели тестов 3 апреля, Москва, Россия Roche / SYSMEX Cеминар пользователей гематологических анализаторов Х-серии Tanja Tornow Head of Product Management Haematology Sysmex Europe

2X-CLASS: extended parameters of clinical valueTanja Tornow Все анализаторы имеют одинаковые функции, черты, технологию, реагенты и систему флагов Отличия заключаются только в числе каналов, скорости и способе загрузки проб XE-2100 Концепция X-класса XE-5000 XS-1000i & XS-800i XT-2000i & XT-1800i

3X-CLASS: extended parameters of clinical valueTanja Tornow Линейка анализаторов Sysmex X-класса: Гематология сегодня – это проточная цитофлюориметрия XE-5000: Case Manager 76 параметров, 8 скатеррограмм, 2 гистограммы (вкл. NRBC, расширенное меню для RET, IG, HPC, IPF) Отдельный режим для анализа жидкостей тела Самая быстрая система в мире: 150 проб/час. XE-2100: 45 параметров, 7 скатерограмм, 2 гистограмм (вкл. NRBC, расширенное меню RET, IG, HPC, IPF) Самая быстрая система в мире: 150 проб/час.

4X-CLASS: extended parameters of clinical valueTanja Tornow Линейка анализаторов Sysmex X-класса: Гематология сегодня – это проточная цитофлюориметрия XT-2000i и XT-1800i: 33 или 26 параметров (вкл. расширенное меню RET, IG) 5 или 2 скатеррограммы, 2 гистограммы Производительность 80 проб/час в любом выбранном режиме в т.ч. RET XS-1000i и XS-800i: 24 параметра (+ IG#, IG%) 1 скатеррограмма, 3 гистограммы 60 проб/час.

5X-CLASS: extended parameters of clinical valueTanja Tornow Систематизация X- класса DM96 SP-1000i SIS XS-1000i XE дополнительное программное обеспечение: мастер-модули XT-2000i XE-5000

6X-CLASS: extended parameters of clinical valueTanja Tornow Высокие технологии – проточная цитофлюориметрия Уникальная технология: дифференцировка лейкоцитов посредством определения концентрации нуклеиновых кислот различных вида информации для каждой клетки: Размер Сложность внутренней структуры Содержание ДНК/РНК

7X-CLASS: extended parameters of clinical valueTanja Tornow Дифференцировка лейкоцитов методом проточной цитофлюориметрии: Что особенного? Мы получаем много информации о ядре и гранулярности клетки, используя прямое, боковое светорассеивание лазерного луча и импедансный метод. Почему мы определяем содержание нуклеиновых кислот в клетке?

8X-CLASS: extended parameters of clinical valueTanja Tornow Для корректной дифференцировки требуется взгляд внутрь клетки

9X-CLASS: extended parameters of clinical valueTanja Tornow Почему нуклеиновые кислоты? Повышенное содержание нуклеиновых кислот в клетках крови указывает на их метаболическую активность: 1.В ядре Митотическая активность увеличивается содержание РНК/ДНК 2.В цитоплазме Синтез белка увеличивается содержание РНК

10X-CLASS: extended parameters of clinical valueTanja Tornow Почему флюоресценция в приборах X-класса? Повышенное содержание нуклеиновых кислот в клетке (ДНК или РНК) эквивалентно повышенному флюоресцентному сигналу.

11X-CLASS: extended parameters of clinical valueTanja Tornow Преимущества проточной цитофлюориметрии Количественное определение активированных В-лимфоцитов (OTHER) бысто информирует нас об иммунном ответе в случае реактивных заболеваний (например, вирусных инфекциях.) Клетки, продуцирую щие антитела Напр. Плазматические клетки Напр. Лимфоплазмоциты Напр. Иммуноциты

12X-CLASS: extended parameters of clinical valueTanja Tornow Включая системные гематологические болезни Параметр «Others» дает превосходную корреляцию с результатами определения активированных В-лейкоцитов, полученных путем фенотипирования и микроскопии Linssen J. et al., 2007: Cytometry Part B (Clinical Cytometry) 72B,

13X-CLASS: extended parameters of clinical valueTanja Tornow Преимущества счета параметра OTHER Детекция второй фазы иммунного ответа, осуществляемого активированными В- лимфоцитами Оценивается число активированных В- лимфоцитов, что особенно важно у новорожденных: предсказание результата переносимой инфекции выздоровление после инфекции или сепсиса

14X-CLASS: extended parameters of clinical valueTanja Tornow Преимущества флюоресценции Размер клеток не имеет значения в relevant DIFF канале. Нет интерференции фрагментами клеток : Клетки, не содержащие нуклеиновые кислоты, такие как зрелые эритроциты не окрашиваются НЕТ интерференции при наличии эритроцитов, устойчивых к лизису Неклеточные структуры, например пузырьки воздуха не определяются Фоновый счет всегда очень низкий Это особенно важно при анализе ликвора Фрагменты клеток

15X-CLASS: extended parameters of clinical valueTanja Tornow Преимущества флюоресценции Количественное определение незрелых гранулоцитов (IG) как исследовательский параметр быстро информирует о наличии бактериальной или паразитарной инфекции или воспалении Промиелоцит Миелоцит Метамиелоцит

16X-CLASS: extended parameters of clinical valueTanja Tornow IG Мастер: Незрелые гранулоциты (IG# and IG%) 1. Уменьшает потребность в мазках 2. Точный мониторинг терапии 3. Улучшенная детекция воспалительных заболеваний 4. Полезен в прогнозе сепсиса Расширение аналитических возможностей с помощью дополнительных программ для XE-2100 и XT-серии

17X-CLASS: extended parameters of clinical valueTanja Tornow IG Мастер – в чем отличие от стандартного программного обеспечения? НЕТ фиксированных границ в скатерограмме, надежный и хорошо воспроизводимый счет IG# и IG% с помощью гибкого алгоритма Диагностический параметр, может передаваться в ЛИС, мониторируется КК, распечатывается и отображается в результатах пациента Флаг IG? заменен на IG present Диапазон нормальных значений может определяться пользователем

18X-CLASS: extended parameters of clinical valueTanja Tornow Счет IG – Что конкретно считается?

19X-CLASS: extended parameters of clinical valueTanja Tornow Корреляция счета IG на ХЕ-2100 при сравнении с мануальной дифференцировкой промиелоцитов, миелоцитов и метамиелоцитов 400 образцов крови составила r = 0.78 Корреляция счета IG на XE-2100 при сравнении с референсным методом проточной цитофлюориметрии составила r = 0.96 Briggs C. et al., 2003: Lab Hematol 9,

20X-CLASS: extended parameters of clinical valueTanja Tornow Точный мониторинг терапии Т.к. IG являются патологическими клетками, у пациентов с неизвестным диагнозом необходимо с помощью микроскопии мазка определить их морфологию. Как и при автоматической дифференцировке лейкоцитов, НЕ нужно делать мазок для проверки автоматического счета IG у пациентов с известным диагнозом. Точный мониторинг эффективности терапии у пациентов с высоким содержанием IG, например при химиотерапии у пациентов с AML

21X-CLASS: extended parameters of clinical valueTanja Tornow SIRS Синдром системного воспалительного ответа без инфекции Синдром системного воспалительного ответа (SIRS): c инфекцией или нет?

22X-CLASS: extended parameters of clinical valueTanja Tornow IG при сепсисе – SIRS - гипертермия Barbara Montag, Axel Nierhaus Klinik und Poliklinik für Anästhesiologie Direktor: Prof. Dr. med. Dr. h.c. J. Schulte am Esch Группа 1 Группа 3 Группа 2 Сепсис Экстракорпоральная циркуляция Гипертермия Здоровые доноры Группа 4 n = 40 n = 27 n = 8 n = 38 Группа 5 Тяжелый сепсис n = 32

23X-CLASS: extended parameters of clinical valueTanja Tornow IG присутствуют у пациентов с сепсисом Результат: Содержание IG не увеличивается при SIRS (ЭКК) При гипертермии и SIRS значения IG имеют незначительное увеличение group 21 1,0,8,6,4,2 0,0 IG_1 day 1 IG_2 day 2 IG_3 day 3 Сепсис ECC

24X-CLASS: extended parameters of clinical valueTanja Tornow Временной мониторинг IG у септических пациентов Результат: Уменьшение содержания IG является хорошим прогностическ им признаком Пациенты без GM (ликвор)

25X-CLASS: extended parameters of clinical valueTanja Tornow Заключение Подсчет IG является быстрым и точным инструментом для мониторинга эффективности различных видов терапии у пациентов с инфекцией или лейкемией. При SIRS присутствие IG может указывать на инфекцию с начинающимся сепсисом Чем раньше увеличиваются значения IG у септических пациентов, тем меньше шансов на выживание Снижение значений IG является крайне важным для выживания пациентов с сепсисом.

26X-CLASS: extended parameters of clinical valueTanja Tornow Расширение аналитических возможностей с помощью дополнительных программ для XE-2100 и XT-2000i Доступно только при наличии RET-канала RET Мастер: новый параметр RET-He (Эквивалент гемоглобина ретикулоцитов) Для оценки гемоглобинизации ретикулоцитов RET-He = «качество» эритропоэза RET# и RET% = «количество» эритропоэза

27X-CLASS: extended parameters of clinical valueTanja Tornow Параметр RET-H e

28X-CLASS: extended parameters of clinical valueTanja Tornow Уровни автоматической детекции эритропоэза в RET- канале Первый уровень: Зрелые эритроциты Параметры: RBC / HCT / MCV / MCH / MCHC Мониторинг: «история» концентрации гемоглобина за последние 120 дней Второй уровень: Ретикулоциты Параметры: RET#, RET%, IRF Мониторинг: активность эритропоэза путем оценки абсолютного количества развивающихся эритроцитов Третий уровень: Информация о функции эритроцитов Параметр: RET-H e (гемоглобинизация ретикулоцитов в пг) Мониторинг: активность эритропоэза путем оценки содержания гемоглобина в развивающихся эритроцитах

29X-CLASS: extended parameters of clinical valueTanja Tornow Информация о функции RBC в RET- канале Норма RET-He около 35 пг Аномалия – анемия RET-He около 22 пг

30X-CLASS: extended parameters of clinical valueTanja Tornow Успешное лечение функционального железодефицита RET-He 21.9 пг RET-He 29.6 пг RET-He 31.3 пг RET-He – единственный параметр, который позволяет убедиться в эффективности терапии железодефицита уже через 3 дня, т.к. отражает появление ретикулоцитов с нормальным содержанием гемоглобина.

31X-CLASS: extended parameters of clinical valueTanja Tornow Функциональный железодефицит Ретикулоцитарные параметры помогают определить железодефицит, когда использование классических биохимических тестов не приемлимо

32X-CLASS: extended parameters of clinical valueTanja Tornow Распределение Fe в организме Всего: 4.2 г (мужчины) 3.5 г (жещины) - только связанное с белком Функциональное железо: 65 % Гем 5 % Миоглобин 0.2 % гем-содержащие ферменты 10 % негемовое железо 80 % от общего количества Запасы Fe: Ферритин, гемосидерин 20 % от общего количества (у мужчин) Транспортное Fe: Трансферрин (=Fe в дороге) 0.1 % от общего количества Andrews N: New Engl J Med 1998; 341: 1986; modified

33X-CLASS: extended parameters of clinical valueTanja Tornow 5 причин железодефицита Потребление в низком количестве: мальнутриция (вегетарианцы, пожилые люди) Мальнутриция: Хронические гастриты, частичная резекция желудка, синдром Крона, кальций, танины (в чае или кофе) Увеличенная потребность: беременные, новорожденные, дети Потеря крови: Менструации, хирургические вмешательства, роды, язва, etc... Функциональный железодефицит: Потребность эритропоэза в железе превышает способность организма освобождать Fe из запасов. (Cavill I: Blood 1993; 82: 1377)

34X-CLASS: extended parameters of clinical valueTanja Tornow Биохимические тесты Железо Ферритин Является очень специфическим тестом при низких значениях. Повышенные значения не специфичны для оценки запасов железа, т.к. могут наблюдаться в острой фазе воспаления Трансферрин Нельзя использовать при воспалении Насыщение трансферрина Не достаточно специфичен при воспалении Растворимый рецептор трансферрина (sTfR) Высокоспецифичен и инертен при воспалении, но не является чувствительным параметром sTfR – log ферритин индекс Индекс отражает статус железа лучше, чем все другие параметры

35X-CLASS: extended parameters of clinical valueTanja Tornow Ферритин sTfR sTfR / log ферритин СРБ 5 mg/L СРБ > 5 mg/L Thomas C+L: Clin Chem 2002; 48: 1066 Спавнение параметров при функциональном железодефиците

36X-CLASS: extended parameters of clinical valueTanja Tornow Thomas C+L: Clin Chem 2002; 48: 1066 Использование RET-параметров в диагностической диаграмме Thomas- Plot много запасы Fe мало Доступное Fe достаточно мало

37X-CLASS: extended parameters of clinical valueTanja Tornow Заключение Все RBC-параметры, включая MCV, MCH, гипохромные RBC дают нам историческую информацию об анемии хронических заболеваний RET%: информация о количестве вновь образованных RBC RET-He: информация о качестве вновь образованных RBC RET-He: первый параметр, который указывает на выздоровление при железодефиците RET-He = 28 пг может рассматриваться как критерий решения (cut-off) при лечении анемии хронических заболеваний

38X-CLASS: extended parameters of clinical valueTanja Tornow Заключение С параметром RET-He возможен прогноз развития анемии: Улучшение состояния и выздоровление Улучшение состояния без полного выздоровления Развитие анемии у здоровых людей Ухудшение состояния у пациентов, страдающих анемией

39X-CLASS: extended parameters of clinical valueTanja Tornow Общее заключение: клиническое использование расширенного меню параметров Расширенное меню дифференцировки лейкоцитов: Ранняя детекция инфекции у пациентов группы риска – HIV, паразитарные инфекции, мальнутриция и т.д.… Улучшенная детекция воспаления (IG) Простой и удобный мониторинг терапии – напр. Химиотерапии или воспаления (IG) Прогноз сепсиса (IG, OTHER) Расширенное меню счета эритроцитов: Анемия: одно из наиболее недооценных заболеваний, широко распространенных по всему миру. Мониторинг анемии хронических заболеваний (RET-He, Delta-He)

40X-CLASS: extended parameters of clinical valueTanja Tornow Спасибо!