Методы исследования CD 4 Исследование по месту лечения с помощью анализатора Alere Pima 1

Цели обучения В конце данного занятия вы сможете: обсудить технические характеристики анализатора Pima; выполнить анализ выгодности затрат при использовании анализатора Pima; сравнить преимущества и недостатки различных методов исследования CD 4; составить перечень преимуществ и недостатков исследования CD 4 по месту лечения. 2

Исследование по месту лечения (POC) Определение понятия «исследование POC»: упрощенный метод тестирования, который выполняется на месте оказания помощи пациенту. При приятии решения об исследовании по месту лечения необходимо учитывать подготовку персонала, специфичность, чувствительность, достоверность, точность метода, возможность документирования, затраты и действующие нормативные акты. 3

Исследование POC Каждый раз, когда для исследования одного и того же аналита от одной популяции пациентов могут использоваться два разных метода или инструмента, необходимо выполнить их сравнительный анализ. Для правильной интерпретации результатов врач должен видеть их в сравнении. 4

Обоснование необходимости POC для определения CD4 Ранее при выполнении анализа на ВИЧ определение CD4 не проводилось. Медицинским центрам и пациентам рекомендовали сделать дополнительный анализ (но они зачастую не являлись для его выполнения). Образцы могут теряться или повредиться при транспортировке, поэтому лучше взять пробу и выполнить исследование на месте.

Обоснование необходимости POC для определения CD4 С целью диагностики ВИЧ тест POC для определения CD4 можно выполнить при первом же посещении пациента, а не направлять его на сдачу пробы и/или анализ в удаленное учреждение.

Анализатор Alere Pima

Портативный, настольный (22 см x 13 см x 16 см). Работает от источника питания В (переменного тока) ИЛИ встроенной перезаряжаемой батареи. Анализатор оснащен миниатюризированной недорогой мультифлуоресцентной системой формирования изображения и камерой с ПЗС-матрицей. Для обеспечения безопасности лаборанта и уменьшения потребности в техническом обслуживании исследование полностью выполняется в картридже.

Контроль качества анализатора Pima Каждый картридж имеет четыре функции контроля качества: 1. Этикетка со штрихкодом позволяет контролировать срок годности и выбор надлежащей программы анализа. 2. Контроль объема пробы осуществляется через окошко для контроля заполнения на картридже. 3. Контроль оптики осуществляется за счет использования гранул пенопласта в толще акрила в нижней части контрольного канала в определенном положении (оптика анализатора автоматически фокусируется на гранулах).

Каждый картридж имеет четыре функции контроля качества: 4. Встроенная проверка реагента для мониторинга стабильности реагента. Ежедневный контроль качества включает анализ двух готовых к использованию картриджей с флуорес- центными микрогранулами для измерения низкого и нормального уровня CD4, он проводится до начала анализа образцов от пациента. Контроль качества анализатора Pima

Тот же, что и при иных видах иммунофенотипической цитометрии (BDB FACSCount, система Guave, Partec). Сухой реагент в картридже смешивается с капиллярной цельной кровью. Принцип определения абсолютного количества клеток T-хелперов с помощью анализатора Alere Pima

Во время инкубации специфические антитела к CD3 и CD4, помеченные двумя разными флуоресцентными красителями, связываются с CD3 и CD4 хелперных Т-лимфоцитов. Излучаемый флуоресцентный свет с разными длинами волн улавливается встроенными камерами, подсчитывается значение абсолютного количества клеток/мкл. Принцип определения абсолютного количества клеток T-хелперов с помощью анализатора Alere Pima

Технические характеристики: анализатор Alere Pima Для тестирования Pima требуется одноразовый тестовый картридж Pima, в котором содержатся сухие реагенты, и анализатор Pima. Небольшой объем пробы в 25 мкл капиллярной или венозной цельной крови помещают в тестовый картридж, который затем закрывается, чтобы не допустить истечения материала образца.

Тестовый картридж Pima вставляется в анализатор, после чего выполняется обработка загерметизированной в нем пробы. В ходе обработки пробы данные сохраняются, анализируются и интерпретируются с помощью программного обеспечения, установленного в анализаторе. По завершении тестирования картридж удаляют из анализатора, а результаты исследования отображают и печатают. Технические характеристики: анализатор Alere Pima

Анализатор Pima откалиброван на заводе и не требует дополнительной калибровки и проверки. Однако рекомендуется проводить еже- дневную проверку рабочих характеристик с помощью набора Pima Bead Standard. Для подтверждения надлежащего функциони- рования анализатора после транспортировки или перемещения можно проверить его с помощью набора Pima Bead Standard. Технические характеристики: анализатор Alere Pima

Технические характеристики Pima Время обработки – 20 минут для фазы теста; – 30 минут для преаналитической и аналитической фазы (от открытия картриджа и сбора пробы до получения результатов); – 45 минут общее время, включая постаналитические действия и среднее время консультирования.

Необходимо ввести идентификационный номер пробы. Результаты можно распечатать. Срок годности и номер партии картриджа указаны в штрихкоде. Набор Pima Bead Standard поставляется для контроля качества низких и нормальных результатов и не требует дополнительных материалов. Может выполняться обнаружение недостаточности объема пробы, полученной от пациента, при этом на экране появится код ошибки. Технические характеристики Pima

Анализ экономической эффективности анализатора Pima для определения CD 4 Недавнее исследование, выполненное в 2010 году, показало, что затраты на материал, работу лаборанта, ежедневный контроль качества и накладные расходы для выполнения одного теста составляют 23,76 доллара США. На следующих слайдах приведены данные, которые были опубликованы в журнале PLoS one. Larson B, Schnippel K, Ndibongo B, Long L, et al. (2012) How to Estimate the Cost of Point-of-Care CD4 Testing in Program Settings: An Example Using the Alere Pima Analyzer in South Africa. Статья

Таблица 1: материальные затраты на исследование POC* Larson B, Schnippel K, Ndibongo B, Long L, et al. (2012) How to Estimate the Cost of Point-of-Care CD4 Testing in Program Settings: An Example Using the Alere Pima Analyzer in South Africa. Журнал «PLoS ONE», статья ПредметЕдиница измерения Долл. США (2010 год) % от общ. стоимости Перчатки неопудренныеСтоимость на исследование $ 0,010,11 % Набор для получения образца Pima Finger Stick (пластырь, марля, проспиртованный тампон, ланцет Pima) Стоимость на исследование$ 0,677,70 % Тестовый картридж PimaСтоимость на исследование $ 7,9691,49 % Печать результатов CD4Стоимость на исследование $ 0,060,69 % Общая стоимость материалов на исследование Стоимость на исследование $ 8,70100 %

Таблица 2: затраты рабочего времени на исследование POC Larson B, Schnippel K, Ndibongo B, Long L, et al. (2012) How to Estimate the Cost of Point-of-Care CD4 Testing in Program Settings: An Example Using the Alere Pima Analyzer in South Africa. Журнал «PLoS ONE» 7(4): e doi: /journal.pone Действие Единицы измерения Мобильная программа Сценарий А мин. время Сценарий В интенс. работа Консультирование перед тестом (тест на ВИЧ) Минут на пациента 505 Консультирование после теста (тест на ВИЧ) Минут на пациента 5110 Дополн. консультирование после получения результатов POC Минут на пациента5110 Выполнение исследования POC CD4 Минут на пациента Общее время Минут на пациента Затраты рабочего времени на исследование POC CD4 (в часах) Часов на пациента0,50,200,83

При подсчете стоимости учтена заработная плата персонала Стоимость за час работы и за исследование на основе разных уровней заработных плат. 4,4–12,3 доллара США в зависимости от должности сотрудника. Larson B, Schnippel K, Ndibongo B, Long L, et al. (2012) How to Estimate the Cost of Point-of-Care CD4 Testing in Program Settings: An Example Using the Alere Pima Analyzer in South Africa. Журнал PLoS ONE 7(4): e doi: /journal.pone

Таблица 4: стоимость ежедневного контроля качества Larson B, Schnippel K, Ndibongo B, Long L, et al. (2012) How to Estimate the Cost of Point-of-Care CD4 Testing in Program Settings: An Example Using the Alere Pima Analyzer in South Africa. Журнал «PLoS ONE» 7(4): e doi: /journal.pone Единицы измеренияВыполняется медсестрой Время на запуск прибора каждый день (включение прибора и выполнение проверок) Часов в день0,5 Стоимость в час Стоимость/час (мобильная программа)$ 14,67 Стоимость контроля качества во время использования прибора в день Стоимость в день $ 7,33 Стоимость ежедневного контроля качества с набором Pima bead Standard (после вскрытия можно использовать в течение 6 месяцев) Стоимость на картридж $ 41,60 Количество дней работы в месяцДни16 Количество рабочих дней в 6 месяцахДней в 6 месяцах96 Стоимость набора Pima Bead Standard в пересчете на день Стоимость в день$ 0,43 Общая стоимость контроля качества в день Стоимость в день (мобильная программа)$ 7,77 Стоимость в день (младшая медсестра)$ 4,84 Стоимость в день (медсестра)$ 8,28 Стоимость в день (квалифицированная медсестра) $ 12,73

Этап 1. Предварительные затраты на оборудование Прибор для тестирования$6688,00 Принтер$490,50 Сумка$252,78 Общая стоимость оборудования$7431,28 Оборудование имеет гарантию сроком 1 год Через 1 год, ежегодное плановое обслуживание $1200,00 Этап 2. Текущая стоимость оборудования со страховкой План действий Срок службы оборудования в годах5432 Количество лет, на которое приобретена страховка 4321 Текущая стоимость оборудования со страховкой 0%$ $ $ 9831$ %$11 686$ $ 9662$ %$11 408$ $ 9571$ 8542

Этап 3. Эквивалентная месячная стоимость оборудования Разные сценарии Срок службы в месяцах => Годовая ставка дисконта %$ 203,85$ 299,81$ 273,08$ 359,63 5 %$ 220,53$ 246,39$ 289,58$ 376,15 8 %$ 231,31$ 256,90$ 299,92$ 386,33 Этап 4. Эквивалентная дневная стоимость оборудования Количество дней, используемое для расчета среднего значения в месяц (см. таблицу 4) 16 Срок службы оборудования и ставки дисконта Срок службы в месяцах => Ставка дисконта %$ 12,74$ 14,36$ 17,07$ 22,48 5 %$ 13,78$ 15,40$ 18,10$ 23,51 8 %$ 14,46$ 16,06$ 18,75$ 24,15

Сравнительное исследование анализаторов Pima, BD FACSCount и BD FACSCan Методология FACSCount считается эталонным методом подсчета CD4. Для FACSCount и FACSCan используется тот же принцип анализа образца цельной крови для количественного определения CD4, что и для Alere Pima. Два отдельных сравнительных исследования, проведенные в 2011 г. и опубликованные в 2012 г. (исследования PL0S One и синдром приобретенного иммунодефицита).

Выполняли сравнение методик исследования на определенных количественных уровнях CD4, выбранных с учетом клинической значимости и значимости для принятия решений. – При значениях CD4+ 0–350 выявлена близкая корреляция результатов между тремя приборами; для анализатора Pima обнаружена отрицательная разность средних значений -49 клеток/мкл. – При значениях CD4+ >350 также выявлена высокая корреляция, но с большей отрицательной разностью средних по сравнению с системами FACSCount (-70,7 клетки) и FACSCan (-55,5 клетки). Сравнительное исследование анализаторов Pima, BD FACSCount и BD FACSCan

Сравнение с BD FACSCalibur: коэфф. угла наклона 0,95 корреляция Пирсона = 0,96 27 Идентичность Регрессионный анализ Passing-Bablok (l) (23,68 + 0,95x) График регрессионного анализа Passing-Bablok Pima CD4 [клеток/мкл] BD FACSCalibur [клеток/мкл]

Анализатор Pima в сравнении с BD FACSCount (эталонный метод) Тест Pima CD4Чувствительность (95 % ДИ) Специфичность (95 % ДИ) NPV (95 % ДИ) PPV (95 % ДИ) Кровь из пальца < 250 клеток/мкл 0,963 (0,791–0,998) 0,866 (0,798–0,914) 0,992 (0,951–0,999) 0,565 (0,412–0,708) Кровь из пальца < 300 клеток/мкл 0,932 (0,803–0,982) 0,795 (0,715–0,859) 0,972 (0,915–0,993) 0,603 (0,477–0,717) Венозная кровь < 250 клеток/мкл 0,943 (0,795–0,990) 0,854 (0,789–0,901) 0,986 (0,947–0,998) 0,569 (0,433–0,696) Венозная кровь < 300 клеток/мкл 0,982 (0,892–0,999) 0,753 (0,675–0,818) 0,991 (0,945–0,999) 0,598 (0,490–0,697) ДИ = доверительный интервал, NPV = прогностическая значимость отрицательного результата, PPV = прогностическая значимость положительного результата Doi: /journal.pone t003

Преимущества: исследование POC для определения CD4 Исследование POC для определения CD4 с целью диагностики ВИЧ можно выполнить при первом посещении пациента, не направляя его на сдачу пробы и/или тест в другое учреждение. Результаты сравнимы с эталонным методом (BD FACSCount). Меньшие начальные затраты по сравнению с другими системами CD4.

Стоимость регистрируемого теста такая же, как и других систем CD4. Для обучения персонала требуется всего около 2 часов. Можно использовать образец капиллярной или венозной крови. Общая продолжительность исследования 45 минут. Преимущества: исследование POC для определения CD4

Появление заблуждения о безошибочности метода. Качество образцов: исследования показывают, что зачастую взятие крови из пальца и тест приходится повторять, что увеличивает затраты времени лаборанта, стоимость и общую продолжительность анализа. Нелабораторный персонал может не выполнить требования надлежащей лабораторной практики. Недостатки: исследование POC для определения CD4

Требует подготовки и наблюдения. Одноразовые или расходные материалы от единственного поставщика могут обойтись дороже. Требуется наличие запасных деталей и доступная техническая поддержка. Недостатки: исследование POC для определения CD4

Резюме Alera Pima: Первый на рынке анализатор POC для выполнения теста на CD4+ T-лимфоциты. Обеспечивает подсчет абсолютного количества CD4+ T-лимфоцитов с хорошей воспроизводи- мостью, получаемый результат имеет хорошую степень корреляции с результатами, полученными стандартными системами проточной цитометрии на основе определения гранул или с двумя платформами. 33

Резюме Alera Pima: Стоимость регистрируемого теста приблизительно такая же, как и у других систем, а начальные затраты намного ниже. Анализ CD4+ необходимо использовать в сочетании с экспресс-анализом на ВИЧ и клинической картиной пациента. Следует улучшать методики ведения инфекции ВИЧ посредством предоставления пациентам с диагнозом ВИЧ возможности выполнения исследования CD4. 34