ЛЕПТОСПИРОЗ

Лептоспироз животных Лептоспироз (синонимы: болезнь Васильева-Вейля, инфекционная желтуха, японская 7-дневная лихорадка, водная лихорадка, покосно-луговая лихорадка, собачья лихорадка и др. (leptospirosis, Weits disease, canicol fever – англ.) - острая инфекционная болезнь, вызываемая различными серотипами лептоспир, характеризуется лихорадкой, симптомами общей интоксикации, поражением почек, печени, нервной системы. При тяжелых случаях наблюдается желтуха, геморрагический синдром, острая почечная недостаточность и менингит.

Leptospira Возбудитель относится к роду Leptospira, включающий в себя только один вид Leptospira interrogans. Вид подразделяется на два комплекса - паразитический (Interrogans) и сапрофитный (Biflexa). В каж- дом комплексе по антигенным свойствам выделяются серотипы, в настоящее время известно около 200 патогенных серотипов и около 60 - сапрофитных. Серотипы с общи- ми антигенами объединяют в серологичес- кие группы. Патогенные серотипы объединены в 23 серогруппы.

Источник инфекции: Источниками инфекции являются различные животные - лесная мышь, полевка, водяные крысы, землеройки, крысы, собаки, свиньи, крупный рогатый скот и др. Человек, больной лептоспирозом, источником инфекции не является. Человек, больной лептоспирозом, источником инфекции не является.

Факторы передачи инфекции: Передача инфекции у животных происходит через воду и корм. Заражение человека чаще всего происходит при контакте кожи и слизистых оболочек с водой, загрязненной выделениями животных (при купании). Употребление продуктов питания, кормов, загрязнённых экскрементами грызунов. Заболевание носит профессиональный характер.

Патогенез болезни Воротами инфекции чаще является кожа. Для проникновения лептоспир достаточно малейших нарушений целостности кожи. В связи с этим заражение наступает даже при кратковременном контакте с водой, содержащей лептоспиры. Возбудитель может проникать также через слизистые оболочки органов пищеварения и конъюнктиву глаз. Дальнейшее продвижение лептоспир происходит по лимфатическим путям. Ни в лимфатических сосудах, ни в регионарных лимфатических узлах воспалительных явлений не развивается. Барьерная роль лимфатических узлов выражена слабо. Лептоспиры легко их преодолевают и заносятся в различные органы и ткани, в которых происходит размножение и накопление лептоспир. По времени это совпадает с инкубационным периодом (от 4 до 14 дней). Начало болезни (обычно острое) связано с массивным поступлением лептоспир и их токсинов в кровь (первые 2 недели – до 30 дней) Вторичная массивная бактериемия приводит к обсеменению различных органов, где продолжается размножение возбудителей. Лептоспиры, их токсины и продукты обмена приводят к выраженной интоксикации, которая особенно быстро нарастает в первые 2-3 дня от начала болезни. Лептоспиры обладают гемолизином, что приводит к разрушению (гемолизу) эритроцитов. Особое место в патогенезе лептоспироза занимает поражение почек. В большинстве случаев летальные исходы связаны с развитием острой почечной недостаточности (уремическая кома). Она возникает в результате непосредственного действия лептоспир и их токсических продуктов жизнедеятельности на клеточную стенку, приводит к тяжелым повреждениям эпителия почечных канальцев, коркового и подкоркового вещества почек, что приводит к нарушению процессов мочеобразования. Именно в почках наиболее длительно сохраняются лептоспиры (до 40 дней).

Диагноз на лептоспироз Диагноз на лептоспироз устанавливают комплексно на основании: –эпизоотологических данных; – клинических признаков; – патологоанатомических изменений; – результатов лабораторных исследований. исследований.

Методы лабораторных исследований: ПЦР - полимеразная цепная реакция ПРЯМОЙ метод диагностики; Выявление уникального для лептоспир фрагмента ДНК (РНК); Максимальная чувствительность; Высокая специфичность;

Строение молекулы ДНК Структура молекулы ДНК была открыта Уотсоном и Криком в 1953 году. Структура молекулы ДНК была открыта Уотсоном и Криком в 1953 году. ДНК построена в виде двойной спирали, состоящей из двух полинуклеотидных цепей. ДНК построена в виде двойной спирали, состоящей из двух полинуклеотидных цепей. Каждый нуклеотид состоит: Каждый нуклеотид состоит: - азотистого основания (аденин, тимин, гуанин, цитозин); - азотистого основания (аденин, тимин, гуанин, цитозин); - пятиуглеродного сахара (дезоксирибоза); - пятиуглеродного сахара (дезоксирибоза); - остатка фосфорной кислоты. - остатка фосфорной кислоты.

Виды биологического материала, используемого для ПЦР-диагностики Виды биологического материала, используемого для ПЦР-диагностики Цельная кровь (сыворотка, плазма)Цельная кровь (сыворотка, плазма) Моча, сперма, носовая, влагалищная, препуциальная слизьМоча, сперма, носовая, влагалищная, препуциальная слизь ФекалииФекалии Слюна, смывы с конъюнктивы, из носовой полости, с прямой кишкиСлюна, смывы с конъюнктивы, из носовой полости, с прямой кишки Молоко, молозивоМолоко, молозиво Патологический материалПатологический материал Продукты питания, кормаПродукты питания, корма Объекты внешней средыОбъекты внешней среды Бактериальные и клеточные культуры, смывы с питательных средБактериальные и клеточные культуры, смывы с питательных сред

Основная проблема при использовании ПЦР в лабораторной диагностике – - высокий риск контаминации реагентов и биологического материала продуктами ПЦР и получение ложноположительных результатов

Решение проблемы - Детекция продуктов амплификации методом гибридизационно- флуоресцентной детекции в режиме «реального времени» - REAL-TIME PCR

Преимущества ПЦР c гибридизационно-флуоресцентной детекцией Минимальный риск контаминации Специфичность Высокая скорость анализа Удобный формат анализа данных Исключение субъективной интерпретации результатов Возможность генотипирования микроорганизмов Возможность количественного анализа

Приборы для ПЦР с детекцией фрагментов амплификации в режиме реального времени ABI Prism 7000 Applied Biosystems, США Rotor GeneCorbett Recearch,Австралия iCycler iQ Bio Rad, США MX3000 США Smart Cycler, Cepheid, США

Основные характеристики ПЦР Высокая чувствительность, основанная на экспоненциальном принципе накопления продукта. Высокая специфичность, основанная на выявлении уникальных для микро-(макро)- организма участков генетического материала. Метод прямого выявления возбудителя, основанный на универсальности способа хранения и передачи генетической информации живой материи

Погрешности ПЦР-диагностики Ложноположительные результаты Причина: контаминация проб и помещений лаборатории; низкоспецифичные тест-системы; Ложноотрицательные результаты Влияют : 1. преаналитические процедуры (условия отбора, транспортировки, хранения и подготовки проб); 2. потери ДНК на этапе выделения; 3. качество работы амплификатора; 4. низкочувствительные тест-системы