Содержание Туберкулез Историческая справка Патогенные микобактерии Морфологические свойства Культивирование Биохимические свойства Устойчивость Токсигенность Антигенная структура Патогенез Диагностика Серологическая и аллергическая диагностика Особенности иммунитета и аллергия Туберкулез КРС Клинические признаки Биопроба Паталогоанатомические изменения Дигностика Материал для исследования Туберкулез свиней и лошадей, мелкого рогатого скота и птиц Лаболаторная диагностика Биопроба Материал для исследования

Туберкулез Туберкулез. Это хроническое инфекционное заболевание до­машних и диких животных, в том числе птиц, а также человека. Характеризуется образованием туберкулов (бугорков) в различ­ных органах и тканях. Наиболее восприимчивы к туберкулезу крупный рогатый скот, свиньи и куры.

Туберкулез легких

Туберкулез печени

Историческая справка

Ещё задолго до открытия природы инфекционных заболеваний предполагали, что туберкулёз заразная болезнь. В вавилонском Кодексе Хаммурапи было закреплено право на развод с больной женой, у которой имелись симптомы лёгочного туберкулёза. В Индии, Португалии и Венеции были законы, требующие сообщать о всех подобных случаях. болезньКодексе Хаммурапи В 1819 г. Рене Лаэннек предложил метод аускультации легких; это имело большое значение в разработке методов диагностики туберкулеза.1819аускультации

В середине XIX в. французский морской врач Б. Вильмен наблюдал распространение туберкулёза на корабле от одного больного матроса. Для доказательства инфекционной природы Вильмен собирал мокроту больных и пропитывал ею подстилку для морских свинок. Свинки заболевали туберкулёзом и умирали от него. Вильмен пришел к выводу, что туберкулёз – заразная («вирулентная») болезнь. Инфекционную природу туберкулёза подтвердил также патолог Ю. Конгейм в 1879 г. Он помещал кусочки органов больных туберкулёзом в переднюю камеру глаза кролика и наблюдал образование туберкулёзных бугорков. 1879

Туберкулез почек.

В 1852 году Н.И. Пирогов обнаружил в туберкулёзном бугорке гигантские клетки.1852Н.И. Пироговклетки В 1882 г. в Германии Роберт Кох после 17 лет работы в лаборатории открыл возбудителя туберкулёза, которого назвали бациллой Коха. Он обнаружил возбудителя при микроскопическом исследовании мокроты больного туберкулёзом после окраски препарата везувином и метиленовым синим. Впоследствии он выделил чистую культуру возбудителя и вызвал ею туберкулёз у подопытных животных. В настоящее время фтизиатры пользуются термином МБТ (микобактерия туберкулёза).1882Роберт Кохвезувином метиленовым синимфтизиатры В 1882 году итальянский врач К. Форлани предложил метод лечения туберкулёза посредством искусственного пневмоторакса. В России этот метод впервые применил А.Н. Рубель в 1910 г.1882пневмоторакса1910 В 1882 – 1884 годах Ф. Циль и Ф. Нельсен предложили эффективный метод окраски кислотоустойчивых микобактерий туберкулёза эффективный метод В 1887 г. в Эдинбурге открыт первый противотуберкулёзный диспансер.1887Эдинбурге диспансер

В 1890 г. Кох впервые получил туберкулин, который описал как «водно- глицериновую вытяжку туберкулёзных культур».1890 туберкулин

В 1912 г. чешский патологоанатом А. Гон описал обызвествленный первичный туберкулёзный очаг (очаг Гона).1912 В 1919 г. французский микробиолог А. Кальметт и ветеринарный врач К. Герен создали вакцинный штамм микобактерии туберкулёза для противотуберкулезной вакцинации людей. Штамм был назван «бациллы Кальметта-Герена (BCG – Bacilles Calmette – Guerin). Впервые вакцина БЦЖ была введена новорождённому ребёнку в 1921 г.1919бациллы Кальметта-Герена (BCG – Bacilles Calmette – Guerin)БЦЖ1921

В 1943 г. З. Ваксман совместно с Шацу и Бужи получил стрептомицин – первый противомикробный препарат, который оказывал бактериостатическое действие на микобактерии туберкулёза.1943З. Ваксман

Туберкулез носовой полости.

С 1954 г. во фтизиатрии начали применять парааминосалициловую кислоту (ПАСК), тибон, препараты изоникотиновой кислоты (изониазид, фтивазид, салюзид, метазид).1954фтизиатрии парааминосалициловую кислоту тибонизоникотиновой кислоты В начале 1970-х г. началось применение рифампицина и этамбутола.1970-х рифампицинаэтамбутола К концу XX века спектр препаратов, применяемых во фтизиатрии, значительно расширился.

Первые санатории. Первый шаг к лечению туберкулеза сделал в XIX веке страдающий от этой болезни студент из Силезии Герман Бремер (Hermann Brehmer, 1826– 1889). Врачи посоветовали ему сменить климат на более «здоровый», Бремер отправился в путешествие по Гималаям и вернулся выздоровевшим. После этого он занялся медициной и в 1854 году представил диссертацию с сенсационным на то время названием: «Туберкулез излечимая болезнь». В 1859 году Бремер построил в Грёберсдорфе (Groebersdorf) заведение, в котором пациенты питались качественными продуктами и должны были подолгу находиться на свежем воздухе среди хвойных деревьев. Это заведение стало первым санаторием.Hermann BrehmerГималаямGroebersdorf

Роберт Кох.

Роберт Кох открыл бактерии, ответственные за заражение человека сибирской язвой, туберкулезом и холерой. Постулаты Коха (последовательность методов выявления болезнетворных бактерий) до сих пор остаются руководством к действию для современных эпидемиологов и микробиологов

6 ПАТОГЕННЫЕ МИКОБАКТЕРИИ Общая характеристика. Микобактерии это микроорганизмы, относящиеся к классу Actinomycetales, характеризующиеся спо­ собностью к ветвлению и имеющие ряд сходных признаков с ак-тиномицетами. Микобактерии не образуют мицелия, тела имеют палочковидную форму, они ветвятся, распадаясь также на сфери­ческие формы. Микобактерии обитают в различных местах: в почве, воде, ро­товой полости, обнаружены в молоке. По классификации Bergey (1990) они отнесены к роду Mycobacterium (от лат. Mycos гриб).

Микобактерии вызывают туберкулез многих видов животных, в том числе птиц, и человека, паратуберкулезный энтерит рогатого скота, некроз и поражение тканей, называемое микобактериозами.

К микобактериям относятся около 50 видов. По биологической классификации микобактерии подразделяют на кислотоустойчи­вые сапрофиты (Mycobacterium phlei, M.smegmatis, M. lacticola), возбудители болезней хладнокровных (М. fortuitum, M. thamno- pheos, M. marimum, М. poikilothermorum), возбудители болезней человека (М. tuberculosis, M. bovis, M. leprae, M. ulcerans, M. africans), возбудители болезней крупного рогатого скота (М. bovis, М. paratuberculosis), возбудители болезней птиц (М. avium), возбу­дители болезней грызунов (М. mikroti, M. leprae murium). Род Mycobacterium включает также атипичные микобактерии, отличающиеся от сапрофитов и истинных патогенных микробак­терий рядом признаков.

Размеры М. tuberculosis: длина1,5...3,5 мкм, диаметр 0,4 мкм; М. bovis: длина 2,5...3 мкм, диаметр 0,6 мкм; М. avium: длина мкм, диаметр 0,3 мкм.

В отличие от бактерий клеточная стенка микобактерий имеет положительный заряд и состоит из трех слоев: а) внутреннего, толщиной 0,1 нм, связанного с цитоплазматической мембраной; б) среднего, толщиной 0,05 нм; в) наружного, толщиной 0,1 нм, такого же плотного, как и внутренний. Общая толщина клеточной стенки микобактерий составляет примерно 0,25 нм.

Цитоплазма. Цитоплазма характеризуется значительными морфологическими вариациями. У молодых клеток она гомогенная и вся клетка находится в состоянии тургора. В клетках более поздней степени развития цитоплазма содержит более или менее компактные уплотнения и светлые зоны. Цитоплазма это типичная коллоидная система.

Гранулы. Гранулы (зерна) представляют собой внутриклеточные тела, ха­рактерные для микобактерий. Гранулированные массы бывают двух типов: а) большие и плотные макрогранулы; б) микрогра­нулы. Размеры гранул колеблются от С,3...0,4 до 1 мкм. Гранулы имеют сложный цикл развития.

Вакуоли. Вакуоли обнаруживаются в молодых и старых микобактериях в виде четко ограниченных светлых зон. Имеется два типа вакуолей: а) окруженные собственной, хорошо организованной стенкой; б) отличающиеся от цитоплазмы лишь неодинаковым химическим составом. Их рассматривают как капельки водорастворимых продуктов обмена.

Ядерный аппарат. В настоящее время большинство микробио­логов считают, что микробная клетка микобактерий обладает ядерной системой, морфологически отличающейся от ядра клетки у высших организмов, но функционально эквивалентной ему.

Митохондрии и рибосомы. Митохондрии имеют круглую или эллипсоидную структуру, но у них нет классических перегородок (крист). Рибосомы. Пользуясь аналитической центрифугой, удалось вы­делить фракции гомогенатов микобактерий со скоростью оседа­ния от 70S до 50S. Было установлено, что величина Svedeberg (S) таких формаций клеток микобактерий соответствует величинам рибосомальных фракций клетки у высших растений.

Химический состав Химический состав микобактерий сложен: Н20 85,9%, соли 2,55 %, липиды 1/3... 1/5 от массы сухого вещества. Об­наружено три фракции липидов: фосфатиды, жиры, воски. В со став липидов входят жирные кислоты: масляная, стеариновая, а также кислоты: туберкулостеариновая и фтионовая. Белки состав­ляют 56 % сухого вещества и носят название туберкулопротеидов; из них 47,5 % нуклеопротеиды и 8,5 % свободные нуклеино­вые кислоты. В состав белковых фракций входят валин, фенилала-нин, пролин, тирозин. Роль и значение отдельных химических составных частей ми- кобактерий еще окончательно не выяснены. Липидную фракцию считают носителем кислотоустойчивости и устойчивости вообще. Имеются данные о важной роли полиса­харидов в иммуногенезе. Интересно отметить, что наибольшее ко­личество липидов обнаружено у микобактерий туберкулеза чело­века, а наименьшее в сапрофитных микобактериях.

Важнейшую роль в патогенезе и иммуногенезе играют не отдельные составные части, взятые в той или иной комбинации, а лишь живые микобактерий туберкулеза. Белки микобактерий туберкулеза способны к стимулированию продукции макрофагов и гигантских клеток, образующих туберкулы.

Культивирование. Микобактерии факультативные аэробы, гетеротрофы. Основной источник N2 аминокислоты (аспарагиновая, глутаминовая, аланин). Исключительно важным для роста микобактерий (лимитирующим фактором роста) является амид аспарагиновой кислоты аспарагин. Соли аммония в комбинации с глицерином также могут быть ис­пользованы в качестве источника азота.

Первое звено обмена аминокислот дезаминирование, а выделяющийся NH3 микобакте­ рий используют в качестве материала для синтеза аминокислот с использованием кето- и оксикислот.

Источником углерода, помимо аминокислот, являются углево­ды и продукты их распада в виде органических кислот. Исключительно важен для роста микобактерий глицерин (трех­ атомный спирт).

Биохимические свойства. Ферментативная активность микобактерий весьма разнообразна. Микобактерий расщепляют липиды, обладают протеазами, способны расщеплять мочевину, произво­дят каталазу, пероксидазу, имеют хорошо выраженные редуцирующие свойства.

Ферментативная активность микобактерий. Вид микобактерий Уреаза Никотинамидаза Пиразинамидаза Ниацин М. tuberculosis М. bovis+ М. avium + + М. microti+ + + М. leprae Обозначения:«+» положительная реакция; «» отрицательная реакция.

Сапрофиты, патогенные виды и атипичные микобактерий дифференцируют с учетом их ферментативной активности. При этом установлено, что сапрофиты обладают более высокой окислительной способностью, чем вирулентные микобактерий.

Свежевыделенные микобактерий могут размножаться лишь на полноценных питательных средах, таких как яичные, кровяные, картофельные, содержащие особые ростовые вещества (среды Со- тона, Модели, ЛевенштейнаЙенсена, Гельберге, Финна). Размножаются микобактерий простым делением, почкова­нием. Патогенность. Различные виды микобактерий туберкулеза об­ладают способностью к миграции на разные виды животных, птиц и на человека. Отдельные виды патогенных микобактерий адапти­ рованы к тому или иному виду животных.

У крупного рогатого скота, маралов, овец, коз, свиней туберку­лез вызывает М. bovis. К этому виду наиболее чувствительны кро­лики и морские свинки. Заболевает человек. М. avium вызывает туберкулез у кур, индеек, уток, голубей, це­сарок и др. Восприимчивы домашние животные и человек. Наи­более чувствительны кролики. При заражении кроликов М. avium у них развивается септическая форма болезни. Инкубационный период в зависимости от вида животного и птицы длится от нескольких недель до нескольких лет. Доказано наличие в организме L-форм и их реверсия в истинные микобактерий.

Устойчивость. Благодаря содержанию липидов, восков в клетке микобактерий туберкулеза они отличаются гидрофобностью и вы­сокой устойчивостью к химическим реагентам (кислотам, щело­чам и спиртам). Корд-фактор микобактерий туберкулеза предотвращает их фа­гоцитоз и бактериолиз. В высушенном состоянии микобактерий туберкулеза сохраняются годами, в воде 2 года, в почве несколько лет. Установлено размножение микобактерий во влажных природ­ных субстратах. Низкие температуры не приводят к гибели мико­бактерий.

Ультрафиолетовые лучи и нагревание губительно действуют на микобактерий. Во влажных субстратах при температуре 65, и "С они погибают соответственно через 15, 10 и 5 мин. Ми­кобактерий туберкулеза обладают сравнительно высокой устойчи­востью к дезинфицирующим веществам (4%- ный формалин раз­рушает возбудитель через 3 ч).

Токсигенность. Микобактерий синтезируют эндотоксины (ту-беркулины). К химическим структурам микобактерий, обладаю­щих токсичностью, относятся жирные кислоты (масляная, паль­митиновая, туберкулостеариновая), полисахариды. Токсичные ве­щества микобактерий приводят к распаду клеток, творожистому перерождению тканей, разрушению митохондрий.

Антигенная структура. Микобактерии содержат такие антигены, как туберкулины и полисахаридо- белково-липидный комплекс, который назван полным антигеном, так как лишь при его введе­нии в организме образуются антитела. Антитела выявляют в РА, РП, РСК и др.

Патогенез. После аэрогенного, алиментарного или другого про­никновения в организм микобактерии попадают в лимфу, кровь и разносятся по всем органам и тканям. Размножение микобактерии туберкулеза происходит в тканях в соответствии с органотропностью возбудителя. В пораженных тканях возникает очаг воспаления и формируется первичный комплекс. Исходом первичного воспа­ ления может быть инкапсуляция, обызвествление очага или рас­ плавление стенок первичного очага и распространение возбудителя. Возможна длительная персистенция возбудителя в организме без явных клинических признаков.

Диагностика. Прижизненная диагностика включает аллергичес­кие исследования, серологические тесты. Для бактериологическо­го исследования от животных берут мокроту, экссудат, молоко, фекалии, от трупов пораженные ткани, лимфатические узлы.

Бактериологическое исследование. Включает микроскопию (окраска по ЦилюНильсену) мазков- препаратов, обработку биома­ териала реагентами (щелочь, кислота) с целью удаления сопут­ ствующей микрофлоры, концентрацию возбудителя (центрифуги­рование, флотация).

Культивируют посевы на специальных элективных питатель­ных средах (картофельно- глицериновая, МПГА и перечисленные выше среды). Для дифференциации патогенных, атипичных ми­кобактерии и кислото-, щелоче- и спиртоустойчивых сапрофитов посевы выдерживают при разных температурных режимах (24, , °С). Патогенные виды (М. tuberculosis, M. bovis, М. avium) различаются также скоростью роста, характером коло­ний, биохимическими свойствами и степенью патогенности по отношению к кроликам, морским свинкам и курам.

Серологическая и аллергическая диагностика. РГА, РНГА (реак­ция непрямой гемагглютинации) с эритроцитами барана, нагру­женными полисахаридами из туберкулезных микобактерии или туберкулином, позволяют выявить специфические антитела.

Особенности иммунитета и аллергия. Врожденная резистент­ность к туберкулезу свойственна многим представителям живот­ного мира («прусаки», черные тараканы, тутовый шелкопряд, ба­бочка павлиний глаз, из птиц гуси, утки). Высокой резистент­ностью обладают козы, собаки," крысы, лошади, буйволы, ослы, зебувидный скот. В иммунитете при туберкулезе, бесспорно, веду­щую роль играет генетический фактор. У однояйцевых близнецов конкордантность (сходство близнецов по исследуемому признаку) по заболеваемости составляет 65 %, у двуяйцевых 25,6 %, у бра­тьев и сестер 25,6 %.

В сыворотках больных туберкулезом обнаруживают агглютинины, преципитины, опсонины, хотя наличие их не отражает напряженности иммунитета.

Фагоцитарная реакция. Фагоцитарная реакция также не определяет состояние невос­приимчивости, так как фагоцитоз при туберкулезе нередко явля­ется незавершенным. Большое значение в устойчивости организма при туберкулезе имеют его реактивность, воспалительная реакция, гиперчувствительность замедленного типа, барьерная функция тканей и органов, приводящая к фиксированию микобактерий путем образова­ния гранул и препятствующая их распространению в организме, а также антибактериальные вещества.

В общем комплексе защиты организма определенную роль играет интерференция, которая происходит между истинными и невирулентными микобактериями, которые способны блокировать чувствительные клетки тканей и органов к вирулентным микобактериям туберкулеза.

Природа туберкулиновой аллергии заключается в повышенной чувствительности организма к повторному воздействию на иммунокомпетентные клетки туберкулина. Туберкулиновая аллергия может быть в эксперименте пассивно передана целыми или разрушенными лимфоцитами от реагирующей особи.

ТУБЕРКУЛЕЗ КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА

Клинические признаки.

Болезнь чаще всего протекает хронически, вначале бессимптомно. Зараженных животных в таких случаях мож­но выявить только аллергическим исследованием. Если обширные поражения вызывают нарушения жизнедеятельности организма, признаки болезни становятся заметными. При туберкулезе легких отмечают (непостоянно) повышение температуры тела до 39,5...40°С, короткий и сухой (позднее влажный) кашель. Если болезнь прогрессирует, кашель становится болезненным и частым, по­ является одышка, снижаются упитанность и продуктивность. При аускультации легких прослушиваются сухие и влажные хрипы, а при перкуссии

устанавливают изменение перкуторного звука. Он замет­но усиливается при наличии каверн. При поражении кишечника от­мечают периодические расстройства его деятельности, быстро насту­пает истощение животного (кахексия). В случаях туберкулеза выме­ни пальпацией устанавливают уплотнение ткани; значительное по­ражение ведет к изменению конфигурации долей вымени, атрофии железистой ткани, прекращению лактации. Довольно часто отмеча­ют только увеличение надвыменных лимфатических узлов. Пораженные поверхностные лимфатические узлы увеличены, плотные, безболезненные.

Патологоанатомические изменения. Характеризуются наличием в различных органах и тканях специфических узелков (туберку лов) различной величины от еле заметных до довольно круп­ных, величиной с куриное яйцо и более, особенно в легких, выме­ни. При разрезе в одних случаях обнаруживают гной, в других творожистое содержимое, в третьих обызвествление. В легких кроме туберкулов можно обнаружить каверны. При поражении кишечника на слизистой оболочке находят язвы с валикообразны- ми краями. Особой формой туберкулеза у крупного рогатого скота является жемчужница поражение плевры, брюшины, перикарда с образованием множества узелков с творожистым или некроти­ ческим содержимым, покрытых капсулой из фиброзной ткани.

Диагностика. Бактериологический диагноз основан на микро­скопии мазков-препаратов из патологического материала, выделе­нии чистой культуры возбудителя туберкулеза и заражении лабораторных животных. Исходя из того, что туберкулез протекает преимущественно в скрытой форме (латентно), для своевремен­ного выявления больных применяют аллергический метод диагно­стики при помощи аллергена туберкулина.

Для бактериологического анализа направляют (при жизни животного) истечения из носа, бронхиальную слизь, молоко, особенно при увеличении надвыменных лимфатических узлов, реже мочу (200 мл). Посмертно или после убоя отправляют кусочки ор­ганов с изменениями и бронхиальные, заглоточные, средостен- ные, предлопаточные, надвыменные лимфатические узлы. Мазки окрашивают по ЦилюНильсену.

Получив чистую культуру микобактерий, определяют видовую принадлежность. Одним из распространенных методов диффе­ренциации является культивирование в глицериновом бульоне с 5 % желчи. Каждый вид микобактерий растет в присутствии желчи соответствующего вида животного: М. avium в присутствии только птичьей желчи, М. bovis с добавлением желчи крупного рогатого скота. Наличие миколовой кислоты в клетках способ­ствует тому, что патогенные штаммы растут на питательных сре­дах в виде косичек, хорд. Биопробу используют для определения патогенности и дифференциации видов бактерий туберкулеза. За­ражают морских свинок, кроликов и при необходимости кур, предварительно проверенных аллергическим методом для исклю­ чения спонтанного туберкулеза. Для заражения применяют выде­ленную культуру или присланный в лабораторию материал.

У морских свинок в положительных случаях через нед на месте введения образуется уплотнение, затем язва, одновременно увеличиваются регионарные лимфатические узлы. Этим свинкам через нед подкожно вводят туберкулин, что приводит к бур­ной генерализации процесса и гибели животных. При вскрытии из типичных туберкулов готовят мазки и делают посевы. М. bovis вызывает генерализованный туберкулезный процесс у кроликов и морских свинок. М. tuberculosis патогенны лишь для морских сви­нок, вызывая заболевание в период от 3 нед до 3 мес после зараже ния. М. avium, как правило, обусловливает у кроликов септический процесс без образования специфических бугорков и приводит к быстрой гибели животных (особенно при внутривенном заражении).

Для дифференциации отдельных видов микобактерий лучше заражать животных суспензией выращенных культур. Если у выделенных культур слабая вирулентность и атипичный рост, то микобактерий необходимо дифференцировать от атипичных кислотоус­тойчивых сапрофитов.

Для этого используют следующие тесты.

1. Определение каталазной активности. В пробирку с вырос­шей на яичной среде культурой вносят 50%-ный раствор пергид­ роля в таком объеме, чтобы вся поверхность среды с культурой была покрыта раствором. С момента появления пузырьков газа учитывают результат столбик пены измеряют в миллиметрах. Каталазной активностью обладают все кислотоустойчивые бакте­рии, но у сапрофитов она выражена интенсивнее.

2. Определение лекарственной устойчивости осуществляют с культурами, выращенными на питательных средах с добавлением туберкулостатических препаратов (стрептомицин, ПАСК и др.) в различных концентрациях. Вирулентные штаммы М. tuberculosis, М. bovis, как правило, чувствительны к действию этих препаратов. Между тем атипичные штаммы, кислотоустойчивые сапрофиты и М. avium обладают устойчивостью в отношении антитуберкулез­ных лечебных препаратов, особенно к фтивазиду и ПАСК (пара-аминосалициловой кислоте).

3. Аллергический метод применяют в хозяйстве для массовой диагностики скрытых форм туберкулезного процесса. С этой це­лью используют специфические препараты туберкулин для крупного рогатого скота и отдельно для птиц.

ТУБЕРКУЛЕЗ СВИНЕЙ, ЛОШАДЕЙ, МЕЛКОГО РОГАТОГО СКОТА, ПТИЦ

Туберкулез свиней регистрируют главным образом в хозяй­ствах, неблагополучных по туберкулезу крупного рогатого скота и птицы. Болезнь протекает бессимптомно, но иногда можно обна­ружить увеличение подчелюстных, заглоточных и шейных лимфа­тических узлов, а также поражения легких, кишечника, особенно при заражении возбудителем туберкулеза птиц. Животные других видов овцы, козы, лошади заболевают редко, и туберкулез у них обычно протекает бессимптомно. Туберкулез у птиц также протекает бессимптомно, но при гене­ рализации инфекции появляются такие признаки заболевания, как вялость и малоподвижность, диарея, исхудание, анемичность гребня и бородки, прекращение яйцекладки. При пальпации иногда обнаруживают увеличение печени.

Патологоанатомические изменения.. При туберкулезе свиней очаги поражения находят преимущественно в лимфатических узлах, у больных лошадей в легких, у овец и коз на серозных покровах, в легких и лимфатических узлах. Трупы павшей от туберкулеза птицы истощены, серо-белые или желто-белые очаги поражения обнаруживают преимуще­ ственно в печени, кишечнике, селезенке, реже в легких, яични­ках и других органах.

Микроскопия. Микроскопия препаратов из исходного материала. Микобакте­рии прямые или слегка изогнутые палочковидные клетки раз­ мером (0,2...0,6) х ( ) мкм, без спор, капсул и жгутиков; грам-положительные, кислото- и спиртоустойчивые. Кислотоустойчи-вость связана с присутствием в клеточной стенке липидов и ми-коловой кислоты (до 60 %). В цитоплазме располагаются кислотолабильные гранулы, состоящие в основном из метафос-фата (зерна Муха). Липиды и воскоподобные вещества придают микробной клетке гидрофобность, т. е. способность отталкивать воду и водные растворы красителей, кислот, щелочей, в связи с чем бактерии туберкулеза (и паратуберкулеза) плохо восприни­мают окраску. Для окрашивания микобактерии применяют спе­ циальные методы, среди которых самый распространенный метод Циля Нильсена. По ЦилюНильсену микобактерии ок­рашиваются в ярко-красный цвет.

В препаратах М. tuberculosis обнаруживают в виде тонких пря­мых (изогнутых) палочек, М. bovis представляет собой короткие и толстые палочки, М. avium мельче остальных видов, со склоннос­тью к полиморфизму

Бактериоскопический метод отличает невысокая чувстви­тельность: с его помощью возбудитель выявляют при концентра­ции микобатерий (1...5)105/мл. Более результативна люми­несцентная микроскопия (ок­раска аурамин-родамином), благодаря которой выявляют даже незначительное количе­ство микобактерии, которые окрашены в бело-желтый

Выделение и идентификация культуры возбудителя. Микобакте-рии аэробы, температурный оптимум "С, рН 6, Рас­тут медленно. Для культивирования микобактерий туберкулеза используют сложные питательные среды, содержащие глицерин, картофель, яйца, витамины. Рост бактерий стимулируют аспара- гиновая кислота, альбумин, глюкоза, биотин, никотиновая кис­лота, соли аммония и др. Наиболее часто применяют среды Пет-раньяни, ЛевенштейнаИенсена, Гельберга.

Рост микобактерий бычьего вида на плотных средах чаще обна­руживают на е сутки, человеческого вида на е сут­ки, птичьего на е сутки.

М. bovis на плотных питательных средах формирует мелкие гладкие шаровидные колонии цвета слоновой кости, иногда с морщинистым сероватым налетом. На жидких средах образует пленку на поверхности сначала в виде единичных островков, по­зднее сливающихся в сплошную пленку.

М. tuberculosis на плотных питательных средах дает рост в виде сухого морщинистого налета кремового цвета. У колоний при­поднятый центр, они крошковидные, с приятным запахом, по виду напоминают цветную капусту, плохо смачиваются водой. На жидких средах рост наблюдают на е сутки в виде сухой морщинистой пленки, поднимающейся на края пробирок, среда остается прозрачной. На жидких средах и при внутриклеточном развитии образуется корд-фактор (трегалоза-6,6-дипиколат), способствующий сближению бактериальных клеток в микроко­лониях и их расположению в виде серпантинообразных кос

. 1,5-месячный рост микобак­терий туберкулеза птичьего типа на среде Петраньяни (штаммные 6, 15, ЗП, 25)

"Косы " из микобактерий

Биопроба. Метод применяют не только для обнаружения воз­будителя в исследуемом материале, но и для определения его ви­довой принадлежности. Биопробу ставят параллельно с культу-ральными исследованиями.

Биопрепараты. Вакцина БЦЖ (BCG) представляет собой жи­вую лиофильно высушенную культуру вакцинного штамма ту­беркулезных микобактерий бычьего типа. Вакцинный штамм BCG (Bacillus Calmette Guerin) был получен в 1924 г. француз­скими учеными Кальметтом и Гереном путем длительного куль­тивирования (в течение 18 лет) вирулентного штамма М. bovis на картофельно-глицериновой среде с добавлением бычьей желчи.

Для приготовления противотуберкулезной вакцины штамм БЦЖ выращивают на специальных средах в течение 20 дней. Приго­товленную вакцину высушивают методом лиофилизации и при­меняют для профилактики туберкулеза у людей (прививают всех новорожденных). В ветеринарной практике вакцину БЦЖ ис­ пользуют в неблагополучных по туберкулезу хозяйствах для про­филактики туберкулеза у крупного рогатого скота.