Боярский К. Ю.(1,2), Смирнова Т. А.(1), Быков Д. Е.(1), Гайдуков С. Н. (2) 1 – центр репродукции « Генезис », Санкт - Петербург 2 – кафедра акушерства и гинекологии, СПГПМУ

Криоконсервация эмбрионов является неотделимой частью программы ЭКО. В настоящее время наиболее часто замораживают эмбрионы на третий день ( стадия дробления ) или на пятый день развития ( стадия бластоцисты ). Замораживание на четвертый день ( стадия морулы ) является более редким подходом в криоконсервации эмбрионов. Это объясняется тем, что многие специалисты - эмбриологи не решаются оценивать качество эмбрионов на этой стадии. Существуют единичные публикации о результатах криоконсервации морул 4 дня в клинической практике (Cremaides N.et al., 2004, Tao, 2004, Vanderzwalmen et. al., 2007).

В Центре репродукции « Генезис » в течение длительного времени используют криоконсервацию эмбрионов 4 дня ( морулы и ранние бластоцисты ). После размораживания эмбрионы культивируют в течение часов и переносят в матку эмбрионы, развившиеся в бластоцисты. Витрификацию эмбрионов осуществляли по методу Шафеи ( Шафеи и др., 2003) с использованием растворов, содержащих следующие криопротекторы : этиленгликоль, фиколл, сахароза, трегалоза ( ЗАО « Протеинсинтез », Россия ). Указанные растворы не содержат диметилсульфоксид, что делает их малотоксичными, позволяет увеличить время работы с эмбрионами (2 минуты в последнем растворе ). Растворы содержат фиколл – полимер сахарозы, чрезвычайно снижающий скорость роста кристаллов воды, ввиду чего витрификация не требует высоких скоростей охлаждения и нагревания – криоконсервацию осуществляли в стандартных соломинках 0,25 мл (CryoBioSystem, Франция ).

Проведен анализ результатов крио циклов за 3 года, проводившихся с апреля 2011 по апрель 2014 года. Возраст пациенток колебался от 23 до 53 лет, средний возраст + стандартное отклонение составило 33,9 + 4,9 года. Были осуществлены 206 переносов эмбрионов. Клиническая беременность получена в 90 случаев (44%). Частота имплантации составила 28,9%. В 157 случаях перенесли 2 размороженных эмбриона. В 49 случаях перенесли 1 размороженный эмбрион. Более двух эмбрионов не переносили. Перенос осуществлялся как в циклах с гормон - заместительной терапией, так и в естественных циклах.

При замораживании При размораживании Отличное качество 19854,5% Морула + вегенер. клетки 318,5% Ранние морулы 5816,0%16,0% Стадия дробления 7621,0% 363 Отличное качество 17447,9%47,9% Морула + вегенер. клетки 5214,3% Ранние морулы 6016,5% Стадия дробления 7721,2%21,2% 363 В 25 случаях произошла декомпактизация морул -6,8%.

Из 363 эмбрионов, подготовленных для переноса, большая часть (90%) на следующий день развилась в бластоцисты (328 эмбрионов ), меньшая часть (10%) остановилась на стадии морулы. Образовавшиеся бластоцисты достигли следующих стадий развития по Гарднеру : 2 стадия – 10% (38 из 363); 3 стадия – 42% (152 из 363); 4 стадия – 35% (127 из 363); 5 стадия – 2% (9 из 363); 6 стадия – 0,5% (2 из 363). Из 131 переноса эмбрионов, где хоть одна бластоциста была отличного или хорошего качества в 67 случаях наступила клиническая беременность, 51,1%.

Данные говорят о высокой эффективности криоконсервации эмбрионов на четвертый день развития, частота наступления беременности сравнима с той, что получается при замораживании эмбрионов на пятый день. К настоящему времени рандомизированные исследования, в которых были сравнены результаты замораживания эмбрионов на четвертый и пятый дни культивирования проведены не были.

С целью изучения параметров определяющих возможность заморозки эмбрионов на 4 день было проведено исследование, в которое были включены данные 100 последовательных циклов ЭКО / ИКСИ, с замораживанием оставшихся после переноса эмбрионов и 100 последовательных циклов, в которых таких эмбрионов не было. Так же были исследованы исходы переносов размороженных эмбрионов. Все циклы ЭКО / ИКСИ были проведены в период с мая 2011 года по сентябрь 2012 года. Циклы с переносом размороженных эмбрионов были проведены с июля 2011 года по август 2013 года. Из исследования были исключены пациенты, у которых использовались донорские яйцеклетки или сперматозоиды, программа суррогатного материнства, и те пациентки, у которых были неизвестны исходы.

Причина бесплодия Группа с крио консервацией эмбрионов Группа без криоконсервации эмбрионов Уровень статистической достоверности, Р Эндометриоз 6% 23%0,001 Трубный фактор 63%73%0,7 Ановуляция 5%0%0,06

Группа с крио консервацией эмбрионов Группа без криоконсервации эмбрионов Уровень статистической достоверности, Р Частота оплодотворения 68,7%57,4%< 0,0001 Частота дробления 96,2%89,5%< 0,0001 Частота развития эмбрионов 96,0%84,4%< 0,0001

Группа с крио консервацией эмбрионов Группа без криоконсерваци и эмбрионов Уровень статистической достоверности, Р Частота клинической беременности 50%23%0,0001 Частота имплантации 27,5%15%0,003 Частота развивающейся беременности после 12 недель 41%19%0,001 Частота выкидыша до 12 недель беременности 16%17,3%1,0

Суммарная частота родов Группа с крио консервацией эмбрионов Группа без криоконсерваци и эмбрионов Уровень статистической достоверности, Р Перенос в цикле стимуляции 16%33%0,008 Первый перенос размороженных эмбрионов -43%- Второй перенос размороженных эмбрионов -48%- Итого 16%48%0,0001