1 Руководство по работе с набором YCELLBIO PRP ООО «РУСВИСК»

2. Перед работой с набором YCELLBIO PRP 1. Характеристика пациентов……………………………………3 2. Памятка пациенту………….……………………………………4. Подготовительный этап 1. Перечень необходимого…………………………………………5 2. Особенности контейнера YCELLBIO.………………………….5 3. Какой антикоагулянт использовать? Сколько антикоагулянта необходимо? Сбор крови 1. Забор крови у пациента...…………………………………………7 2. Введение крови в контейнер……………………………………..7. Центрифугирование 1. Условия проведения центрифугирования..……………………8 2. Балансировка центрифуги……………………………………… Держатель центрифуги…..…………………………………… Цель процедуры центрифугирования…..…………………… Поворотный колпачок…………………..……………………… Результат центрифугирования..………………………………..12. Извлечение PRP из контейнера 1. Как извлечь слой PRP…..………………………………………16 2. Оценка количества PRP……..…………………………………17 Содержани е

3. Перед работой с набором YCELLBIO PRP 1) Пациент - мужчина У молодых и здоровых мужчин наибольшая концентрация тромбоцитов и факторов роста в крови. У мужчин, как правило, слой эритромассы относительно больше, чем у женщин или пациентов с анемией за счет большего размера красных кровяных телец (ККТ). 2) Пациент - женщина Как правило, количество тромбоцитов меньше, чем у мужчин. ККТ женщин по размеру меньше, чем ККТ мужчин. 3) Пациент с анемией (вне зависимости от пола) У более здоровых мужчин большая концентрация тромбоцитов и факторов роста. ККТ мужчин по размеру больше, чем ККТ женщин. 1. Характеристика пациентов Богатая тромбоцитами плазма (БоТП) = Platelet Rich Plasma (PRP) Бедная тромбоцитами плазма (БеТП) = Platelet Poor Plasma (PPP) Лейкотромбоцитарный слой = Слой PRP / слой PPP (в зависимости от концентрации тромбоцитов)

4 Прекратите применение антикоагуляционных и/или антитромботических препаратов (например, аспирина) за 2 недели до забора крови; Перед процедурой проконсультируйтесь с врачом, если Вы страдаете заболеваниями крови и/или сердечно – сосудистой системы; Предупредите врача, если Вы страдаете от анемии; До процедуры воздерживайтесь от курения и употребления алкоголя. Перед процедурой включите в Ваш рацион больше фруктов, особенно содержащие витамин С; Перед процедурой постарайтесь хорошо отдохнуть и выспаться По возможности избегайте стресса; От состояния пациента напрямую зависит результативность извлечения PRP. В случае, если состояние пациента была неудовлетворительным, возможно нечеткое выделение слоя PRP после центрифугирования. 2. Памятка пациенту 4) Пациент, большой возраст (вне зависимости от пола) У более молодых пациентов большая концентрация тромбоцитов и факторов роста в крови. ККТ мужчин по размеру больше, чем ККТ женщин До забора крови врач должен принять во внимание соответствие состояния здоровья донора определенным нормам. У молодых и здоровых мужчин наибольшая концентрация тромбоцитов и факторов роста в крови. У мужчин, как правило, слой эритромассы относительно больше, чем у женщин или пациентов с анемией за счет большего размера красных кровяных телец (ККТ).

Контейнер YCELLBIO (1 шт.); Кровь (15 мл); Антикоагулянт (1,5 мл); Шприц на 20 см 3 (1 шт.); Шприц на 5 см 3 (1 шт.); Шприц на 3 см 3 (1 шт.); Игла калибра 21G или игла «бабочка» (1 шт.); Игла калибра 18G с длиной 40 мм (2 шт.); Вата, смоченная в спирте / Пинцет. Поворотный колпачок Метки гематокрита Метка лейкотромбоцитарного слоя (ЛТС) Предохранительный стабилизатор Отверстие для введения крови Отверстие для извлечение PRP 5. Подготовительный этап 1. Перечень необходимого 2. Особенности контейнера YCELLBIO

6 Существует несколько видов антикоагулянтов, применение которых позволяет добиться выделения тромбоцитов и сохранения их свойств. ACD-A (раствор цитратного гемоконсерванта с декстрозой); Цитрат натрия. Цитрат Натрия (4 г / 100 мл) ACD-A 2) Не рекомендуются к применению: 1) Рекомендуются к применению: Гепарин : Гепарин препятствует высвобождению факторов роста PRP; ЭДТА :ЭДТА способен нанести повреждение мембране тромбоцита. 1) Заберите шприцом 1,5 мл антикоагулянта; Draw 1.5cc anticoagulant in 20cc syringe in advance before taking blood, and coat inside walls of the syringe with anticoagulant. Обработка цилиндра Забор антикоагулянта 2) Перед забором крови важно, чтобы внутренняя поверхность цилиндра шприца была обработана антикоагулянтом. 3. Какой антикоагулянт использовать 4. Сколько антикоагулянта необходимо?

7 21G Иглой Иглой «бабочкой» Обратите внимание Перед забором крови необходимо удалить весь воздух из шприца; Забор крови после пункции необходимо проводить плавно. Если забор крови в шприц производился слишком резко, это можно повредить клетки крови. 2) Перемешайте кровь в шприце.. Сбор крови 15 мл Мужчина ЖенщинаАнемия Кровь 12,5 мл 13,5 мл 14 мл Антикоагулянт 1,5 мл Всего 14 мл 15 мл 15.5 мл 14 мл 15.5 мл 1) Заберите необходимое количество крови; 1) Используйте иглу 18G; 45˚ 2) Влейте собранную кровь в контейнер YCELLBIO (под углом 45˚). 1. Забор крови у пациента 2. Введение крови в контейнер

8 Если во время вливания крови в контейнер произошла закупорка горловины, используйте иглу шприца для расчистки отверстия. Обратите внимание 1) Метки объема забранной крови; Если пациент страдает от анемии, следует забрать большее количество крови, поскольку уровень гематокрита у таких пациентов снижен. 2) Закупорка горловины контейнера. Анемия Жен. Муж.. Центрифугирование Тип Цифровая Не цифровая Ротор – крестовина (РК) Угловой ротор (УР) Об. / мин. 3200~ ~ ~3600 RCF (ОЦУ) 1888*g ~ 2008*g Время 6 мин. – 10 мин. Цифровые центрифуги автоматически определяют частоту вращения на основании ОЦУ. Поэтому частота вращения на разных моделях может отличаться от указанных выше при работе в автоматическом режиме. 1. Условия проведения центрифугирования

9 Балансировка центрифуги – один из важнейших факторов в процессе разделения крови на фракции. Игнорирование этого вопроса может привести к повреждению контейнеров и вытеканию крови во время центрифугирования Кровь Вода Пусто 6 ячеек 4 ячейки Если у одной из ячеек центрифуги имеется дефект, то это может неблагоприятно отразиться на противолежащей во время вращения центрифуги (контейнер может разбиться). Сломан Контейнер разобьется 2. Балансировка центрифуги

10 Если у Вас центрифуга с таким же типом ячеек, убедитесь, что между контейнером и ротором есть достаточное расстояние. Иначе контейнер может разбиться. Адаптер защищает контейнер и стабилизируют его во время вращения (особенно актуально, если диаметр ячейки центрифуги больше диаметра контейнера). Контейнер следует поместить в адаптер до конца. 3. Адаптер центрифуги Примеры Цель центрифугирования – поместить гематокритный слой ниже горловины. Метка ЛТС Высота = 40 мм Line Приемлемая высота гематокритного слоя после разделения. Line 4. Цель процедуры центрифугирования A Без адаптера С адаптером

11 Если колпачок опущен ниже линии, кровь может вытечь во время вращения. Ограничительная линия 2) Исходное положение 3) Ограничительная линия Линия соответствует исходному положению колпачка. 1) Использование поворотного колпачка Линия Поднять Против часовой Опустить По часовой 5. Поворотный колпачок

12 Поднять Поднимите ЛТС к метке ЛТС (см. рисунок) 6. Результат центрифугирования 1) Стандартная ситуация – Четкое разделение после 1-го центр-я A РКУР T4 мин. Об./ мин ОЦУ1888*g~2008*g Метка ЛТС

13 РКУР Т4 мин. Об./ мин ОЦУ1888*g~2008*g РКУР Т4 мин. Об./ мин ОЦУ1888*g~2008*g – Завышенный гематокрит 1 е центр-е 2 е центр-е Если слой ККТ в диапазоне В, опустите его повернув колпачок на один полный оборот. A Завышенный гематокрит означает, что после проведения центрифугирования слой ККТ располагается выше горловины. Как правило, возникает при работе с кровью мужчин. 2) Нестандартные ситуации B B A Если слой ККТ выше линии А, его необходимо опустить. В. Что делать, если слой ККТ все равно не опустился ниже горловины? Проведите еще одно центрифугирование с теми же параметрами. Опустите

14 – Пониженный гематокрит Пониженный гематокрит означает, что слой ККТ располагается значительно ниже горловины после проведения центрифугирования. Поднимите слой ККТ к обозначенной линии (к уровню стабилизаторов). – PRP не выделился после 2-х центрифугирований Данная ситуация все еще является неплохим результатом, несмотря на нечеткое выделение. Поднимите PRP к уровню метки PRP и извлеките его. Чистый PRP Мутный PRP Мутный ЛТС В целом, в обоих случаях Вы извлечете примерно одинаковое кол-во тромбоцитов. C D Поднимите РКУР Т4 мин. Об./ мин ОЦУ1888*g~2008*g РКУР Т2 мин. Об./ мин ОЦУ892*g ~ 975*g 1 е центр-е 2 е центр-е

15 – Колпачок больше не может быть повернут Если поднять и извлечь PRP невозможно из-за того, что колпачок уже повернут на максимум, - воспользуйтесь длинной иглой. E – Отсутствует слой PRP У некоторых пациентов тромбоциты практически отсутствуют. Если после проведения нескольких процедур центрифугирования слой PRP отсутствует, извлеките часть плазмы возле слоя ККТ. F

16 1) Отрегулируйте высоту слоя PRP при помощи колпачка (напротив метки) Метка PRP 3) Заберите 1,5 – 2 мл PRP из горловины. Слегка взболтайте плазму иглой, чтобы осевшие тромбоциты поднялись. 2) Приготовьте 3 см 3 шприц с иглой 18G для извлечения слоя PRP;. Извлечение PRP из контейнера 1. Как извлечь PRP 4) Заберите остатки PPP при помощи 5 см 3 шприца. В дальнейшем PPP можно применять как успокаивающее и смягчающее кожу средство.

17 15 мл Мужчина ЖенщинаАнемия Объем крови 12.5 мл 13.5 мл 14 мл Объем антикоагулянта 1.5 мл Объем PRP PRP / Кровь 1 / мл 1.35 мл 1.4 мл 14 мл 15.5 мл Если Вы применяете иглу для извлечения PRP Как правило, около 0,05 мл PRP остается внутри иглы, которую использовали для извлечения. Этот факт следует учитывать при оценке фактического количества извлекаемого PRP. Мужчина ЖенщинаАнемия PRP1.25 мл 1.35 мл 1.4 мл Потеря Фактический объем PRP 1.2 ml1.3 ml1.35 ml Примерно 1/10 от общего объема забранной крови составит извлеченный слой PRP. 2. Оценка количества PRP