Взаимодействие липосомальных форм фотосенсибилизатора с клетками БЕЛОРУССКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ УНИВЕРСИТЕТ ФИЗИЧЕСКИЙ ФАКУЛЬТЕТ КАФЕДРА БИОФИЗИКИ Магистрант: - презентация

1 Взаимодействие липосомальных форм фотосенсибилизатора с клетками БЕЛОРУССКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ УНИВЕРСИТЕТ ФИЗИЧЕСКИЙ ФАКУЛЬТЕТ КАФЕДРА БИОФИЗИКИ Магистрант: Янковский Игорь Вячеславович Научный руководитель: канд. биол. наук Зорин Владимир Петрович

2 терапии рака г г – деструкция опухоли

3 Основные механизмы ФДТ

4 Свойства идеального фотосенсибилизатора: ФС должен обладать следующими свойствами: 1. иметь высокую селективность накопления в опухоли с последующим быстрым выведением из организма; 2. обладать интенсивным поглощением и флуоресценцией в красной и ближней ИК области спектра; 3. иметь однородный устойчивый при хранении состав, и, предпочтительно, состоящий из одного компонента 4. обладать низкой темновой цитотоксичностью; 5. иметь высокий квантовый выход триплетного состояния для эффективного образования синглетного кислорода.

5 Общий вид наноразмерных униламеллярных липидных везикул Липосомы Способы включения различных веществ в липидные везикулы

6 Гидрофобные производные Хлорина е 6 Липосомальные формы ФС изготавливали экструзионным методом из синтетического фосфолипида димиростоилфосфотидилхолина (ДМФХ). Отношение ФС:Липид = 1:40

7 В ходе проведенных исследований решались следующие задачи: Исследование процессов накопления и распределения липосомальных форм ФС в клетках (лейкоциты, K562 и Raji). Изучение специфичности связывания липосомальных форм ФС с клетками крови в норме и патологии. Исследование фотодинамической активности и цитотоксичности липосомальных форм ФС Задачи работы

8 Хлорин е 6 ТМЭДМЭ

9 Зависимость накопления липосомальных форм ДМЭ и ТМЭ в культуральных клетках Raji от температуры инкубирования Концентрация ФС 2·10 -6 М. Концентрация ЭСТ 5%. ФС добавляли непосредственно перед началом инкубирования с клетками ДМФХ-ДМЭ ДМФХ-ТМЭ I, отн.ед t, мин

10 Гистограммы распределения клеток больного МБЛ SS – боковое светорассеивание; FS – прямое светорассеивание; FL1 – флуоресценция в полосе FITC Фенотипирование клеток производили окрашиванием антителами CD45 (Белковая тирозин-фосфатаза, рецепторный тип, C) конъюгированными с флуоресцентным красителем FITC. Пул положительных по СD45 клеток относили к лимфоцитам

11 Накопление Хлорина е 6, его ДМЭ и ТМЭ и их липосомальных форм в клетках больного МБЛ Время инкубирования 3 часа. Температура инкубирования 37°С. Концентрация ЭСТ 5%

12 С, моль/л Пигмент 2· · · · ·10 -5 Контрольt, мин Погибшие клетки,% ДМЭ Хл е 6 3,43,75,041,196,4 3,070 ДМФХ-ДМЭ Хл е 6 3,54,04,34,24,8 ТМЭ Хл е 6 3,73,53,85,084,2 ДМФХ-ТМЭ Хл е 6 3,23,43,93,54,0 ДМЭ Хл е 6 5,14,922,579,097,0 2,7210 ДМФХ-ДМЭ Хл е 6 4,44,64,75,05,3 ТМЭ Хл е 6 3,54,44,620,895,0 ДМФХ-ТМЭ Хл е 6 4,04,24,54,14,5 Относительная погрешность в измерениях не превышала 10%, а для значений процента погибших клеток, лежащих в диапазоне от 10% и выше,относительная погрешность не превышала 5%

13 Предварительное инкубирование ФС с клетками 40 мин. Концентрация ФС: 2·10 -6 М. Жизнеспособность образца определяли на проточном цитометре тестом на связывание с флуоресцентным красителем PI (пропидий йодид) Доза облучения:

14 Профиль кинетики накопления липосомальных форм ФС не изменяется в сравнении со свободным ФС, а в средах с высоким содержанием сыворотки сглаживаются и различия в интенсивностях накопления. Селективность накопления в лейкемических клетках липосомальных форм ФС не ниже, а в случае ДМЭ хлорина е 6 выше, чем для свободного пигмента. Липосомальные формы ФС обладают низкой темновой цитотоксичностью во всем исследуемом диапазоне, при этом их фотодинамическая активность не снижается в сравнении с сенсибилизатором, находящемся в свободном виде, что позволяет использовать большие концентрации ФС

15 Спасибо за внимание!