Диагностика лептоспироза плотоядных Лептоспироз (синонимы: штутгартская болезнь, инфекционная желтуха, болезнь Вайля) - зооантропонозная бактериальная. - презентация

1 Диагностика лептоспироза плотоядных Лептоспироз (синонимы: штутгартская болезнь, инфекционная желтуха, болезнь Вайля) - зооантропонозная бактериальная природно-очаговая болезнь многих видов сельскохозяйственных, домашних, в том числе собак, кошек, и диких животных; характеризуется лихорадкой, анемией, геморрагическими поражениями почек, печени, слизистых оболочек ротовой полости, желудочно-кишечного тракта, а также расстройствами центральной нервной системы. К лептоспирозу восприимчив также человек. К лептоспирозам относят все те инфекционные заболевания людей, домашних и диких животных (в основном из класса млекопитающих), которые вызываются спирохетами рода лептоспира (Leptospira)

2 Статистика На сегодняшний день в стране ежегодно регистрируются от 1500 до 2500 случаев заболеваний. За период с 2002 по 2006 годы от лептоспирозов умерло 196 человек. Неблагоприятные исходы заболеваний, как правило, являются следствием поздней обращаемости больных, неудовлетворительной подготовки клиницистов (инфекционистов, в том числе первичного звена) в отношении зоонозных инфекций и низкого уровня дифференциальной клинической и лабораторной диагностики. На территории Республики Башкортостан лептоспироз не регистрируется с 1995 года. При этом в 2006 году материал для исследования на лептоспироз поступил лишь от 16 человек, в 2007 году - от 14 человек, результаты лабораторных исследований отрицательные.

3

4

5

6

7 ЭПИЗООТОЛГИЧЕСКИЕ ДАННЫЕ Лептоспирозом болеют животные любого возраста, но молодые собаки, щенки более восприимчивы, и болезнь у них протекает тяжелее, чем у взрослых. Источниками и резервуарами патогенных лептоспир могут быть как домашние, так и дикие животные. В условиях города носителями инфекции являются грызуны (мыши и крысы), бродячие собаки и кошки. Они выделяют возбудители с мочой, фекалиями, молоком, спермой, через легкие, с истечениями из носа и половых органов. Лептоспирозом болеют животные любого возраста, но молодые собаки, щенки более восприимчивы, и болезнь у них протекает тяжелее, чем у взрослых. Источниками и резервуарами патогенных лептоспир могут быть как домашние, так и дикие животные. В условиях города носителями инфекции являются грызуны (мыши и крысы), бродячие собаки и кошки. Они выделяют возбудители с мочой, фекалиями, молоком, спермой, через легкие, с истечениями из носа и половых органов. Заболевание наблюдается в любое время, но чаще в летне-осенний период. Инфекция проявляется в виде небольших эпизоотий и спорадических случаев. Главной эпизоотологической особенностью лептоспироза у собак в настоящее время является преобладание бессимптомных форм инфекции в виде лептоспироносительства и лептоспирозной иммунизирующей суп инфекции. Заболевание наблюдается в любое время, но чаще в летне-осенний период. Инфекция проявляется в виде небольших эпизоотий и спорадических случаев. Главной эпизоотологической особенностью лептоспироза у собак в настоящее время является преобладание бессимптомных форм инфекции в виде лептоспироносительства и лептоспирозной иммунизирующей суп инфекции. Лептоспироз считается наиболее распространенным зоонозом в мире. Он встречается на всех континентах, кроме Антарктиды, особенно широко распространен в тропических странах. Источниками инфекции являются различные животные (лесная мышь, полевка, водяные крысы, землеройки, крысы, собаки, свиньи, крупный рогатый скот и др.) Лептоспироз считается наиболее распространенным зоонозом в мире. Он встречается на всех континентах, кроме Антарктиды, особенно широко распространен в тропических странах. Источниками инфекции являются различные животные (лесная мышь, полевка, водяные крысы, землеройки, крысы, собаки, свиньи, крупный рогатый скот и др.)

8 ХАРАКТЕРИСТИКА ВОЗБУДИТЕЛЯ Лептоспироз у человека впервые был описан в Германии в 1886 г. А. Вейлем, в Россиив 1888 г. Н. П. Васильевым. Н.П.Васильев представил вполне убедительные материалы, позволявшие выделить в качестве болезни, так называемую инфекционную желтуху, которая была описана ранее французскими, немецкими и другими клиницистами разных стран под различными названиями. Лептоспироз у человека впервые был описан в Германии в 1886 г. А. Вейлем, в Россиив 1888 г. Н. П. Васильевым. Н.П.Васильев представил вполне убедительные материалы, позволявшие выделить в качестве болезни, так называемую инфекционную желтуху, которая была описана ранее французскими, немецкими и другими клиницистами разных стран под различными названиями. Лептоспироз овец и коз впервые зарегистрирован А. А. Авроровым, М. В. Земсковым (1937), культура возбудителя выделена В. И. Терских (1945). От свиней лептоспиры первым выделил В. И. Терских в 1940 г., от лошадейЛ. С. Новикова в 1947 г. Первая вакцина для животных, была приготовлена С. Я. Любашенко в 1940 т., сыворотка в 1947 г Лептоспироз овец и коз впервые зарегистрирован А. А. Авроровым, М. В. Земсковым (1937), культура возбудителя выделена В. И. Терских (1945). От свиней лептоспиры первым выделил В. И. Терских в 1940 г., от лошадейЛ. С. Новикова в 1947 г. Первая вакцина для животных, была приготовлена С. Я. Любашенко в 1940 т., сыворотка в 1947 г

9 Н.П.Васильев

10 Любашенко Сергей Яковлевич

11 Вейлем Герман Клаус Хуго

12 Морфология возбудителя

13 Особенности взятия и пересылки патологического материала Для бактериологического исследования в лабораторию направляют центрированную кровь, ликвор, мочу, кусочки свежих неконсервированных органов (печени, почки и др.). Прижизненно исследуют кровь (в первые дни заболевания) и мочу (с 8-го дня заболевания). Для бактериологического исследования в лабораторию направляют центрированную кровь, ликвор, мочу, кусочки свежих неконсервированных органов (печени, почки и др.). Прижизненно исследуют кровь (в первые дни заболевания) и мочу (с 8-го дня заболевания). Для гистологического исследования на наличие лептоспир от павших животных берут кусочки печени, почек, лимфатических узлов и мышц сердца. Для гистологического исследования на наличие лептоспир от павших животных берут кусочки печени, почек, лимфатических узлов и мышц сердца. При подозрении на заболевание животных лептоспирозом посылают мазки периферической крови от больных и павших животных для исследования с целью исключения пироплазмоза. При подозрении на заболевание животных лептоспирозом посылают мазки периферической крови от больных и павших животных для исследования с целью исключения пироплазмоза. При необходимости серологического исследования посылают кровь или сыворотку ее в пробирках. При необходимости серологического исследования посылают кровь или сыворотку ее в пробирках. Консервировать материал животного происхождения можно только в том случае, если он будет доставлен в лабораторию не ранее чем через 3-4 дня после взятия, консервировать такой материал можно только спиртом- ректификатом. Консервировать материал животного происхождения можно только в том случае, если он будет доставлен в лабораторию не ранее чем через 3-4 дня после взятия, консервировать такой материал можно только спиртом- ректификатом. Упаковывают материал в чистые, широкогорлые стеклянные банки, плотно закрывающиеся, поверх пробки банку обертывают чистой бумагой, обвязывают тонким шпагатом и опечатывают. На каждую банку наклеивают этикетку, на которой записывают какие органы, и в каком количестве помещены в банку, дату падежа. Упаковывают материал в чистые, широкогорлые стеклянные банки, плотно закрывающиеся, поверх пробки банку обертывают чистой бумагой, обвязывают тонким шпагатом и опечатывают. На каждую банку наклеивают этикетку, на которой записывают какие органы, и в каком количестве помещены в банку, дату падежа.

14 Бактериальная диагностика Окраску препаратов можно, производить по Романовскому Гимза (лептоспиры розово фиолетового цвета), по Бурри (на черном фоне неокрасившиеся лептоспиры), по Киктенко. Последний метод состоит в следующем: сухой нефиксированный мазок обрабатывают 1 мин. при слабом подогревании протравой (100 мл дистиллированной воды, 2 мл формалина, 0,2 г таннина и 5 мл 4-проц. спиртового раствора иода), после удаления протравы препарат окрашивают при слабом подогревании в течение 4550 сек. спиртовым раствором генцианвиолета (1 г краски и 100 мл 25-проц. спирта). После окрашивания препарат промывают водопроводной водой, высушивают и микроскопируют. Лептоспиры окрашиваются в краснофиолетовый цвет, отчетливо выделяясь на бесцветном фоне. Для выращивания L. icterohaem. применяют питательные среды (рН 7,27,4) с кровяной сывороткой (Ферворт Вольфа, Уленгута). После засева материала среда покрывается слоем стерильного вазелинового масла, и выращивание производят в термостате при температуре 2535°. Лептоспиры плохо окрашиваются анилиновыми красками, но хорошо импрегнируются серебром по методу Лёвадити. Окраску препаратов можно, производить по Романовскому Гимза (лептоспиры розово фиолетового цвета), по Бурри (на черном фоне неокрасившиеся лептоспиры), по Киктенко. Последний метод состоит в следующем: сухой нефиксированный мазок обрабатывают 1 мин. при слабом подогревании протравой (100 мл дистиллированной воды, 2 мл формалина, 0,2 г таннина и 5 мл 4-проц. спиртового раствора иода), после удаления протравы препарат окрашивают при слабом подогревании в течение 4550 сек. спиртовым раствором генцианвиолета (1 г краски и 100 мл 25-проц. спирта). После окрашивания препарат промывают водопроводной водой, высушивают и микроскопируют. Лептоспиры окрашиваются в краснофиолетовый цвет, отчетливо выделяясь на бесцветном фоне. Для выращивания L. icterohaem. применяют питательные среды (рН 7,27,4) с кровяной сывороткой (Ферворт Вольфа, Уленгута). После засева материала среда покрывается слоем стерильного вазелинового масла, и выращивание производят в термостате при температуре 2535°. Лептоспиры плохо окрашиваются анилиновыми красками, но хорошо импрегнируются серебром по методу Лёвадити.

15 Культуральные свойства Лептоспиры являются аэробами, их культивируют на средах слабощелочной реакции (рН 7,27,4) при 24 28°С. Культивирование лептоспир связано с определенными трудностями, обусловленными их низкой способностью к размножению в жидких, полужидких и особенно на плотных искусственных питательных средах. На простых питательных средах лептоспиры не растут. Для их культивирования наиболее часто используют жидкие среды Любашенко, Терских, Ферворт Вольфа, содержащие 510% сыворотки крови кроликов, а также среду ГНКИ с альбумином. Максимальное накопление биомассы лептоспир отмечается по истечении 57 сут культивирования, при этом вид питательных сред не изменяется. Лептоспиры являются аэробами, их культивируют на средах слабощелочной реакции (рН 7,27,4) при 24 28°С. Культивирование лептоспир связано с определенными трудностями, обусловленными их низкой способностью к размножению в жидких, полужидких и особенно на плотных искусственных питательных средах. На простых питательных средах лептоспиры не растут. Для их культивирования наиболее часто используют жидкие среды Любашенко, Терских, Ферворт Вольфа, содержащие 510% сыворотки крови кроликов, а также среду ГНКИ с альбумином. Максимальное накопление биомассы лептоспир отмечается по истечении 57 сут культивирования, при этом вид питательных сред не изменяется.

16 Биохимические свойства Биохимическая активность лептоспир незначительна. Они сбраживают глюкозу и сахарозу с образованием кислоты при условии концентрации углеводов в среде не более 0,250,5%. Лептоспиры не обладают протеолитическими свойствами. Биохимическая активность лептоспир незначительна. Они сбраживают глюкозу и сахарозу с образованием кислоты при условии концентрации углеводов в среде не более 0,250,5%. Лептоспиры не обладают протеолитическими свойствами.

17 Токсигенные свойства Лептоспиры, их токсины и продукты обмена приводят к выраженной интоксикации, которая особенно быстро нарастает в первые 2-3 дня от начала болезни. Лептоспиры обладают гемолизином, что приводит к разрушению (гемолизу) эритроцитов. Возбудители и их токсические продукты обладают выраженным действием на сосудистую стенку и на свертывающую систему крови. В тяжелых случаях развивается тромбогеморрагический синдром. Лептоспиры, их токсины и продукты обмена приводят к выраженной интоксикации, которая особенно быстро нарастает в первые 2-3 дня от начала болезни. Лептоспиры обладают гемолизином, что приводит к разрушению (гемолизу) эритроцитов. Возбудители и их токсические продукты обладают выраженным действием на сосудистую стенку и на свертывающую систему крови. В тяжелых случаях развивается тромбогеморрагический синдром.

18 Серологическая диагностика Используют реакцию микроагглютинации (РМА) и реакцию агглютинации (РА). Пробы крови берут на 5-7-й день болезни и при исследовании отдельных животных повторно через 7-10 дней. Используют реакцию микроагглютинации (РМА) и реакцию агглютинации (РА). Пробы крови берут на 5-7-й день болезни и при исследовании отдельных животных повторно через 7-10 дней. РМА ставят в лунках агтлютинационных пластинок из плексигласа.Компоненты реакции: РМА ставят в лунках агтлютинационных пластинок из плексигласа.Компоненты реакции: сыворотка в разведении 1:100, 1:500, 1:2500 (при необходимости реакцию ставят в разведениях 1:100, 1:200 и т. д. до титра) в объеме 0,1 мл; сыворотка в разведении 1:100, 1:500, 1:2500 (при необходимости реакцию ставят в разведениях 1:100, 1:200 и т. д. до титра) в объеме 0,1 мл; антиген - живые 5-15-суточные культуры лептоспир различных серогрупп в объеме 0,1 мл; антиген - живые 5-15-суточные культуры лептоспир различных серогрупп в объеме 0,1 мл; контролем служит антиген с физиологическим раствором по 0,1 мл. контролем служит антиген с физиологическим раствором по 0,1 мл. Реакцию выдерживают при температуре 30 oС в течение 1 ч. Агглютинация проявляется в склеивании лептоспир и образовании «паучков», состоящих от 3-5 до нескольких десятков и более бактерий. Оценивается реакция в плюсах по 4-балльной системе. Положительной считают реакцию не менее чем два плюса при отсутствии агглютинации в контроле. Реакцию выдерживают при температуре 30 oС в течение 1 ч. Агглютинация проявляется в склеивании лептоспир и образовании «паучков», состоящих от 3-5 до нескольких десятков и более бактерий. Оценивается реакция в плюсах по 4-балльной системе. Положительной считают реакцию не менее чем два плюса при отсутствии агглютинации в контроле. РА ставят на стеклянной пластинке. РА ставят на стеклянной пластинке. Компоненты реакции: Компоненты реакции: исследуемая сыворотка в разведении 1:100; исследуемая сыворотка в разведении 1:100; лептоспирозные антигены шести серогрупп. лептоспирозные антигены шести серогрупп. Оценка результатов производится в плюсах по 4-балльной системе. Положительной считают реакцию в два плюса и выше, сомнительной - в один плюс. Оценка результатов производится в плюсах по 4-балльной системе. Положительной считают реакцию в два плюса и выше, сомнительной - в один плюс. Для выявления лептоспир в крови, моче, паренхиматозных органах, в тканях абортированного плода, в воде и почве предложен иммуно-флюоресцентный метод. Для выявления лептоспир в крови, моче, паренхиматозных органах, в тканях абортированного плода, в воде и почве предложен иммуно-флюоресцентный метод.

19 Биопроба Заражают золотистых хомячков дневного возраста и крольчат-сосунов в возрасте дней. На каждую пробу берут двух животных; на 4-5-й день убивают первого, на й день - второго. Из сердца, печени и почек убитых или павших животных проводят посевы. Заражают золотистых хомячков дневного возраста и крольчат-сосунов в возрасте дней. На каждую пробу берут двух животных; на 4-5-й день убивают первого, на й день - второго. Из сердца, печени и почек убитых или павших животных проводят посевы.

20 УСТОЙЧИВОСТЬ ВОЗБУДИТЕЛЯ Лептоспиры типичные гидробионты. В воде рек и озер сохраняются до 200 дней, в сточных водах до 10 дней, в навозной жиже 24 ч, во влажной почве с нейтральной или слабощелочной реакцией до дней, но быстро (30 мин 12 ч) погибают в сухой почве. Нагревание до °С губит их почти моментально, солнечные лучи, а высушивание за 2 ч. Низкие температуры консервируют лептоспир. Растворы, держащие 0,25 % активного хлора, 5 % карболовой кислоты, 0,25 % формальдегида, соляной кислоты разрушают лептоспир за 5 мин, а 1 %-ный р-р едкого натра почти моментально. Лептоспиры типичные гидробионты. В воде рек и озер сохраняются до 200 дней, в сточных водах до 10 дней, в навозной жиже 24 ч, во влажной почве с нейтральной или слабощелочной реакцией до дней, но быстро (30 мин 12 ч) погибают в сухой почве. Нагревание до °С губит их почти моментально, солнечные лучи, а высушивание за 2 ч. Низкие температуры консервируют лептоспир. Растворы, держащие 0,25 % активного хлора, 5 % карболовой кислоты, 0,25 % формальдегида, соляной кислоты разрушают лептоспир за 5 мин, а 1 %-ный р-р едкого натра почти моментально. Резистентность лептоспир к физическим и химическим средствам соответствует устойчивости вегетативных форм бактерий. В моче крупного рогатого скота, свиней и грызунов они сохраняются от 4 ч до 6 7 дней, в почках от 12 ч до 12 дней, в абортированном плоде свиньи несколько дней, в мышечной ткани 48 ч, в свежем молоке 8 24 ч, в замороженной сперме 13 г. (срок наблюдения). Резистентность лептоспир к физическим и химическим средствам соответствует устойчивости вегетативных форм бактерий. В моче крупного рогатого скота, свиней и грызунов они сохраняются от 4 ч до 6 7 дней, в почках от 12 ч до 12 дней, в абортированном плоде свиньи несколько дней, в мышечной ткани 48 ч, в свежем молоке 8 24 ч, в замороженной сперме 13 г. (срок наблюдения).

21 СПЕЦИФИЧЕСКАЯ ПРОФИЛАКТИКА И ИММУНИЗАЦИЯ. ЛЕЧЕНИЕ Для активной иммунопрофилактики лептоспироза собак применяют отечественные и зарубежные моно-, поливалентные (против лептоспир двух серогрупп: Icterohaemorrhagiae и Canicola) и ассоциированные вакцины: моно- и поливалентные вакцины - Биовак-L, вакцина против лептоспироза собак (НПО "Нарвак"), вакцина поливалентная ВГНКИ против лептоспироза животных и др. (Россия), Лептодог (Франция) и др.; отечественные ассоциированные вакцины - Биовак-DPAL, Биорабик (НПО "Биоцентр"), Гексаканивак, Дипентавак (АО Ветзвероцентр"), Мультикан-6 (НПО "Нарвак"); зарубежные ассоциированные вакцины - Гексадог, Лепторабизин (Франция), Вангард-5Ь, Вангард-7 (США) и другие. Для активной иммунопрофилактики лептоспироза собак применяют отечественные и зарубежные моно-, поливалентные (против лептоспир двух серогрупп: Icterohaemorrhagiae и Canicola) и ассоциированные вакцины: моно- и поливалентные вакцины - Биовак-L, вакцина против лептоспироза собак (НПО "Нарвак"), вакцина поливалентная ВГНКИ против лептоспироза животных и др. (Россия), Лептодог (Франция) и др.; отечественные ассоциированные вакцины - Биовак-DPAL, Биорабик (НПО "Биоцентр"), Гексаканивак, Дипентавак (АО Ветзвероцентр"), Мультикан-6 (НПО "Нарвак"); зарубежные ассоциированные вакцины - Гексадог, Лепторабизин (Франция), Вангард-5Ь, Вангард-7 (США) и другие. Для пассивной иммунизации щенят и взрослых собак при неизвестном иммунном статусе в условиях неблагополучной эпизоотической обстановки по лептоспирозу, особенно при групповом содержании животных, рекомендуется использовать гипериммунную сыворотку против лептоспироза, а также применять метод активно-пассивной иммунизации (одновременное введение вакцины и гипериммунной сыворотки против лептоспироза собак) Для пассивной иммунизации щенят и взрослых собак при неизвестном иммунном статусе в условиях неблагополучной эпизоотической обстановки по лептоспирозу, особенно при групповом содержании животных, рекомендуется использовать гипериммунную сыворотку против лептоспироза, а также применять метод активно-пассивной иммунизации (одновременное введение вакцины и гипериммунной сыворотки против лептоспироза собак)

22

23

24

25

26

27

28 МИКРОСКОПИЯ ЛЕПТОСПИР