МОЛЕКУЛЯРНО-ГЕНЕТИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ РАСШИРЯЮТ АНАЛИТИЧЕСКИЕ ВОЗМОЖНОСТИ СОВРЕМЕННОЙ БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКОЙ ДИАГНОСТИКИ Л.А.Кафтырева, ФБУН Санкт-Петербургский. - презентация

1 МОЛЕКУЛЯРНО-ГЕНЕТИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ РАСШИРЯЮТ АНАЛИТИЧЕСКИЕ ВОЗМОЖНОСТИ СОВРЕМЕННОЙ БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКОЙ ДИАГНОСТИКИ Л.А.Кафтырева, ФБУН Санкт-Петербургский НИИ эпидемиологии и микробиологии им. Пастера,

2 ТЕСТЫ, ПОДТВЕРЖДАЮЩИЕ РЕЗИСТЕНТНОСТЬ Фенотипические Молекулярно-генетические ТестыВремяГеныВремя MRSA Латекс-тест для ПСБ 2а24 ч.mecA4 часа Агар с оксациллином24 ч. VRE МИК ванкомицина возможны ошибки идентификации 24 ч.vanA, vanB, vanC, vanD 4 часа БЛРС и МБЛ Тесты синергизма24 ч.CTX-M, SHV, TEM и др. 4 часа Тесты синергизма24 ч.VIM, IMP и др.4 часа

3 MRSA Частота выделения резистентных к АМП S.aureus в ОРИТ многопрофильных стационаров ( г.г.) в ОРИТ многопрофильных стационаров ( г.г.)

4 Бета-лактамазы клинических штаммов энтеробактерий Вид м/о Фенотип резистентности Бета-лактамазы % штаммов Гено- типирование ТипГруппаPFGE E.coli n=40 ампициллинТЕМТЕМ-141,7 8 ЦСП 3- 4 пок. БЛРС СТХ-М СТХ-М-147,2 10 СТХ-М-98,3 3 БЛРС SHV 2,8 1 K.Pneumoniae n=50 ЦСП 3- 4 пок.БЛРС СТХ-М СТХ-М

5 Ванкомицинрезистентные энтерококки (ВРЭ) В гг. энтерококки входили в число десяти возбудителей, часто выделяемых от пациентов в С-Пб.; В 2009 гг. были подтверждены только 7 штаммов, как ВРЭ из 98, идентифицированных как ВРЭ. Были выделены от пациентов ОРИТ из мочи; Ванкомицин - устойчивость (МИК более 256 г/л) Устойчивость к гликопептидам обусловлена геном vanA; Опыт по проведению скрининга ВРЭ в стационарах в повседневной работе бактериологических лабораторий показал необходимость использования подтверждающих тестов (Е-тест и/или ПЦР), поскольку использование ДДМ или автоматических анализаторов нередко выявляет «ложно» резистентные штаммы энтерококков (93% ложноположительные)

6 Детекция патогенных микроорганизмов увеличилась в 12 раз ! Данные инфекционной больницы 30 «Классическое» бактериологическое обследование Современная диагностика ОКИ Молекулярно-генетические методы 4,6%59%

7

8 Распределение E. coli О1 по группам обследованных лиц (2005г.)

9 Детерминанты вирулентности штаммов E. coli O1 Адгезины P-пили (рap) + S-фимбрии (sfa) - афимбриальные адгезины (afa) - интимин (eae) - аггрегативно-адгезивные фимбрии I (aaf/I) - Токсины гемолизин hly - цитонекротический фактор 1-2 cnf энтеротоксины LT и ST (elt,LT-II, ST-I –II) - шига-подобный токсин I-II (slt-I-II) - Инвазины гены инвазивности (ipaН, ial ) - Факторы персистенции аэробактин (aer) +

10 МОЛЕКУЛЯРНО-ГЕНЕТИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ В БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКОЙ ДИАГНОСТИКЕ Молекулярное серотипирование E. coli O1 Антигенная формула О1:К1:Н- Факторы вирулентности Рap ген (P-пили) Aer ген (фактор персистенции – аэробактин) Относится к уропатогенным E. coli - возбудитель внекишечных эшерихиозов (заболеваний МВП)

11 Характеристика возбудителя E.coli О104:Н4 E.coli выделенные в Германии и Франции принадлежали к серогруппе О104 (серотип О104:Н4) имели ген, кодирующий продукцию шига-токсина 2 (stx2), характерного для EHEC. В отличие от типичных EHEC у них отсутствовали гены, ответственные за адгезию (eae и hlyА), эти свойства им обеспечивали гены, кодирующие факторы адгезии E.coli группы ЕАЕС (гены aatA, aggR, aap, aggA и aggC). Результаты молекулярно-генетических исследований показали, что «вспышечный» штамм по происхождению относится к группе энтероаггрегативных E. coli (EAEC) и получил способность продуцировать шига- токсин в результате интеграции бактериофага в бактериальный геном.

12 Региональный микробиологический мониторинг Координационно-методический СОВЕТ городской отдел клинической эпидемиологии Научно-методический центр по молекулярной медицине Тестирование MRSA, VRE, штаммов возбудителей, выделенных от больных в период вспышек, проблемных микроорганизмов: Klebsiella spp., Pseudomonas spp. и др. Бак лаборатории стационаров и обслуживающие стационары Бак лаборатории, обслуживающие родильные дома Референс- лаборатория

13 МОЛЕКУЛЯРНО-ГЕНЕТИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ В БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКОЙ ДИАГНОСТИКЕ Заключение Внедрение молекулярно-генетических методов детекции механизмов резистентности, факторов вирулентности микроорганизмов значительно расширили аналитические возможности работы бактериологических лабораторий стационаров и позволили получить достоверные результаты в более короткие сроки исследования.

14 МОЛЕКУЛЯРНО-ГЕНЕТИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ РАСШИРЯЮТ АНАЛИТИЧЕСКИЕ ВОЗМОЖНОСТИ СОВРЕМЕННОЙ БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКОЙ ДИАГНОСТИКИ Л.А.Кафтырева, С.А.Егорова, М.А.Макарова ФБУН Санкт-Петербургский НИИ эпидемиологии и микробиологии им. Пастера