Экспрессия гетерологичных генов !. Экспрессионные вектора ДНК 3 РНК-полимераза РНК 5 Рибосома N Белок Для экспрессии чужеродного гена необходимо организовать. - презентация

1 Экспрессия гетерологичных генов !

2 Экспрессионные вектора ДНК 3 РНК-полимераза РНК 5 Рибосома N Белок Для экспрессии чужеродного гена необходимо организовать 2 процесса - транскрипции и трансляции

3 Ori Ap r pl Ген Промотор – элемент, обеспечивающий инициацию транскрипции Р

4 α α Инициация транскрипции 5 TATAATTTGACA Pribnow box шт., 70 основная 32 шок 24 шок 38 голодание 28 жгутики 54 мет. азота 19 тр. железа

5 Сила промоторов ПромоторСила промотора в единицах Рbla P bla 1 P lac 2,5 P trp 6 P l 10 P r 12 P h207 T355 P a1 T779 Важнейшее свойство промоторов – возможность регуляции их активности.

6 Регуляция работы промоторов Лактозный оперон Жакоб и Мано 1961 г. Оперон – группа генов, находящихся под единой системой регуляции. Включает в себя гены и регуляторные элементы. lacZlacAlacYlac I t lacO -галактозидаза 125 кДа пермеаза 30 кДа трансацетилаза 30 кДа Оператор 21 н.п. Репрессор 38 кДа Лактоза - индуктор Индуцибельный оперон Индукция х1000 IPTG

7 Триптофановый оперон trpEtrpD trpC trpBtrpA trpR P trp trpO 4х12000 Триптофан - ингибитор Репрессибельный оперон. Репрессия х700 Ингибирование конечным продуктом Подавление х70 att Аттенуация – регуляция транскрипции на уровне трансляции Куда пропал еще один порядок ингибирования ? (Ослабление)

8 Аттенуация – регуляция транскрипции на уровне трансляции ww Лидерный пептид 13 ак Stop-кодон ДНК мРНК Где регуляция ? РНК полимераза

9 Аттенуация – регуляция транскрипции на уровне трансляции рибосома ww Если триптофана мало, то ww Если триптофана много, то Подавление х10

10 Гибридные промоторы

11 Другие варианты регуляции экспрессии на уровне транскрипции Ori Ap r РrРr c1ts Pr и Pl промоторы фага Репрессор

12 Другие варианты регуляции экспрессии на уровне транскрипции Ori Ap r Р Промотор фага Т7 pol lacO lacI E.coli BL21 P lac

13 Плазмида рЕТ23 T7 promoter

14 lacO

15 Ori Ap r pl Ген Все равно ни чего не получится ! РrРr Что дальше ? c1ts

16 ДНК 3 РНК-полимераза РНК 5 Рибосома N Белок Необходимо обеспечить инициацию трансляции