Интерферон Альфа (ИНФ-α, INF-α): молекулярная биология, биотехнология, производство лекарственных форм, клинические испытания и клиническая практика. - презентация

1 Интерферон Альфа (ИНФ-α, INF-α): молекулярная биология, биотехнология, производство лекарственных форм, клинические испытания и клиническая практика

2 Интерфероны: с чего все начиналось… 1943 Открыт феномен интерферирования. Первоначальное представление об интерфероне: фактор, мешающий репликации вируса Henle W, Henle G. Interference of inactive virus with the propagation of virus of influenza. Science Jul 23; 98(2534): Английский ученый Алик Айзеке и швейцарский исследователь Джин Линденман выделили этот фактор и назвали его интерфероном Isaacs A, Lindenmann J. Virus interference. I. The interferon. Proc R Soc Lond B Biol Sci Sep 12;147(927):

3 Что такое интерферон? Интерферон это белковая молекула, которая естественным образом вырабатывается в организме человека. В генетическом аппарате человека закодирован «рецепт» её синтеза (ген интерферона). Интерферон бета H2OH2O

4 За минувшие полвека с момента открытия ИФН были изучены десятки свойств этого белка. Противовирусные Противоопухолевые Главные свойства ИФН (с медицинской точки зрения)

5 Противовирусный эффект интерферонов Интерферон естественным образом вырабатывается в организме человека в ответ на вторжение любых вирусов и снижает восприимчивость к инфекции. ИФН вызывает активацию внутриклеточных ферментов, которые препятствуют репликации вирусной РНК и ДНК. Иногда складывается парадоксальная ситуация: чем тяжелее болезнь, тем слабее выработка защитного белка. Пример. Особенность вируса гепатита В состоит в том, что, попадая в организм человека, он «притупляет бдительность» иммунной системы. В результате интерферон вырабатывается в недостаточных для нейтрализации вируса количествах, развивается заболевание. При остром течении гепатита В выработка интерферона снижается еще больше.

6 Противоопухолевый эффект интерферонов ИФН замедляют или подавляют рост культуры клеток и активируют противоопухолевые механизмы иммунной системы. Это свойство интерферонов было обнаружено давно и широко используется в терапевтических целях. ПРЯМЫЕ – непосредственное действие на опухолевые клетки, их рост и дифференцировку. Нейтрализация онковирусов. Противоопухолевые эффекты интерферонов НЕПРЯМЫЕ – стимуляция активности клеток иммунной системы (макрофагов, NK- клеток, Т-цитотоксических лимфоцитов и дендритных клеток). Усиление способности иммунокомпетентных клеток обнаруживать и уничтожать атипичные клетки организма.

7 Интерферон: семейство молекул В организме человека существует около 20 видов – целое семейство – интерферонов. Для удобства интерфероны разделили на 3 группы в зависимости от того, на какие рецепторы они воздействуют и какие механизмы запускают. ТипНазваниеГлавный естественный источник синтеза I Интерферон Альфа (α)Лейкоциты Интерферон Бета (β)Фибробласты Интерферон Омега (ω)Лейкоциты IIИнтерферон Гамма (γ)Т-клетки, NK-клетки IIIИнтерферон Лямбда (λ)Лейкоциты

8 Интерферон Альфа многолик! Интерферон Альфа Уникальная особенность: кодируется 14-ю генами: IFNA1, IFNA2, IFNA4, IFNA5, IFNA6, IFNA7, IFNA8, IFNA10, IFNA13, IFNA14, IFNA16, IFNA17, IFNA21. Все эти гены расположены в одном кластере на хромосоме 9 IFNA1IFNA2IFNA4IFNA5 IFNA6IFNA7IFNA8 IFNA10IFNA13IFNA14 IFNA16IFNA17IFNA21 Другие интерфероны Интерферон Бета – 1 ген Интерферон Гамма – 1 ген Естественные интерфероны человека: около 20 видов В Max-Well будут производиться Интерфероны Альфа, Бета и Гамма

9 Промышленное производство препаратов интерферона Лейкоцитарный (получают из клеток донорской крови) Рекомбинантный (получают из генетически модифицированных организмов)

10 Лейкоцитарный интерферон 1961 Продемонстрировано, что можно индуцировать выработку интерферона (инокуляцией вирусом кори) GRESSER, I. Production of interferon by suspensions of human leucocytes. Proc. Soc. Exptl. Biol. Med : гг. Разработан метод индукции выработки интерферона вирусом азиатской куриной чумы (вирус "Ньюкасл") и вирусом гриппа животных 1-го типа (вирус Сендай). Использовались человеческие лейкоциты из донорской крови Wheelock EF. Virus replication and high-titered interferon production in human leukocyte cultures inoculated with Newcastle disease virus. J Bacteriol Nov;92(5): Strander H. Production of interferon in serum-free human leukocyte suspensions. Appl Microbiol Nov;18(5): гг. Первые очистки до гомогенности, выделение интерферонов Альфа, Бета и Гамма Rubinstein M, Rubinstein S, Familletti PC, Miller RS, Waldman AA, Pestka S. Human leukocyte interferon: production, purification to homogeneity, and initial characterization. Proc Natl Acad Sci U S A Feb;76(2):640-4

11 Лейкоцитарный интерферон Недостатки: дорого (производство из донорской крови; низкий выход); «грязно» (негомогенный препарат - наличие других компонентов крови; дает смешение эффектов); низкая эффективность (не более 1% активного вещества).

12 Рекомбинантный интерферон 1980 Начало эры рекомбинантного интерферона Несколько групп учёных независимо друг от друга проклонировали гены интерферонов S. Nagata, N. Mantei, C. Weissmann, The structure of one of the eight or more distinct chromosomal genes for human interferon-alpha, Nature 287 (1980) Принцип производства рекомбинантных (генноинженерных интерферонов): ген ИФН человека переносится в другой организм. организм, в который помещается ген интерферона (в виде плазмиды), становится продуцентом (экспрессионной системой); экспрессионная система – биологическая фабрика по производству белка.

13 Клиническое применение ИФН Конец 1970-х начало 1980-х Лейкоцитарные интерфероны Ideström K, Cantell K, Killander D, Nilsson K, Strander H, Willems J. Interferon therapy in multiple myeloma. Acta Med Scand. 1979;205(3): Середина 1980-х – наст. время Рекомбинантные интерфероны 1985 FDA разрешила использовать ИФН Альфа для лечения волосатоклеточного лейкоза В настоящее время интерфероны широко используют в лечении инфекционных заболеваний, а также в онкологии, неврологии, офтальмологии, дерматологии...

14 РЕКОМБИНАНТНЫЕ ИНТЕРФЕРОНЫ, ОДОБРЕННЫЕ В РАЗНЫХ СТРАНАХ

15 Интрон А Производитель – Schering Plough Corporation (USA) Показания к применению: - волосато-клеточный лейкоз, - генитальные бородавки, - саркома Капоши, - хроническая злокачественная меланома, - длительная терапия гепатита С, - фолликулярная лимфома (комбинируется с химиотерапией), - гепатит B (у детей).

16 Интерферон альфа 2b Рекомбинантный Для внутримышечного, подкожного, внутриязвенного или внутривенного применения Очищенный, стерильный, рекомбинантный продукт Интрон А

17 IFN α-2b, рекомбинантный для инъекций, водорастворимый белок с молекулярным весом дaльтон, производимый методами рекомбинантной технологии. Производится путем бактериальной ферментации штамма Escherichia coli, несущим генетически внедренную плазмиду, содержащую ген интерферона IFN α-2b из человеческих лейкоцитов. Ферментация проводится в питательной среде, содержащей антибиотик тетрациклина гидрохлорид в концентрации от 5 до 10 мг/л (данный антибиотик в конечном продукте не определяется). Удельная активность интерферона альфа-2b рекомбинантного - приблизительно 2.6 x 10 8 МЕ/мг (согласно результатам измерений при помощи жидкостной хроматографии высокого разрешения). Интрон А

18 Порошок для инъекций Интрон А Активность вещества Объем растворителя, мл Финальная концентрация после реконструкции, МЕ/мл¹ mg Intron A² IFN α-2b, recombinant Способ введения З млн МЕ IM, SC, IV 5 млн МЕ IM, SC, IV 10 млн МЕ IM, SC, IV, IL³ 18 млн МЕ IM, SC, IV 25 млн МЕ IM, SC, IV 50 млн МЕ IM, SC, IV

19 ¹ Каждый мл также содержит 20 мг глицина, 2.3 мг двуосновного натрия фосфата, 0.55 мг одноосновного натрия фосфата и 1.0 мг человеческого альбумина. ² Расчеты даны на основании приблизительной удельной активности белка 2.6 х 10 8 МЕ/мг (согласно результатам измерений жидкостной хроматографии высокого разрешения). ³ Флакон с 10 млн МЕ интерферона альфа 2-а для внутриязвенного введения необходимо предварительно приготовить, используя 1 мл предоставленного растворителя. Перед введением Интрон А необходимо приготовить с использованием предоставленного растворителя, что представляет собой воду с бактериостатическими свойствами для инъекций с содержанием 0.9 % бензилового спирта в качестве консерванта. Интрон А, в форме порошка для инъекций, представляет собой порошок белого или кремового цвета. Интрон А

20 Раствор для инъекций во флаконах Интрон А Активность вещества Финальная концентрация ¹ mg Intron A² Interferon alfa-2b, recombinant Способ введения 3 млн МЕ3 млн МЕ/0.5 мл0.012IM, SC 5 млн МЕ5 млн МЕ/0.5 мл0.019IM, SC, IL 10 млн МЕ10 млн МЕ/1.0 мл0.038IM, SC, IL 18³ млн МЕ3 млн МЕ/0.5 мл0.088IM, SC 25 4 млн МЕ3 млн МЕ/0.5 мл0.123IM, SC, IL

21 ¹ Каждый мл также содержит 7.5 мг хлорида натрия, 1.8 мг двуосновного фосфата натрия, 1.3 мг одноосновного фосфата натрия, 0.1 мг двунатриевого ацетата, 0.1 мг полисорбата 80 и 1.5 мг м-крезола в качестве консерванта. ² Расчеты даны на основании приблизительной удельной активности белка 2.6 х 10 8 МЕ/мг (согласно результатам измерений при помощи жидкостной хроматографии высокого разрешения). ³ Это мультидозовый флакон, который содержит 22.8 млн МЕ интерферона альфа-2b рекомбинантного на 3.8 мл для обеспечения введения шести доз по 0.5 мл, каждая из доз концентрацией 3 млн МЕ Интрона А интерферона альфа-2b, рекомбинантного для инъекций (при заявленной концентрации 18 млн МЕ). 4 Это мультидозовый флакон, который содержит 32.0 млн МЕ интерферона альфа-2b рекомбинантного на 3.2 мл для обеспечения введения пяти доз по 0.5 мл, каждая из доз концентрацией 5 млн МЕ Интрона А интерферона альфа-2b, рекомбинантного для инъекций (при заявленной концентрации 25 млн МЕ). Интрон А

22 Раствор для инъекций в мультидозовых ручках Интрон А Активность вещества Финальная концентрация¹ Intron A Вводимая доза млн МЕ/мл мг Intron A (6 доз, каждая по 0,2 мл) ² Способ введения 18 млн МЕ22.5 млн МЕ/1.5 мл3 млн МЕ/ доза 0.087SC 30 млн МЕ37.5 млн МЕ/1.5 мл5 млн МЕ/ доза 0.144SC 60 млн МЕ75 млн МЕ/1.5 мл10 млн МЕ/ доза 0.288SC

23 ¹ Каждый мл также содержит 7.5 мг хлорида натрия, 1.8 мг двуосновного фосфата натрия, 1.3 мг одноосновного фосфата натрия, 0.1 мг двунатриевого ацетата, 0.1 мг полисорбата 80 и 1.5 мг м-крезола в качестве консерванта. ² Расчеты даны на основании приблизительной удельной активности белка 2.6 х 10 8 МЕ/мг (согласно результатам измерений при помощи жидкостной хроматографии высокого разрешения). Раствор для инъекций во флаконах и мультидозовых ручках не требует приготовления перед введением. Раствор Интрон А представляет собой прозрачную, бесцветную жидкость. Интрон А

24 Роферон-А Производитель – Hoffmann-La Roche, Inc.(Switzerland) Показания к применению: - волосато-клеточный лейкоз, - саркома Капоши, - хроническая фаза с филадельфия-позитивной хромосомой хронической миелоидной лейкемии, - гепатит C.

25 Интерферон альфа 2a Рекомбинантный Для инъекционного применения Высокоочищенный, стерильный, рекомбинантный продукт Состоит из 165 аминокислот, с приблизительной молекулярной массой дальтон. Роферон-А

26 Роферон-A производится с помощью рекомбинантных ДНК технологий с использованием генетически модифицированной бактерии Escherichia coli, содержащей ДНК, несущей информацию о человеческом интерфероне. Интерферон альфа-2а, рекомбинантный является высокоочищенным белком, состоящим из 165 аминокислот, с приблизительным молекулярным весом в дальтон. Ферментация проводится в питательной среде, содержащей 5 мг/л антибиотика тетрациклина гидрохлорида. Однако наличие антибиотика не выявляется в конечном продукте. Роферон-А выпускается во флаконах и/или в шприцах-ручках. Каждый шприц содержит 0.5 мл продукта. Дополнительно, имеется игла длиной в 0.5 дюйма. Роферон-А

27 Раствор для инъекций во флаконах одноразового применения : 3 млн МЕ (11.1 мкг/мл) Roferon-A per vial Раствор бесцветный и каждый мл содержит 3 млн МЕ интерферона альфа-2а, рекомбинантного, 7.21 мг хлорида натрия, 0.2 мг полисорбата 80, 10 мг бензилового спирта в качестве консерванта и 0.77 мг ацетата аммония. 6 млн МЕ (22.2 мкг/мл) Roferon-A per vial Раствор бесцветный и каждый мл содержит 6 млн МЕ интерферона альфа-2а, рекомбинантного, 7.21 мг хлорида натрия, 0.2 мг полисорбата 80, 10 мг бензилового спирта в качестве консерванта и 0.77 мг ацетата аммония. 9 млн МЕ (33.3 мкг/0.9 мл) Roferon-A per vial Раствор бесцветный и каждые 0.9 мл содержат 9 млн МЕ интерферона альфа-2а, рекомбинантного, 6.49 мг хлорида натрия, 0.18 мг полисорбата 80, 9 мг бензилового спирта в качестве консерванта и 0.69 мг ацетата аммония. Также может быть использован для многоразового введения. 36 млн МЕ (133.3 мкг/мл) Roferon-A per vial Раствор бесцветный и каждый мл содержит 36 млн МЕ интерферона альфа-2а, рекомбинантного, 7.21 мг хлорида натрия, 0.2 мг полисорбата 80, 10 мг бензилового спирта в качестве консерванта и 0.77 мг ацетата аммония. Роферон-А

28 Шприцы-ручки разового применения: 3 млн МЕ (11.1 мкг/0.5 мл) Roferon-A per syringe Раствор бесцветный и каждые 0.5 мл содержат 3 млн МЕ интерферона альфа-2а, рекомбинантного, мг натрия хлорида, 0.1 мг полисорбата 80, 5 мг бензилового спирта в качестве консерванта и мг аммония ацетата. 6 млн МЕ (22.2 мкг/0.5 мл) Roferon-A per syringe Раствор бесцветный и каждые 0.5 мл содержат 6 млн МЕ интерферона альфа-2а, рекомбинантного, мг натрия хлорида, 0.1 мг полисорбата 80, 5 мг бензилового спирта в качестве консерванта и мг аммония ацетата. 9 млн МЕ (33.3 мкг/0.5 мл) Roferon-A per syringe Раствор бесцветный и каждые 0.5 мл содержат 9 млн МЕ интерферона альфа-2а, рекомбинантного, мг натрия хлорида, 0.1 мг полисорбата 80, 5 мг бензилового спирта в качестве консерванта и мг аммония ацетата. Роферон-А

29 Раствор для инъекций во флаконах многоразового применения : 9 млн МЕ (33.3 мкг/0.9 мл) Roferon-A per vial Раствор бесцветный и каждые 0.9 мл содержат 9 млн МЕ интерферона альфа-2а, рекомбинантного, 6.49 мг хлорида натрия, 0.18 мг полисорбата 80, 9 мг бензилового спирта в качестве консерванта и 0.69 мг ацетата аммония. Также может быть использован для однократного введения.. 18 млн МЕ (66.7 мкг/3 мл) Roferon-A per vial Раствор бесцветный и каждый мл содержит 6 млн МЕ интерферона альфа-2а, рекомбинантного, 7.21 мг хлорида натрия, 0.2 мг полисорбата 80, 10 мг бензилового спирта в качестве консерванта и 0.77 мг ацетата аммония. Каждые 0.5 мл содержат 3 млн МЕ интерферона альфа-2а, рекомбинантного. Основываясь на удельной активности белка 2.7x10 8 МЕ/мг, соответственные активности интерферона альфа-2a, рекомбинантного, во флаконах, описанных выше, будут приблизительно следующие: 3 млн МЕ (11.1 мкг/мл), 6 млн МЕ (22.2 мкг/мл), 9 млн МЕ (33.3 мкг/0.9 мл), 18 млн МЕ (66.7 мкг/3 мл) и 36 млн МЕ (133.3 мкг/мл). Способ введения для флаконов – подкожный либо внутримышечный; для шприц-ручек –только подкожный. Роферон-А

30 Infergen Производитель – InterMune Pharmaceuticals, Inc., and Amgen (USA) Показания к применению: - гепатит С (у пациентов 18 лет и старше с компенсированной болезнью печени, имеющих в сыворотке анти-HCV антитела или РНК вируса гепатита С), - последующее лечение HCV-инфицированных пациентов, которые хорошо перенесли первоначальный курс интерферонотерапии.

31 Интерферон альфакон-1 Рекомбинантный Для подкожного введения Infergen

32 Интерферон альфакон-1 – рекомбинантный интерферон 1-го типа, не встречающийся в природе. 166-аминокислотная последовательность интерферона альфакон-1 была получена путем сканирования нескольких природных подтипов интерферона-альфа, и определения наиболее часто встречающегося аминокислотного остатка для каждой позиции. Еще четыре замены аминокислотных остатков были сделаны с целью оптимизации молекулярной структуры. Полученная в результате ДНК-последовательность была синтезирована методами химического синтеза. Интерферон альфакон-1 отличается от интерферона альфа-2b на 20/166 аминокислот (88% гомология), и сравнение структуры с интерфероном-бета показывает идентичность по более чем 30% аминокислот. Интерферон альфакон-1 производится из клеток Escherichia coli, в которые был внедрен ген, кодирующий интерферон альфакон-1. Перед финальной очисткой, интерферон альфакон-1 окисляется до нативной формы. Финальная очистка осуществляется с помощью нескольких стадий колоночной хроматографии. Этот белок имеет молекулярный вес дaльтон. Infergen

33 Представляет собой прозрачную, бесцветную жидкость без консервантов, с содержанием 100 ммоль натрия хлорида и 25 ммоль натрия фосфата при pH 7.0 ± 0.2. Форма выпуска: флаконы одноразового применения и шприц-ручки объемом 0.3 мл и 0.5 мл с содержанием 9 мкг и 15 мкг интерферона альфакон-1 соответственно. Состав согласно USP (уникальному торговому предложению): мг/мл интерферона альфакон мг/мл натрия хлорида мг/мл натрия фосфата Шприц-ручка Infergen SingleJect представляет собой стеклянный цилиндр с 26 делениями, игла размером 5/8 дюйма. Препарат готовый к применению, не требует приготовления. Infergen

34 Виферон Производитель – ООО «Ферон» (Россия) Показания к применению: - в комплексной терапии различных инфекционно-воспалительных заболеваний у новорожденных детей, в том числе недоношенных: острые респираторные вирусные инфекции (ОРВИ), пневмония (бактериальная, вирусная, хламидийная), менингит, сепсис, специфическая внутриутробная инфекция (хламидиоз, герпес, цитомегаловирусная инфекция, энтеровирусная инфекция, висцеральный кандидоз, микоплазмоз); - в комплексной терапии хронических вирусных гепатитов В, С, D у детей, а также в терапии хронических вирусных гепатитов выраженной степени активности и цирроза печени с применением плазмафереза и гемосорбиции; - в качестве интерферонкорригирующего средства у беременных с урогенитальной инфекцией (хламидиоз, генитальный герпес, цитомегаловирусная инфекция, уреаплазмоз, трихомониаз, гарднереллез, папилломавирусная инфекция, бактериальный вагиноз, рецидивирующий влагалищный кандидоз, микоплазмоз); - в комплексной терапии гриппа и других острых респираторных вирусных заболеваний, в том числе осложненных бактериальной инфекцией у взрослых.

35 Форма выпуска – суппозитории ректальные. Суппозиторий имеет пулевидную форму, желтовато-белого цвета однородной консистенции. Допускается неоднородность окраски в виде мраморности и наличие на срезе воронкообразного углубления. Диаметр суппозитория не более 10 мм. 1 суппозиторий ВИФЕРОН МЕ (Виферон-1) содержит интерферон человеческий рекомбинантный альфа тыс. МЕ, аскорбиновую кислоту 0,015 г, токоферола ацетат 0,055 г, основу масло какао и твердый жир. 1 суппозиторий ВИФЕРОН МЕ (Виферон-2) содержит интерферон человеческий рекомбинантный альфа тыс. МЕ, аскорбиновую кислоту 0,022 г, токоферола ацетат 0,055 г, основу масло какао и твердый жир. 1 суппозиторий ВИФЕРОН МЕ (Виферон-3) содержит интерферон человеческий рекомбинантный альфа-2 1млн МЕ, аскорбиновую кислоту 0,022 г, токоферола ацетат 0,055 г, основу масло какао и твердый жир. 1 суппозиторий ВИФЕРОН МЕ (Виферон-4) содержит интерферон человеческий рекомбинантный альфа-2 3 млн МЕ, аскорбиновую кислоту 0,022 г, токоферола ацетат 0,055 г, основу масло какао и твердый жир. Виферон

36 Реаферон-ЕС Производитель – Вектор-Медика ЗАО (Россия) Показания к применению: В комплексной терапии у взрослых: при остром вирусном гепатите В - среднетяжелых и тяжелых формах в начале желтушного периода до 5-го дня желтухи (в более поздние сроки назначение препарата менее эффективно); при остром затяжном гепатите В и С, хроническом активном гепатите В, С и D без признаков цирроза и при появлении признаков цирроза печени; при вирусных (гриппозных, аденовирусных, энтеровирусных, герпетических, паротитных), вирусно-бактериальных и микоплазменных менингоэнцефалитах. Применение препарата наиболее эффективно в первые 4 дня заболевания; при вирусных конъюнктивитах, кератоконъюнктивитах, кератитах, кератоувеитах; при раке почки IV стадии, волосато-клеточном лейкозе, злокачественных лимфомах кожи (грибовидный микоз, первичный ретикулез), саркоме Капоши, базально-клеточном и плоскоклеточном раках кожи, кератоакантоме, хроническом миелолейкозе, гистеоцитозе-Х, сублейкемическом миелозе, эссенциальной тромбоцитопении; при рассеянном склерозе. В комплексной терапии у детей: при остром лимфобластном лейкозе в периоде ремиссии после окончания индуктивной химиотерапии (на 4-5 месяце ремиссии); при респираторном папилломатозе гортани, начиная со следующего дня после удаления папиллом.

37 Состав и форма выпуска: Лиофилизированный порошок в ампулах по 1 мл по 5 шт или 10 шт в упаковке. 1 ампула Реаферон ЕС содержит 1 млн, 3 млн или 5 млн ME интерферона альфа- 2а. Реаферон-ЕС-Липинт лиофилизированный порошок для перорального применения во флаконах по 1 мл по 1,5 или 10 флаконов в упаковке. 1 флакон Реаферон-ЕС-Липинт содержит 0,5 млн МЕ интерферона альфа-2а, заключенного в липосомы; витамин Е 10 мг, витамин С 1,5 мг.витамин Евитамин С Реаферон-ЕС

38 Реальдирон Производитель – SICOR Biotech (Литва)/ TEVA (Израиль) Показания к применению: Вирусные заболевания: – острый гепатит B; – хронический активный гепатит B; – хронический гепатит C; – клещевой энцефалит (в т.ч. менингитная форма). Онкологические заболевания: – волосатоклеточный лейкоз; – хронический миелолейкоз; – почечно-клеточная карцинома (в т.ч. при метастазах в легкие); – саркома Капоши на фоне СПИД; – кожная Т-клеточная лимфома (грибовидный микоз и синдром Сезари); – злокачественная меланома.

39 Форма выпуска – лиофилизированный порошок для инъекций в ампулах и флаконах. Прочие ингредиенты: полиглюкин (декстран 60) 10 мг, натрия хлорид 9 мг, динатрий гидрофосфат додекагидрат 2.74 мг, натрий дигидрофосфат дигидрат 0.36 мг (на 1 ампулу/1 флакон). Реальдирон Активность вещества Интерферон альфа 2b 1 млн МЕ 3 млн МЕ 6 млн МЕ 9 млн МЕ 18 млн МЕ

40 Off-label показания по применению интерферона альфа Идиопатическая тромбоцитемия Истинная полицитомия Острый миелодиспластический синдром Пре-лейкемия Диссеминированные злокачественные опухоли Хронический лимфолейкоз Лимфогранулематоз Лимфобластный лейкоз Ретикуло-саркоматоз Пост-радиотерапия Хронический тонзиллит Грипп Вирусные респираторные заболевания Стоматит Опоясывающий лишай Герпетический стоматит Цитомегаловирусная инфекция Сепсис Менингиты разной этиологии Менингоэнцефалит Пневмония различной этиологии Омфалит Конъюнктивит ВИЧ/СПИД Мукоз различной этиологии Ретикуломатоз Расеянный склероз

41 Клинические испытания IFN-α Клинические исследования ОНКОЛОГИЯ ИНФЕКЦИОННЫЕ ЗАБОЛЕВАНИЯ Герпесвирусы, папилломавирусы и другие ВИЧ-инфекция Вирусные гепатиты В,С,D Опухоли системы крови Солидные опухоли

42 Schlossberg et al. Journal of Clinical Oncology Vol. 23, No ; 7571 Low-Dose Thalidomide and IFN-α2b in patients with metastatic melanoma 15 пациентов с 4 стадией меланомы, после первой линии терапии получили комбинацию талидомида и ИФН альфа 2b Выводы исследования: Комбинация талидомида и интерферона альфа может быть эффективным паллиативным лечением для больных с 4 стадией меланомы IFN-α: перспективные направления Mеланома

43 E. Bajjeta Annals of Oncology 17; , 2006 Multicenter phase III randomized trial of polychemotherapy (CVD reginem) versus the same chemotherapy (CT) plus subcutaneous interleukin-2 and interferon-α2b in metastatic melanoma 151 пациент с нелеченой меланомой были распределены на 2 группы: 1-ая группа получала сочетание химиотерапии (цисплатин, виндезин, дакарбазин) и 2-ая группа, которая получала химиотерапию и цитокины (интерлейкин- 2 и интерферон-α2b) Выводы исследования: Присоединение цитокинов к химиотерапии позволило получить повышение уровня ответа на 12% (33 vs 21 в группе ХТ). У 4% пациентов с биохимиотерапией был получен полный ответ. IFN-α: перспективные направления Меланома (2)

44 Roland Kaufmann et al Journal of Clinical Oncology Vol. 23, #35, Temozolomide in Combination With Interferon-Alfa Versus Temozolomide Alone in Patients With Advanced Metastatic Melanoma: A Randomized, Phase III, Multicenter Study from Dermatologic Cooperative Oncology Group 294 пациента с IV стадией меланомы были распределены на 2 группы: 1-ая группа получала темозоламид и 2-ая группа получала темозоламид с интерфероном-α Выводы исследования: В группе темозоламид + интерферон процент ответа на лечение был значительно выше (24,1% vs 18%). Общая выживаемость составила 9,7 месяцев в комбинированной группе против 8,4 месяцев в группе темозоламида. IFN-α: перспективные направления Меланома (3)

45 Janice N. Cormier Journal of Clinical Oncology Vol. 25, #17, 2007 Cost Effectiveness of Adjuvant Interferon in Node Positive Melanoma На основе математической модели Маркова была опробована возможная история развития меланомы со стадиями II A, III B, II C у пациентов 50-ти лет. Результаты исследования: Высокодозная адьювантная терапия интерфероном повышает возможную продолжительность жизни (4,42 года против 3,75 года без лечения). Сочетание цена-эффективность составляет $ с интерфероном и $ без его использования. Выводы: Модель демонстрирует меньшие финансовые затраты на лечение меланомы с использованием высокодозной адьювантной терапии интерфероном. IFN-α: перспективные направления Меланома (4)

46 Robert W. Weber Journal of Clinical Oncology Vol. 23, #35, Low-Dose Outpatient Chemobiotherapy With Temozolamide, Granulocyte – Macrophage Colony Stimulating Factor, Interferon-α2b, and Recombinant IL-2 for the Treatment of Metastatic Melanoma 28 пациентов с неоперабельной меланомой получали в амбулаторных условиях темозоламид с последующей терапией гранулоцитарным колониестимулирующим фактором, интерфероном-α и рекомбинантным интерлейкином. Выводы исследования : Низко-дозовая химиобиотерапия вызывает выраженный клинический эффект, хорошо переносится. Это может стать альтернативой высоко-дозовой терапии за счет снижения сроков госпитализации. Также данная комбинация ХТ и цитокинов может снижать риск метастазов в головной мозг. IFN-α: перспективные направления Меланома (5)

47 A. Z.S. Rohctiner et al. Journal of Clinical Oncology Vol. 23, #10, Meta-analysis to Evaluate the Role of Interferon in Follicular Lymphoma Было проанализировано результаты 10-ти клинических исследований с использованием ИФН-α 2 у 1992 пациентов с диагностированной лимфомой. Результаты исследования: Использование ИФН-α 2 вызывает увеличение общей выживаемости при сочетании с интенсивной инициальной химиотерапией (от 5*10 6 IU) и в общей дозе 36*10 6 IU в месяц. Выводы: При использовании ИФН-α в высоких дозировках и достаточной продолжительности лечения отмечено увеличение выживаемости и длительность ремиссии у пациентов с фолликулярной лимфомой. IFN-α: перспективные направления Фолликулярная лимфома

48 Cristopher W. Ryand et al. Journal of Clinical Oncology Vol. 25, No 22, Sorafenib with Interferon α-2b as first line treatment of Advancer renal Carcinoma: A phase 2 Study of the Southwest Oncology Group 62 пациента с нелеченным метастатическим или нерезектабельным раком почки получали системную терапию ИФН aльфа и ингибитором тирозинкиназы Сорафенибом Выводы исследования: У 19% пациентов получен объективный ответ, у 50% частичный ответ и стабилизацию болезни. Средняя продолжительность выживания без прогрессирования составила 7 месяцев. Сочетание ИФН aльфа и Сорафениба дает лучший клинический ответ, чем их использование в монотерапии. IFN-α: перспективные направления Рак почки

49 С.G.Schaar et al. Annals of Oncology Vol. 16, Interferon Alfa as maintenance therapy in patients with multiple myeloma 262 пациентa получали индукционную терапию мелфаланом- преднизолоном. 90 из них были определены для проведения поддерживающей терапии ИФН aльфа 2b Выводы исследования: Проведение поддерживающей терапии ИФН значительно увеличило безрецидивную выживаемость(13,5 месяцев против 8,4 месяцев без лечения) и улучшило общую выживаемость. IFN-α: перспективные направления Mиеломная болезнь

50 Milton Berger et al. Pharmaceutical Science 10(2); , 2007 Phase I Study with an Autologous Tumor Cell Vaccine for Locally Advanced or Metastatic Prostate Cancer На основе фрагментов опухоли прооперированных пациентов с раком простаты была создана вакцина из прошедших инкубацию ИФН, культивируемых опухолевых клеток. Выполнено 11 введений вакцины. Выводы исследования: Введение вакцины индуцировало позитивный иммунный клеточный ответ, подтвержденный снижением PSA(простато-специфического антигена) IFN-α: перспективные направления Рак простаты

51 A. Metha et al. Journal of Clinical Oncology, Vol. 25, #185, 2007:15542 A Phase II trial of 13 cis-retinoid acid, IFN, docetaxel and estramustine (RITE) for the treatment of hormone refractory prostate cancer (HRPC) 20-ти пациентам с гормонально-рефракторным раком простаты получили лечение по схеме RITE (доцетаксел, ИНФ-α, эстрамустин) с целью снижения экспрессии анти- аппоптического протеина Bcl – 2 Выводы исследования: У 19 пациентов было обнаружено объективное снижение PSA, что показывает эффективность использования Bcl – 2 модулирующего агента(интерферона) с доцетакселом в лечении рака простаты. IFN-α: перспективные направления Рак простаты (продолжение)

52 Rodney A. Prell еt al. Cancer Research 2005; 65(6), March Administration of IFN-α Enhances the Efficacy of a Granulocyte Macrophage Colony Stimulating Factor-Secreting Tumor Cell Vaccine В преклиническом исследовании группе лабораторных мышей вводилась вакцина на основе клеток опухоли меланомы в сочетании с интерфероном и гранулоцитостимулирующим фактором роста, другая получала только вакцину. Выводы исследования: Отмечено повышение частоты обнаружения меланома-ассоциированого антигена более чем в 30 раз. Эти результаты показывают, что ИФН значительно повышает активность вакцины за счет своего антипролиферативного, проаппоптического и антиантигенного действия, что может представлять абсолютно новый подход в иммунотерапии опухолей. IFN-α: перспективные направления Интерферон в вакцинотерапии

53 Angela Papageorgiou Molecular Cancer Therapy 2006, # 5; Combination Therapy with IFN-α Plus Bortezomib Induces Apoptosis and Inhibits Angiogenesis in Human Bladder Cancer Cells Выводы исследования: На модели клеточной линии рака мочевого пузыря было показано, что сочетание IFN-α и ингибитора протеасомы бортезомида вызывает апоптоз и ингибирует ангиогенез преклинической модели рака мочевого пузыря. IFN-α: перспективные направления Рак мочевого пузыря

54 Takeshi Yausa et al. Clinical Cancer Research Vol. 11, 853–859, Jan A Third-Generation Bisphosphonate, Minodronic Acid (YM529), Augments the Interferon A/B-Mediated Inhibition of Renal Cell Cancer Cell Growth Both In vitro and In vivo Исследование проведено на 1 мышиной и 8 человеческих клеточных линиях рака почки, которые были трансплантированы подкожно лабораторным мышам. Для лечения был применен бифосфонат 3-го поколения в сочетании с ИФН Выводы исследования: Совместное применение бифосфоната 3-го поколения с ИФН статистически повысило противоопухолевый эффект ИФН in vivo и in vitro. Данный синегризм может быть многообещающей терапевтической стратегией IFN-α: перспективные направления Рак почки: IFN и бифосфонаты

55 IFN-α: перспективные направления ИФН в лечении первичного рака печени ПубликацияАвторы и название исследования Дизайн Korean J. Intern. Med 1996;11;58–68Ji и др. Combined cisplatinum and IFN-α therapy of advanced hepatocellular carcinoma 36 пациентов с неоперабельным раком печени получили сочетание цисплатин-интерферон; уровень ответа 13% Clin Cancer Research 1999:5; 1676– 1681 Leung TW Complete pathological remission is possible with systemic combination chemotherapy for inoperable hepatocellular carcinoma 50 пациентов с неоперабельным раком печени получили комбинацию цисплатина, ИФН-α, доксорфицина и 5-ФУ (PIAF). У половины пациентов отмечено 50% снижение АФП, 9 пациентов смогли быть прооперированы, а у 4 отмечена полная ремиссия J. Nat. Cancer Inst 2005; 97; Yeow et al A randomized phase III study of doxorubicine vs cisplatin/IFN- α/doxorubicine/PIAF, комбинированной терапии for urrescectible hepatocellular carcinoma Рандомизированное исследование доксорубицина vs. цисплатин / ИФН-α (PIAF), комбинированная терапия неоперабельного рака печени, III фаза испытаний The Oncologist 2005; 10, 718–727Schwarz и др. Thalidomide in advanced hepatocellular carcinoma with optional low-dose IFN-α 2a upon progression 38 пациентов получали сочетание талидомида и ИФН; отмечено увеличение общей выживаемости на 2,1 мес., общая выживаемость составила 5,5 мес.

56 Jose A.Seixas-Silva Otolaryngolology Head Neck Surgery 2005; 131: 304–307 Phase 2 Bioadjuvant Study of IFN α 2a, Isotretinoin and Vitamin E in locally Advanced Squamous Cell Carcinoma of the Head and Neck 45 пациентов с 3-4 стадией плоскоклеточного рака головы и шеи, получивших комбинированную терапию (хирургия, радиотерапия), прошли 12-месяцев курса биоадьювантной терапии (изотретион, интерферон α 2a, витамин Е). Уровень 5-летней выживаемости в 2 раза превысил обычный (80% vs 40%) Выводы исследования : Биоадьювантная комбинация имеет высокую эффективность в предотвращении рецидива и возникновения вторичной опухоли. IFN-α: перспективные направления Опухоли головы и шеи

57 M. Liu et al. Neuroendocrinology Jan 1, 2005, 82 (5-6): Efficient human interferon-α gene transfer to neuroendocrine tumor cells with long-term and stable expression Ген человеческого интерферона-α2 был перемещен в клеточную линию нейроэндокринной опухоли, которая была введена лабораторной мыши. Выводы исследования: Введение гена ИНФ-α вызвало выраженную антипролиферативную и антиантигенную активность в клеточных моделях нейро-эндокринных опухолей, что есть подтверждением эффективности ИНФ-α как новой стратегии терапии нейро-эндокринных опухолей. IFN-α: перспективные направления Нейро-эндокринные опухоли

58 IFN-α (2a, 2b) в лечении инфекционных заболеваний Хронические вирусные инфекции поддаются лечению IFN-α лучше, чем острые; В перспективе, общая тенденция в лечении инфекционных заболеваний – комбинированная терапия: - IFN-α + IFN γ - IFN-α + TNF-α - IFN-α + ILs - ….

59 IFN-α для лечения инфекционных заболеваний: текущая ситуация 1.Хронические гепатиты B, C и D - IFN-α является основным препаратом в терапии этих инфекций; - широкое клиническое использование во всем мире 2.ВИЧ-инфекция - применение в комбинации с зидовудином и другими химиотерапевтическими агентами позволяет снизить вирусную нагрузку (синергистическое действие) 3.Папилломавирусные инфекции - IFN-α утвержден для лечения папилломавирусных инфекций гортани, кожи и мукозных мембран; - клиническое применение >20 лет, ограничено высокой стоимостью и побочными эффектами IFN-α 4.Герпетический кератит (Herpes keratitis) - IFN-α высокоактивны при комбинированной терапии, но имеют ограниченное клиническое использование 5.Инфекции верхних дыхательных путей - несмотря на многочисленные попытки, IFN-α пока не нашел своего места в терапии этих распространенных инфекций; - клинические исследования по использованию IFN-α для лечения гриппа и SARS продолжаются.

60 Aeckel EJ, Ornberg MC, Edemeyer HW et al. N Engl J Med 2001; 345(20): Treatment of Acute Hepatitis C With Interferon Alfa-2b 44 пациента с острым гепатитом С Выводы исследования: Ранняя терапия острого гепатита С одним интерфероном альфа-2b предупреждает развитие хронической инфекции ВГС у большинства пациентов Гепатит С

61 Khader YS, Dweek A, Alkafajei A et al. Journal of Pharmacy Practice, 2006, 19(5): Combination Therapy of Interferon and Ribavirin Versus Interferon Monotherapy in Treatment of Chronic Hepatitis C: A Meta-analysis of Clinical Trials Интерферон + рибавирин Анализ 31 рандомизированного и 7 нерандомизированных исследований Выводы исследования: Лечение комбинацией интерферона с рибавирином дает существенное улучшение вирусологического и биохимического ответов у пациентов с хроническим гепатитом С, независимо от первичной терапии. Гепатит С

62 Wong DKH, Cheung AM, ORourke K et al. Ann Intern Med 1993;119:312–23. Effect of Alpha-Interferon Treatment in Patients with Hepatitis B e Antigen-Positive Chronic Hepatitis B Анализ результатов 15 рандомизированных контролируемых исследований с участием 837 взрослых пациентов с инфекцией вируса гепатита В Выводы исследования: ИФН-α - эффективно действует против репликации вируса. Также после 3-6 месяцев терапии вирус не детектировался у HBeAg-позитивных пациентов на протяжении 6-12 месячного периода наблюдения после прекращения лечения. Гепатит В

63 Farci P, Roskams T, Chessa L et al. Gastroenterology 2004;126:1740–1749 Long-Term Benefit of Interferon-α Therapy of Chronic Hepatitis D: Regression of Advanced Hepatic Fibrosis 36 пациентов с хроническим гепатитом D Выводы исследования: Высокие дозы интерферона-α 2а существенно улучшают продолжительный клинический исход и повышают уровень выживаемости у пациентов с хроническим гепатитом D, даже не смотря на то, что у большинства наблюдался активный цирроз до начала терапии Гепатит D

64 Hatzakis A, Gargalianos P, Kiosses V et al. J Interferon & Cytokine Res : Low-Dose IFN-α Monotherapy in Treatment-Naive Individuals with HIV-1 Infection: Evidence of Potent Suppression of Viral Replication 27 пациентов с ВИЧ-1 инфекцией, которые ранее не проходили терапии Выводы исследования: Низкие дозы ИФН-α демонстрируют потенциальную анти-ВИЧ-1 активность in vivo без серьезных побочных эффектов. Благодаря таким свойствам ИФН-α является хорошим кандидатом для дальнейшего включения его в HAART (высокоактивную антиретровирусную терапию). ВИЧ

65 Доброкачественная опухоль гортани, в некоторых случаях трансформирующаяся в злокачественную; Опухолевый рост приводит к сужению просвета гортани, нарушению голосообразовательной и в последующем - дыхательной функции органа; => Хроническая респираторная гипоксемия; Патологический процесс в детском возрасте носит активный характер, для него характерны распространенность и частое рецидивирование; Дети подвергаются многократным хирургическим вмешательствам с целью удаления папиллом; => развитие рубцовых осложнений, необходимость трахеотомии; Особо тяжелые последствия: нарушениям в физическом, психомоторном и эмоциональном развитии ребенка, формированию хронической легочной патологии, дистрофии паренхиматозных органов, миокарда, центральной нервной и эндокринной систем Респираторный папилломатоз (папилломавирус)

66 В США ежегодно регистрируется около 2300 новых случаев заболевания у детей и 3600 случаев у взрослых (соответственно 0,6–4,3 и 1,6–3,8 на населения); В США ежегодная стоимость лечения детей, страдающих рецидивирующим респираторным папилломатозом, составляет 110 млн. $; Причиной развития респираторного папилломатоза является вирус папилломы человека 6-го или 11-го типа; IFN-α – единственный утвержденный вид терапии (помимо хирургического вмешательства); >20 лет использования в клинической практике; IFN-α снижает частоту рецидивов, во многих случаях ведет к полной ремиссии Респираторный папилломатоз (продолжение)

67 Ishihara T, Aga M, Hino K, Ushio C, Taniguchi M, Iwaki K, Ikeda M, Kurimoto M. Biomed Res Aug;26(4): Inhibition of Сhlamydia trachomatis growth by human interferon-alpha: mechanisms and synergistic effect with interferon-gamma and tumor necrosis factor-alpha Данные in vitro [культуры клеток: HeLa (цервикальные эпителиальные клетки), A549 (эпителиальные клетки дыхательных путей)] Выводы исследования: При добавлении IFN-α рост бактерий замедлялся дозо-зависимым образом; IFN-α в количестве 1000 IU/мл уменьшал количество хламидий на 52%; Способность С.trachomatis к инфицированию также снижалась под действием IFN-α; Комбинация IFN-α с IFN-γ или TNF-α имела более выраженную антихламидийную активность, чем каждый из цитокинов в отдельности; Ярко выраженный синергизм IFN-α + IFN-γ или IFN-α + TNF-α Chlamydia trachomatis IFN-α: перспективные направления

68 Sainz B Jr, Halford WP. J Virol Nov;76(22): Alpha/Beta interferon and gamma interferon synergize to inhibit the replication of herpes simplex virus type 1 Данные in vitro [культуры клеток: Vero, SK-N-SH, PMK (мышиные)] Выводы исследования: Каждый из интерферонов в отдельности (IFN-α, -β, -γ) клинически неэффективны для лечения герпетической инфекции, но: Комбинация IFN-α + IFN-γ уменьшала количество бляшек HSV в 17 раз, а Комбинация IFN- β + IFN-γ в 66 раз; Ярко выраженный синергизм действия комбинаций IFN-α + IFN-γ и IFN- β + IFN-γ Herpes simplex тип 1 (HSV-1) IFN-α: перспективные направления

69 Sainz B Jr, LaMarca HL, Garry RF, Morris CA. Virol J Feb 23;2:14 Synergistic inhibition of human cytomegalovirus replication by interferon- alpha/beta and interferon-gamma Данные in vitro [культуры клеток человеческих фибробластов] Выводы исследования: Каждый из интерферонов в отдельности (IFN-α, -β, -γ) замедляли рост ЦМВ в раз; Комбинация IFN-α + IFN-γ замедляла рост ЦМВ в 163 раза Комбинация IFN- β + IFN-γ в 662 раза; Ярко выраженный синергизм действия комбинаций IFN-α + IFN-γ и IFN- β + IFN-γ Цитомегаловирус (CMV) IFN-α: перспективные направления

70 Study of Alferon® LDO in Normal Volunteers Клиническое испытание, Фаза II Набор пациентов продолжается Утверждено Hemispherx Biopharma, сентябрь 2005 Асимптоматические лица, имевшие недавний контакт с SARS-пациентами Цели исследования: Рандомизированное плацебо-контролируемое исследование Определение безопасности и эффективности орально вводимой дозы интерферона альфа-n3 как антивирусного агента и иммуномодулятора SARS (Severe Acute Respiratory Syndrome) IFN-α: перспективные направления

71 Interferon as a Mucosal Adjuvant for Influenza Vaccine Given Intranasally Клиническое испытание, Фаза I Набор пациентов еще не начат Спонсор: National Institute of Allergy and Infectious Diseases (NIAID) 90 здоровых лиц в возрасте лет Цели исследования: Повышение эффективности вакцинации против гриппа Оценка эффективности противогриппозной вакцины в комбинации с IFN-α в сравнении с эффективностью той же вакцины без адъюванта IFN-α как адъювант для интра- назальной противогриппозной вакцины IFN-α: перспективные направления