А.М. Попов, Т.Ю. Вержбицкая, Г.А. Цаур, Е.В. Шориков, С.В. Цвиренко, Л.И. Савельев, Л.Г. Фечина Областная детская клиническая больница 1, Екатеринбург. - презентация

1 А.М. Попов, Т.Ю. Вержбицкая, Г.А. Цаур, Е.В. Шориков, С.В. Цвиренко, Л.И. Савельев, Л.Г. Фечина Областная детская клиническая больница 1, Екатеринбург Институт медицинских клеточных технологий, Екатеринбург Уральская государственная медицинская академия, Екатеринбург Изменения иммунофенотипа опухолевых клеток при В-линейном остром лимфобластном лейкозе у детей во время индукционной терапии по протоколу ALL-MB-2008 «Национальные дни лабораторной медицины России», 4-6 октября 2011, Москва

2 Минимальная остаточная болезнь (minimal residual disease, MRD) – состояние, обусловливающее развитие рецидива и связанное с сохранением опухолевых клеток в крайне низких концентрациях, ниже предела чувствительности морфологических методов

3 Предельная чувствительность цитологического исследования Предельная чувствительность проточной цитометрии и ПЦР Терапия Время наблюдения (годы) Относительное количество опухолевых клеток

4 Основные методы мониторинга MRD Количественная полимеразная цепная реакция Определение химерного гена Определение химерного транскрипта Определение клональных перестроек генов тяжелых цепей ИГ и ТкР Многоцветная проточная цитометрия

5 Применение проточной цитометрии для мониторинга MRD Определение лейкоз- ассоциированного иммунофенотипа (LAIP)

6 Изменения иммунофенотипа опухолевых клеток во время терапии G. Gaipa et al, Leukemia, 2005 A.J. van der Sluijs-Gelling et al, Leukemia, 2005 G. Gaipa et al, Leukemia, 2005 M. Borowitz et al, Cytometry B, 2005 G. Gaipa et al, Cytometry B, 2008 M.N. Dworzak et al, Blood, 2008 M.N. Dworzak et al, Cytometry B, 2010

7 Цель исследования – оценить изменения экспрессии опухолевыми клетками CD10, CD34, CD19, CD20, CD45 и CD58 на 15-й день терапии по протоколу ALL-MB-2008 и значимость этих изменений для мониторинга MRD

8 Пациенты и методы исследования 22 пациента с CD10(+) BCP-ALL и величиной MRD на 15-й день терапии > 0,01% 9-цветная проточная цитометрия (FACS Aria, BD): CD58 (AICD58-FITC, BC) CD11a (LFA-1-PE, BD) CD34 (581-PE-TexasRed, BC) CD38 (HIT2-PerCP-Cy5.5, BD) CD10 (HI10a-PE-Cy7, BD) CD19 (SJ25C1-APC, BD) CD20 (L27-APC-Cy7, BD) CD45 (2D1-AmCyan, BD) Syto 41 (Invitrogen) Оценивали: Среднюю интенсивность флюоресценции (MFI) Коэффициент вариации (CV) Долю позитивных клеток (%)

9 Выделение опухолевых клеток Опухолевые клетки Обратное гейтирование SSC FSC SSC CD19 Syto 41 SSCCD10 CD45 CD19(+)-клетки Ядросодержащие клетки

10 CD10 BCP 1 BCP 2 BCP 3 Зрелые В-лимфоциты Нормальное созревание В-лимфоцитов CD20CD45 CD34 TdT CD99CD38 CD11a CD44 CD58

11 CD10 p = 0,0030p = 0,0273 CD20 p = 0,0007 CD34 p = 0,0033 CD19CD45 p = 0,0001 CD58 p = 0,0017 Изменения иммунофенотипа (опухолевые клетки)

12 CD58 p = 0,0067 CD19 p = 0,1060 CD45 p = 0,0130 p = 0,0013 CD20 Изменения иммунофенотипа (В-лимфоциты)

13 CD10 CD45 15-й день Диагноз CD34CD58 Изменения иммунофенотипа (опухолевые клетки)

14 CD10 CD45 CD20 15-й день Диагноз CD19 Изменения иммунофенотипа (опухолевые клетки)

15 CD45 p = 0,0003 CD58 p = 0,3443 CD10 p = 0,0364 p = 0,1913 CD20 CD34 p = 0,0008 изменения распределения клеток Изменения иммунофенотипа (опухолевые клетки)

16 изменения распределения клеток 15-й день Диагноз CD34CD45 CD10

17 изменения доли позитивных клеток p = 0,0015 CD20CD34 p = 0,0003 CD45 p = 0,0002 Изменения иммунофенотипа (опухолевые клетки)

18 CD45 CD20 CD10 15-й день Диагноз CD34 изменения доли позитивных клеток Изменения иммунофенотипа (опухолевые клетки)

19 CD20CD10CD34 CD19CD45CD58 p = 0,0071 p = 0,0069 p = 0,0001 p = 0,0005 p = 0, 2117 Изменения иммунофенотипа опухолевых клеток во время индукционной терапии

20 Michael N. Dworzak, Angela Schumich, Dieter Printz, Ulrike Pötschger, Zvenyslava Husak, Andishe Attarbaschi, Giuseppe Basso, Giuseppe Gaipa, Richard Ratei, Georg Mann and Helmut Gadner CD20 up-regulation in pediatric B-cell precursor acute lymphoblastic leukemia during induction treatment: setting the stage for anti-CD20 directed immunotherapy Blood, 2008, Vol. 112, p

21 CD10 CD20 Пациент Б. (14 лет) День 0День 15День 36перед HRI перед HRIIперед HRIIIперед HRIVперед HRV

22 CD10 CD20 Пациент С. (11 месяцев) День 0День 15 День 36 День 43День 85

23 Выводы На 15-й день терапии по протоколу ALL-MB-2008 происходят существенные изменения иммунофенотипа опухолевых клеток Основными тенденциями изменения иммунофенотипа опухолевых клеток являются снижение экспрессии CD10, CD34, CD58 и повышение экспрессии CD19, CD20, CD45 Изменения иммунофенотипа усложняют мониторинг МОБ, так как уменьшают различия между нормальными и опухолевыми клетками

24 Благодарю за внимание!