Белки Нерегулярные полимеры Мономеры – аминокислоты В синтезе участвуют 20 а.к. (различаются по R): (различаются по R): Аминогрупп а Карбоксильная группа. - презентация

1 Белки Нерегулярные полимеры Мономеры – аминокислоты В синтезе участвуют 20 а.к. (различаются по R): (различаются по R): Аминогрупп а Карбоксильная группа СС H H H N O OH R Положительно заряженные Положительно заряженные Отрицательно заряженные Отрицательно заряженные Незаряженные полярные Незаряженные полярные Неполярные (гидрофобные) Неполярные (гидрофобные)

2 Белковая цепочка приобретает особую пространственную структуру (важна для осуществления функций) Последовательность а.к. в белке определяется последовательностью нуклеотидов в ДНК Денатурация белка приводит к потере им функции может быть обратимой и необратимой Белки

3

4

5 Нуклеиновые кислоты Нерегулярные биополимеры, мономерами которых являются нуклеотидыНерегулярные биополимеры, мономерами которых являются нуклеотиды ААААААААААAA – регулярный гомополимер АВСАВСАВСАВС – регулярный гетерополимер ABACCBACCCABB – нерегулярный полимер

6 Схема строения нуклеотида ОН OH О CH 2 NN N N О P О HОHОHОHО О – Фосфатная группа Углевод Азотистое основание Нуклеозид

7 Схема строения нуклеотида ОН OH О CH 2 NN N N О P О О – О P О О – О P О HОHОHОHО О – Фосфатных групп может быть 1, 2 или 3: В составе НК – монофосфат, Субстрат для синтеза НК – трифосфат, богат энергией При физиологическом pH каждый фосфат несет 1 отрицательный заряд

8 Схема строения нуклеотида ОН Х О CH 2 NN О P О О – HОHОHОHО N N 3` 4` 5` 2` 1` X: –H – дезоксирибоза (ДНК) стабильнее –OH – рибоза (РНК) –OH – рибоза (РНК) Атомы углерода в сахаре имеют нумерацию 1`– 5` Фосфат может быть присоединен к 3` или к 5`

9 Азотистые основания NN N N N N Пурины: Аденин (A) Гуанин (Г) Пиримидины: Цитозин (Ц) Тимин (Т) - только в ДНК Урацил (У) - только в РНК

10 Первичная последовательность НК Направление цепи: от 5` к 3` от 5` к 3` Полианион в клетке находится в виде соли K+ или Na+

11 Принцип комплементарности N O P P N O N N N P P N H H N N H H H ЦГ N N O O CH 2 P P HN N H H N N N P P TA Только между определенными парами: Г Ц прочнее A=T слабее В основе – водородные связи. Каждая связь слабая, но большое их число по всей длине НК Прочный комплекс

12 Вторичная структура ДНК 5` 3`3`3`3` 3`3`3`3` 5`

13

14 Структура РНК Чаще всего состоит из одной цепи, но есть отдельные двуцепочечные участки АТЦГЦА ТГЦГАТ Обращенный палиндром

15 Функции ДНК Хранение генетической информации Хранение генетической информации Передача информации из поколения в поколение (обеспечивается за счет репликации ДНК) Передача информации из поколения в поколение (обеспечивается за счет репликации ДНК) Реализация информации (опосредовано РНК) Реализация информации (опосредовано РНК)

16 Функции РНК Информационный посредник между ДНК и белком (матричные РНК) Информационный посредник между ДНК и белком (матричные РНК) ДНКРНК белок Участие в трансляции (рибосомальные РНК, транспортные РНК) Участие в трансляции (рибосомальные РНК, транспортные РНК) Участие в регуляции и осуществлении клеточных процессов (малые РНК, микроРНК) Участие в регуляции и осуществлении клеточных процессов (малые РНК, микроРНК) Аналогично функциям ДНК (геномные РНК вирусов) Аналогично функциям ДНК (геномные РНК вирусов)

17

18

19

20

21

22

23

24

25

26

27

28

29

30 Прокальцитонин Диагностический и прогностический параметр инфекции и воспаления.

31 Биохимия прокальцитонина. прокальцитонин (ПКТ), видоспецифический пропептид кальцитонина, представляет собой белок, состоящий из 116 аминокислотных остатков. концентрация ПКТ в плазме здоровых людей очень низка (

32 Прокальцитонин как индикатор бактериальных инфекции. Доказано, что у человека продукция ПКТ индуцируется бактериальными эндотоксинами. Повышенные концентрации ПКТ в плазме обнаруживаются при синдроме полиорганной недостаточности( СПОН), сепсисе, продолжительной недостаточности кровообращения. При вирусных инфекциях, неопластических и аутоиммунных процессах ПКТ обычно не индуцируется и только в исключительно редких случаях обнаруживается в низких концентрациях. Хронические воспалительные процессы небактериальной природы и аллергические реакции также не сопровождаются повышением ПКТ.

33 В норме концентрация ПКТ в плазме и сыворотке ниже нг/мл. Значения выше 0.5 нг/мл рассматриваются как патологические нг/мл- низкие или умеренно повышенные концентрации нг/мл- высокие концентрации нг/мл, а в редких случаях достигающие 1000 нг/мл,- расцениваются как очень высокие. Уровни ПКТ в плазме тесно связаны с системной реакцией воспалительного процесса, активностью иммунного ответа, распространенностью и локализацией воспалительного ответа.

34 Индукция ПКТ. Рассмотрим влияние эндотоксина – продукта Гр «-» бактерий – на концентрацию ПКТ. При введении эндотоксина E.coli внутривенно в дозе 4 нг/кг массы тела. Исследовались образцы крови, полученные до инъекции эндотоксина и спустя 1, 2, 4, 6, 8, 24 часа. Обнаружено, что ПКТ до инъекции эндотоксина и спустя 1 и 2 часа в сыворотке не выявляется. Впервые ПКТ регистрируется через 4 часа, резкое увеличение его концентрации (до 4 нг/мл) отмечается через 6 часов. Эта концентрация без признаков снижения сохраняется и спустя 24 часа после инъекции эндотоксина.

35 Исследование цитокинов показало, что уровни ФНО – а резко повышается через 1 час, достигает максимальных значений через 2 часа и нормализуется спустя 6 часов. Уровни Ил – 6 возрастает медленнее, достигая максимума через 3 часа и нормализуется спустя 8 часов.

36 Фактор Виллебранда повышается через 2 часа и достигает максимума через 4 часа, но спустя 24 часа остается достаточно высоким. Эти данные свидетельствуют о том, что в норме ПКТ у людей не обнаруживается. После введения эндотоксина концентрация ПКТ в крови быстро повышается, так же как у пациентов с системной и локальными инфекциями, т.е. приведенные данные свидетельствуют о том, что связь тяжелой инфекции и гиперпрокальцитонинемии в значительной степени обусловлена эндотоксином, а также в какой-то мере и другими продуктами бактерий, вирусов и медиаторов воспаления.

37 Максимальное значение фактора Виллебранда совпадает с подъемом ПКТ, поэтому было высказано предположение о том, что эндотелиальные клетки синтезируют ПКТ и являются клетками – мишенями для эндотоксина, ФНО – а и Ил – 6. Источником ПКТ под воздействием эндотоксина могут быть лейкоциты и макрофаги. Вполне вероятно, что выделение ПКТ может происходить и в органах, реагирующих на эндотоксин и цитокины, например в почках, селезенке, печени, легких. Селезенка, печень, легкие имеют собственные макрофаги, а медуллярные клетки почек способны самостоятельно синтезировать различные пептиды в ответ на эндотоксин и цитокины.

38 ПКТ в диагностике сепсиса, септического шока, синдрома полиорганной недостаточности. Сепсис остается наиболее частой причиной смерти больных в хирургических отделениях и палатах реанимаций, несмотря на убедительные успехи медицины. Сепсис характеризуется следующими клинико-лабораторными критериями: Наличие клинически подтвержденной инфекции Температура >38.5 или

39 Тахипноэ более 20 дых/мин или необходимость ИВЛ, или признаки органной дисфункции. Олигурия (4,0 л/мин на 1 кв.см, снижение сосудистого сопротивления Метаболический ацидоз, повышение уровня лактата. СЕПТИЧЕСКИЙ ШОК- это сепсис с артериальной гипотензией, рефрактерной к адекватной инфузионной терапии.

40 Корреляция ПКТ со степенью тяжести сепсиса. Классификация сепсиса по Bone ПКТ, нг/мл Число пациентов Без сепсиса Сепсис Тяжелый сепсис Септический шок 44.88

41 Синдром системного воспалительного ответа- ССВО(SIRS) –реакция системного воспаления организма, которая развивается в ответ на воздействие сильных раздражителей (травма, операция, инфекция, введение цитокинов и др.) и характеризуется двумя или более признаками: Температура >38.5 или 12*10 /л или 10%.

42 Среднее максимальное значение ПКТ 0 и 1-го дня в группах больных с ССВО. Группа больных Среднее значение ПКТ, нг/мл Число больных ССВО без инфекции ССВО + инфекции, подтвержденная микробиологическими методами ССВО + септицемия ССВО + септический шок Вся популяция 4.7

43 ПКТ является единственным параметром, способным в кратчайшие сроки установить различия между сепсисом, тяжелым сепсисом и септическим шоком, а именно в первые сутки поступления пациента в отделение реанимации или со дня появления симптомов воспаления. Динамика ПКТ при сепсисе и септическом шоке отражает усиление и снижение иммунного ответа организма. Быстрое снижение и нормализация повышенных уровней ПКТ почти в каждом случае указывают на улучшение клинической ситуации. У пациентов в критическом состоянии ПКТ быстро не снижается или сохраняется на патологических уровнях.

44 И почти во всех случаях летальных исходов регистрируется непрерывное повышение ПКТ. ПКТ, несомненно, является весьма ценным параметром для контроля эффективности проводимой терапии сепсиса. Значения ПКТ могут быть полезны в определении прогноза заболевания на каждом этапе лечения.

45 Дифференциальная диагностика и специфические показания для определения ПКТ. ПКТ- универсальный маркер, позволяющий устанавливать этиологию, степень тяжести и прогноз таких заболеваний, как: 1) Острый менингит. 2) Пневмония. 3) ОРДС. 4) Острый панкреатит.

46 5) Перитонит. 6) Малярия. 7)Мелиоидоз При аутоиммунных заболеваниях и др. системных патологиях ПКТ находится в области нормальных значений даже при наличии выраженных симптомов воспаления. У пациентов с высокой активностью аутоиммунных заболеваний нарушение в иммунной системе происходит как вследствие самого заболевания, так и в связи с иммуносупрессивной терапией, что создает высокий риск развития тяжелых системных инфекций.

47 Поскольку сходство клинических признаков аутоиммунных заболеваний и инвазивных инфекций велико, а лечение принципиально отличается, правильная диагностика этих заболеваний приобретает решающее значение. Выявлено, что ПКТ является полезным маркером для обнаружения системной бактериальной инфекции у пациентов с аутоиммунными заболеваниями. Отмечено, что у больных со злокачественной нейтропенией, а также в случаях ненейтропенического рака ПКТ является перспективным индикатором бактериемии.

48 При остром инфаркте миокарда без признаков инфекционных осложнений уровень ПКТ остается нормальным. ПКТ является ранним прогностическим маркером исходов операций на открытом сердце в условиях искусственного кровообращения, так как исследование показало, что повышение уровней ПКТ прямо пропорционально времени сердечно – легочного шунтирования с вазопрессорной поддержкой.

49 Применение ПКТ в трансплантологии. В отдельных случаях возникают затруднения в понимании причин нарушения функций пересаженного органа. Появляется необходимость в дифференцировке острого отторжения аллотрансплантата от инфекционных осложнений, поскольку их лечение принципиально отличается. На ранней стадии послеоперационного периода угрозу представляют преимущественно бактериальные и грибковые инфекции, в последующем- экзогенные вирусные инфекции или реактивация эндогенных вирусов.

50 Отторжение трансплантата (острое и хроническое), а также развитие вирусных инфекций не сопровождается повышением концентрации ПКТ в плазме. Показано, что с помощью ПКТ можно дифференцировать инфекцию и отторжение органа при лихорадке неясного генеза.

51 Методы определения концентрации ПКТ. I. Для измерения концентрации ПКТ в сыворотке и плазме крови используется иммунолюминометрический метод. II. Для количественного определения ПКТ в сыворотке и плазме крови человека используется прибор LUMItest. Этот метод основан на связывании ПКТ как антигена двумя антиген специфическими моноклональными антителами (в избытке).

52 Одно АТ фиксировано к стенке пробирки и связывает ПКТ в области катакальцина. Другое АТ, содержащее люминесцентную метку, связывается с ПКТ в области кальцитонина. При инкубации образуется хорошо фиксированные к стенке пробирки комплексы ПКТ и АТ в виде «сэндвича», которые остаются в пробирке после полного удаления из нее избытка метки. Количество метки, оставшейся на стенке пробирки после отмывания набором, определяется с помощью люминометра. Эти вещества реагируют с меткой АТ к кальцитониновой части ПКТ, вызывая ее свечение, которое измеряется люминометром. Интенсивность люминесцентного сигнала прямо пропорциональна концентрации ПКТ в исследуемой пробе.

53 После построения стандартной кривой с использованием стандартов с известной концентрацией АГ концентрация ПКТ в образцах сыворотки или плазмы пациента легко определяется количественно (нг/мл). Для определения ПКТ требуется 20мкл плазмы крови, а результат исследования можно получить через 2-2,5 часа. Практические преимущества определения ПКТ по сравнению с цитокинами: 1. ПКТ – стабильный протеи in vitro, не требует особых условий, поэтому может исследоваться в обычных лабораториях, где выполняется анализ крови. 2. Можно использовать как венозную, так и артериальную кровь.

54 Недостатки: 1.Рекомендуется постоянно пользоваться одним и тем же антикоагулянтом, т.к. применение различных антикоагулянтов в пробе может изменять показатели ПКТ на 5%. 2. На концентрацию ПКТ влияет инфузия ИЛ–2, препарата ОКТ-3 или перфузия изолированной конечности ФНО-а.

55 III. Иммунохроматографический ПКТ – экспресс – тест для полуколичественного определения ПКТ в плазме и сыворотке крови. Данное исследование занимает не более 30 мин и не требует специального прибора и калибровки. Для его проведения требуется не более 200мкл сыворотки крови. В тесте используется мышиные моноклональные АТ к катакальцину, коньюгированные с коллоидным золотом (трейсер), и поликлональные бараньи антикальцитониновые АТ (твердая фаза).

56 Сыворотка или плазма пациента вносится в лунку стрипа, инкубируется в течении 30 мин при комнатной температуре. Трейсер связывается с ПКТ образца с образованием комплекса АГ- АТ. Этот комплекс в зоне «опытной полоски» встречается с фиксированными антикальцитониновыми АТ, в результате формируется сэндвич-комплекс. При концентрации ПКТ >0.5нг/мл в образце комплекс принимает вид полосы красного цвета с разной интенсивностью, которая зависит от концентрации ПКТ в образце.

57 Сравнение окраски полосы исследуемого образца с эталонным рядом окрашенных полос, позволяет оценить концентрацию ПКТ в виде 4-х уровней. Простота методики позволяет провести исследования непосредственно в палате. Чувствительность метода – %, специфичность – 92-98%. Присутствие липидов или билирубина не сказывается на результатах теста. Но уровень гемоглобина > 5г/л влияет на правильную интерпретацию измерения.

58 Конечные продукты белкового обмена

59 Синтез мочевины

60 Креатинин

61 P*F мл/мин=U*d мл/мин F=U/P*d F= 70-(15+25)=30 мм рт.ст. Пример расчета фильтрационного давления:

62 «Калькуляторы» для расчета СКФ

63

64 Креатинин Классификация ХПЗ (ANA,2001 г.)

65 Креатинин Для мужчин Для женщин Нормативы концентрации креатинина крови: Мужчины мг/л ( мкмоль/л; ммоль/л) Женщины мг/л (53-88 мкмоль/л; ммоль/л) 88*(140-возраст годы)*вес тела кг СКФ= *концентрация креатинина плазмы (мкмоль/л) СКФ=результат * 0.85

66 Расчет СКФ для детей К= 0,33 недоношенные до 2-х лет К= 0,45 доношенные до 2-х лет К= 0, лет К= 0,55 девочки >14 лет К= 0,7 мальчики > 14 лет

67 Креатинин

68 Мочевая кислота

69

70 Причины гиперурикемии Увеличение образование уратаСнижение почечной экскреции Первичное Увеличение синтеза пуринов: идиопатическое наследственное нарушение метаболизма Первичное Идиопатическое Вторичное Избыточное пострупление пуринов с пищей Нарушение метаболизма АТФ: алкоголь гипоксия тканей Увеличение оборота нуклеиновых кислот: злокачественные новообразования псориаз цитотоксические препараты Вторичное ХПН Увеличение почечной реабсорбции/уменьшение секреции: Тиазидные диуретики Салицилаты (низкие дозы) Свинец Органические кислоты (например молочная кислота,в т.ч. Вследствие приема алкоголя)

71 Гомоцистеин и его роль в клинической практике.

72 Гомоцистеин – это серосодержащая аминокислота, образующаяся в процессе обмена метионина и цистеина. Метионин – единственный источник гомоцистеина в организме. Содержание гомоцистеина в пищевых продуктах ничтожно, и потребности человека в метионине и гомоцистеине обеспечиваются именно метионином пищи. В процессе метаболизма гомоцистеина важную роль играют витамины В6, В12 и фолиевая кислота.

73 Этапы в истории изучения гомоцистеина г.- впервые получено новое химическое вещество гомоцистеин гг..- Описаны генетические заболевания,связанные с нарушением обмена гомоцистеина г.- обнаружены гипергомоцистеинемия и гомоцистеинемия при сердечно- сосудистых заболеваниях.

74 90-е годы XX века – изучение гомоцистеина как фактора риска сердечно-сосудистых заболеваний и тромбоза.

75 ОБМЕН ГОМОЦИСТЕИНА.

76 Уровень ГЦ в плазме крови здоровых взрослых людей составляет 5-15 мкмоль/л В течение жизни средний уровень ГЦ увеличивается на 3-5 мкмоль/л. У детей уровень ГЦ ниже, чем у взрослых (менее 5 мкмоль/л).

77 Гипергомоцистеинемия (ГГЦ) диагностируется в случае превышения уровня 15 мкмоль/л. Степени тяжести ГГЦ: мкмоль/л- умеренная степень мкмоль/л- средняя степень Более 100 мкмоль/л- тяжелая степень.

78 Интерпретация значений уровня ГЦ в клинической практике. ГЦ12 мкмоль/л- повышенное значение (необходимо оценить возможные причины повышения).

79 В плазме крови человека ГЦ присутствует в трех молекулярных формах: Свободный ГЦСвободный ГЦ (у практически здоровых людей концентрация его очень низкая и не превышает 2% общего ГЦ в плазме крови). Дисульфид ГЦ (гомоцистин).Дисульфид ГЦ (гомоцистин). Дисульфид ГЦ с цистеиномДисульфид ГЦ с цистеином. Содержание дисульфидов ГЦ (гомоцистина и цистеина-ГЦ) составляет примерно 10-15%.

80 Все эти молекулярные формы ГЦ могут быть как в свободном виде, так и в связанном через дисульфидную связь с белком, главным образом альбумином. На уровень общего ГЦ влияет дефицит витаминов В 6, В 12 и фолиевой кислоты, необходимых для ключевых ферментов обмена ГЦ.

81 Факторы, влияющие на концентрацию ГЦ. Общий ГЦ диабет Витамин. статус Сердечно- сосудистые з-ия лекарства Возраст И пол Почечная нед-ть. Ген. факторы. Образ жизни З-ия щит. железы Пролиферативные заболевания Половые Стероидные гормоны

82 Гипергомоцистениемия и факторы способствующие ее развитию. Главными факторами, определяющими уровень гомоцистеина в плазме крови, являются концентрация и активность ферментов, обеспечивающих его метаболизм по пути деметилирования или десульфирования, с одной стороны, и функция почек, обеспечивающих выведение гомоцистеина из организма, с другой стороны. Наличие гипергомоцистеинемии в молодом возрасте нередко связано с генетически обусловленной патологией ферментов, участвующих в обмене гомоцистеина.

83 Гомоцистеин Гомоцистеин ускоряет развитие атеросклероза, по крайней мере, с помощью трех основных эффектов: токсическое действие на эпителий сосудов усиление адгезии тромбоцитов, неблагоприятные воздействия на факторы свертывания крови.

84 ГГЦ– фактор риска развития заболеваний артерий и тромбоза. В последние годы на основании результатов проведенных клинических и эпидемиологических исследований установлена взаимосвязь между уровнем гомоцистеина в плазме крови и развитием ИБС и мозговых инсультов. При возрастании уровня гомоцистеина в плазме крови увеличивается риск развития атеросклероза сосудов сердца, головного мозга и периферических сосудов

85 Повышение концентрации гомоцистеина на 5 мкмоль/л приводит к увеличению риска атеросклеротического поражения сосудов сердца на 80 % у женщин и на 60% у мужчин. Согласно данным O. Nygard и соавторов (1997г.), полученном при проспективном исследовании пациентов с ИБС, уровень смертности от сердечной недостаточности выше у больных с гипергомоцистениемией.

86 Гипергомоцистеинемия при нарушении функции почек. Важную роль в выведении гомоцистеина играют почки. Нарушение фильтрационной способности почек, показателем которой служит уровень креатинина в крови, ведет к снижению выведения гомоцистеина, вследствие чего концентрация гомоцистеина в крови повышается. У пациентов с тяжелыми заболеваниями почек и хронической почечной недостаточностью наблюдается постоянная умеренная гипергомоцистеинемия

87 Кроме того, почечная недостаточность приводит к повышенным потерям фолиевой кислоты, дефицит которой способствует развитию гипергомоцистеинемии. У пациентов, находящихся на гемодиализе, повышен риск развития атеросклероза и уровень смертности от инфаркта миокарда и инсульта, что связывают с наличием у этих больных гипергомоцистеинемии как независимого фактора риска развития атеросклероза. Нарушение функции почек приводит к развитию гипергомоцистеинемии как за счет нарушения выведения гомоцистеина из организма, так и за счет потери организмом фолиевой кислоты, необходимой для нормального обмена гомоцистеина.

88 Гипергомоцистеинемия и сахарный диабет Содержание гомоцистеина в плазме крови большей части больных сахарным диабетом выше, чем у здоровых лиц. Предполагают, что одной из причин гипергомоцистеинемии при сахарном диабете является гипергликемия, которая способствует потере организмом витаминов группы В, играющих важную роль в обмене гомоцистеина.

89 Гипергомоцистеинемия у пациентов, страдающих диабетом второго типа, достоверно (в 1,6 раз) увеличивает риск развития сердечно-сосудистых заболеваний, по сравнению со здоровыми людьми или лицами с пониженной толерантностью к глюкозе. При сочетании сахарного диабета с гипергомоцистеинемии чаще возникают сосудистые осложнения (заболевания периферических сосудов, нефропатия, ретинопатия и др.) Гипергомоцистеинемия является независимым фактором риска сердечно-сосудистых заболеваний, а также фактором риска летальности у больных сахарным диабетом второго типа. Повышение уровня общего гомоцистеина на 5 мкмоль/л повышает риск смертности за 5-летний период на 17% у лиц, не страдающих диабетом и на 60% у больных сахарным диабетом.

90 Гипергомоцистеинемия и осложнения беременности. Неблагоприятное воздействие гипергомоцистеинемии на эндотелий сосудов и стимуляция тромбообразования приводит к развитию ряда осложнений беременности. На ранних сроках беременности гипергомоцистеинемия может вызывать нарушения плацентации и расстройства фетоплацентарного кровообращения, результатом чего может стать бесплодие и невынашивание беременности. В более поздние сроки гипергомоцистеинемия может являться причиной хронической фетоплацентарной недостаточности, как результат, хронической гипоксии плода, внутриутробной гипотрофии и рождению детей с низким весом.

91 Достаточно высокая вероятность того, что именно гипергомоцистеинемия может явиться одной из причин ангиопатии второй половины беременности, которая лежит в основе гестоза:нефропатии, преэклампсии и эклампсии. Участие гомоцистеина а патогенезе гестоза опосредовано через развитие дисфункции эндотелиальных клеток. Показано, что с развитием гестозов содержание общего гомоцистеина в плазме крови у них достоверно выше, чем у здоровых беременных, причем концентрация фолиевой кислоты и витамина В12 в крови женщин этих двух групп не различалось. Уровень гомоцистеина коррелировал с тяжестью гестоза, которая определялась по степени выраженности протеинурии.

92 Проспективные исследования, проведенные T.K. Sorensenи соавторами (1999г.) показали, что повышение содержания гомоцистеина в плазме крови беременных во втором триместре связана с повышенным риском развития тяжелых форм гестоза. Гомоцистеин может беспрепятственно проникать через фетоплацентарный барьер в кровяное русло плода и оказывать фетотоксическое и тератогенное действие. Доказано, что ГГЦ является одной из причин таких тяжелейших врожденных патологий плода, как анэнцефалия, незаращение спинномозгового канала и др. Дети, родившиеся с анэнцефалией, как правило, погибают в первые часы после родов.

93 Незаращение спинномозгового канала не приводит к ранней гибели новорожденного, но этот порок развития вызывает крайне тяжелые неврологические расстройства и раннюю, в возрасте около 15 лет, смерть. ГГЦ может приводить к развитию вторичных аутоиммунных реакций и мешать нормальному развитию беременности. ГГЦ поддается коррекции с помощью приема фолиевой кислоты и витаминов группы В. Своевременное выявление повышенного содержания ГЦ в плазме крови беременных женщин может способствовать снижению риска осложнений, как у матери, так и у ребенка.

94 Показания к назначению анализа: Определение риска сердечно- сосудистых заболеваний Определение риска осложнений при беременности Диагностика гомоцистеинурии Сахарный диабет Старческое слабоумие и болезнь Альцгеймера

95 Методы анализа концентрации ГЦ : Иммунохимический метод. В его основе лежит использование моноклональных антител против S- аденозилгомоцистеина. Для этого сначала поизводят: 1) Восстановление ГЦ дитиотреитолом; 2) Энзиматическое превращение ГЦ в S-адеозилгомоцистеин;

96 3) Конкурентный иммунохимический анализ с использованием конъюгированного аденозилгомоцистеина и антител и различных методов детекции.

97 Энзиматический метод. Это простой, легко адаптируемый биохимический метод, позволяющий проводить анализ на любом биохимическом анализаторе вместе с определением других маркеров. Принцип метода *связанный или димеризованный ГЦ ( окисленная форма) восстанавливается до свободного.

98 *Свободный ГЦ реагирует с серином, в результате чего образуется L- цистатионин. Реакция катализируется цистатионин- В - лиазой. L-цистатионин расщепляется с формированием ГЦ, пирувата и аммиака. * Впоследствии пируват под действием ЛДГ превращается в лактат, коферментом в этой реакции является NADH

99 *Отношение NADH к NAD прямо пропорционально концентрации ГЦ. Минимальная концентрация ГЦ, определяемая с помощью этого метода, составляет 0,4 мкмоль/л. Преимущества метода 1) Адаптирован к различным биохимическим анализаторам, поэтому анализ ГЦ можно проводить вместе с определением других маркеров.

100 2) Небольшое количество манипуляций уменьшает вероятность ошибок. 3) Реагенты жидкие, стабильные, полностью готовы к использованию. 4) Для проведения анализа используют только 3 реагента. 5) Построение калибровочного графика проводится всего по двум калибраторам, линейность калибровки до 90 мкмоль/л.

101 6) Широкий диапазон определяемых значений позволяет не проводить повторный анализ образцов с высокой концентрацией ГЦ. 7) Реагенты можно хранить на борту анализатора. Стабильность реагентов на борту анализатора 30 дней. 8) Для анализа можно использовать сыворотку, ЭДТА или гепаринизированную плазму крови. Нет необходимости использовать определённый вид образца.

102 9) Быстрота проведения анализа: первый результат можно получить через 12 мин, скорость 36 тестов в час. 10) Высокая воспроизводимость результатов. 11) Полученные результаты хорошо сходятся с результатами других исследований.

103 Влияние преаналитических факторов. Источник ошибок- неправильный сбор образцов плазмы крови для исследования. Во избежание получения завышенных результатов в качестве антикоагулянта при взятии крови рекомендуется использовать ЭДТА. Также к увеличению концентрации ГЦ может привести употребление пищи, излишне богатой белком (на 15-20%), прием метотрексата, карбамазепина, противосудорожных и др. препаратов.

104 Стабильность: В готовых образцах плазмы крови концентрация ГЦ стабильна в течение суток при комнатной температуре, несколько недель при +4С и до года при -20С.

105 Тест с нагрузкой метионином. Умеренная ГГЦ в возрасте до 40 лет обычно протекает бессимптомно, а обнаружить повышение концентрации ГЦ в плазме крови удается далеко не всегда. Для оценки склонности к ГГЦ используют определение толерантности к метионину.

106 Пациенту дают внутрь метионин в дозе 0,1 г на кг массы или 3,8 г на 1кв.м поверхности тела. До нагрузки метионином и несколько раз после нее измеряют содержание ГЦ в плазме крови. После нагрузки оно увеличивается и достигает максимальных значений примерно через 6 часов. У здоровых людей максимальная концентрация ГЦ существенно ниже, а уменьшение его концентрации происходит быстрее, чем у пациентов, склонных к ГГЦ.

107 Тест с нагрузкой метионином не унифицирован, не подобрана оптимальная доза метионина для нагрузки и не установлены временные интервалы для стандартизации теста.

108 Спасибо за внимание!!!