Опыт проведения доклинических исследований оригинальных лекарственных средств в соответствии с Приказом Минздравсоцразвития РФ от 23.08.2010 708н «Об утверждении. - презентация

1 Опыт проведения доклинических исследований оригинальных лекарственных средств в соответствии с Приказом Минздравсоцразвития РФ от н «Об утверждении Правил лабораторной практики» Макарова М.Н. «Санкт-Петербургский институт фармации», 2012

2 2 Протокол (план) исследования Ответственный персонал Группа экспериментальной фармакологии Служба качества Группа молекулярной фармакологии Группа ГЛС и фармакокинетики Группа гистологии и патоморфологии Группа биохимии и гематологии Группа ветеринарии Техническая служба Группа пептидов Группа химико- аналитических исследований и стандартизации Группа токсикологии Провизорская служба

3 3 Служба качества Наличие утвержденного плана исследования и содержания в нем информации, необходимой для соблюдения принципов надлежащей лабораторной практики. Наличие СОП, перечисленных в протоколе, необходимых для проведения данного исследования в общем перечне СОП организации. Наличие протокола биоэтической комиссии (БЭК) по данному протоколу. Наличие материалов необходимых для проведения исследования по данному протоколу. Наличие необходимого оборудования, его исправность и наличие документов на поверку в случае необходимости. Соответствие содержания животных «Руководству по содержанию и использованию лабораторных животных» NATIONAL ACADEMY PRESS, Washington, D.C., Наличие ветеринарного свидетельства на партию животных для проведения исследования по данному протоколу. Наличие СОП на рабочих местах и выполнение процедур и манипуляций соответственно СОП. Статистической обработки данных. Наличия и оформления первичных карт. Оформление отчета в соответствии с ГОСТ «Отчет о научно- исследовательской работе». Правильность архивации отчета соответственно ФЗ 125 «Об архивном деле в Российской Федерации» от г с изменениями на 13 мая 2008 г. и СОП- АХ.

4 4 Протокол (план) исследования Регулирующие стандарты Guide for the care and use of laboratory animals. National Academy press. –Washington, D.C European convention for the protection of vertebrate animals used for experimental and other scientific, Руководство по лабораторным животным и альтернативным моделям в биомедицинских технологиях, Н.Н. Каркищенко, Москва, Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических лекарственного средства – 2-изд., перераб. и доп. – М.: ОАО «Издательство «Медицина», СОП лаборатории.

5 5 Протокол (план) исследования 1.Обоснование 2.Цель 3.Характеристика исследуемых групп 4.Методология (прижизненные и терминальные манипуляции и наблюдения) 5. Этические принципы Анестезия (в случае необходимости) Путь и способ введения лекарственного средства Индукция патологии Масса тела, клинический осмотр животных Забор крови Гематологические, биохимические показатели крови Физиологические исследования Макроскопическое и гистологическое исследование Терминальные манипуляции: Умирающие животные и животные, найденные мертвыми Способ эвтаназии

6 6 Первичные карты

7 7 Оборудование СПбИФ располагает более 300 наименований экспериментального оборудования, ежегодно проходящего метрологическую поверку и калибровку.

8 8 Протокол (план) исследования Животные СПбИФ имеет государственную регистрацию вивария в ГУ «Санкт-Петербургская городская станция по борьбе с болезнями животных». СПбИФ получает лабораторных животных из государственных и частных питомников имеющих ветеринарные свидетельства государственного образца Ф 1. СПбИФ соблюдает Европейскую конвенцию по защите позвоночных животных, используемых в экспериментальных и других научных целях. СПбИФ имеет собственную биоэтическую комиссию. В виварии СПбИФ содержатся улучшенные конвекциональные животные.

9 9 Протокол (план) исследования Виды животных, с которыми возможно проведение работ Организация-поставщик животных Мыши аутбредные BALB/cФГУП ПЛЖ «Рапполово» РАМН Мыши инбредные C57BL/6 ФГУП ПЛЖ «Рапполово» РАМН Мыши инбредные CBA ФГУП ПЛЖ «Рапполово» РАМН Крысы аутбредные Sprague DawleyУРАН ин. Физиологии им. Павлова РАН Крысы аутбредные WistarФГУП ПЛЖ «Рапполово» РАМН Крысы инбредные Wistar-KyotoУРАН ин. Физиологии им. Павлова РАН Крысы инбредные SHRУРАН ин. Физиологии им. Павлова РАН Морские свинкиФГУП ПЛЖ «Рапполово» РАМН Кролики Калифорнийской породы ИП Потачук Кролики породы Советская шиншилла ИП Потачук ФГУП ПЛЖ «Рапполово» РАМН Кролики породы Новозеландская белаяИП Потачук

10 10 Виварные помещения

11 11 Виварные помещения Назначение помещения Площадь, кв.м. Примечание Виварий - Карантинный бокс 5 Экспериментальный бокс 6 Манипуляторная 41 Осуществляется контроль за содержанием газов в воздухе (СО 2 и аммиака). Осуществляется контроль за температурой (23±3 О С) и влажностью (60- 70%), воздухообмен 290 м 3 /час Виварий - Экспериментальные боксы 1-2 Манипуляторная 25 Виварий - Экспериментальные боксы 3-4 Манипуляторная 31 Техническое помещение16- Гистологическая лаборатория26100 м 3 /час Лаборатория фармакологическая23- Рефрижераторная9- Дезинфекционно-моечное отделение20100 м 3 /час Лаборатория биохимическая30100 м 3 /час Лаборатория технологическая32- Лаборатория химико-аналитическая35- Лаборатория молекулярной фармакологии27воздухообмен 100 м 3 /час Лаборатория физиологии м 3 /час Осуществляется контроль за температурой (23±3 О С) и влажностью(60- 70%) Гистологический архив18 Архив для органической и неорганической химии10 Кормовой склад20 Помещение для хранения фармацевтических субстанций6 Общая площадь 492 м 2 Полезная площадь: 387 м 2

12 12 Содержание животных Клетки (Charles River ) Подстил (Биосфера ) Корма («Аллер-Петфуд», Провими) Вода (ГОСТу "Вода питьевая" 2874–82) Условия окружающей среды: температура воздуха (20-26°С), влажность воздуха (60-70%), содержание СО 2 (не более 0,15 объемных %), содержание аммиака (не более 0,001 мг/л), освещенность (12-часовой цикл освещения)

13 13 Содержание животных Акклиматизация и отбор животных для исследования Карантинные мероприятия: входной контроль лабораторных животных при получении из питомников (клинический осмотр, экспресс-диагностика антропозоонозов); изоляция поступивших партий животных для прохождения карантина согласно ветеринарным требованиям; кормовая, физиологическая и психологическая адаптация лабораторных животных находящихся в карантине.

14 14 Экспериментальные условия работы с животными на каждое животное ветеринарный врач ведет карты клинического осмотра; идентификация лабораторных животных осуществляется нанесением маркера (для мышей и крыс) или при помощи микрочипирования (морские свинки, кролики); рандомизация лабораторных животных происходит методом модифицированной блочной рандомизации, для независимого распределения животных в экспериментальные группы для каждого исследования организуется заседание биоэтической комиссии с привлечением независимых экспертов; сохранение конфиденциальности проводимых экспериментов обеспечивается путем использования внутренней кодировки.

15 15 Тестируемые лекарственные средства Учет Правила безопасности Действия с неиспользованными в исследовании веществами

16 16 Обработка данных Анализ данных Поправки и отклонения протокола Отчет Приложения к отчету, предоставляемые Заказчику: –Копия протокола биоэтической комиссии. –Копия ветеринарного свидетельства. –Первичные карты или их копии. –Копия отчета службы качеcтва.

17 17 ВИДЫ ДОКЛИНИЧЕСКИХ ИССЛЕДОВАНИЙ 75 видов доклинических исследований 128 стандартных протоколов ОБЩЕТОКСИКОЛОГИЧЕСКИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ 1.Оценка цитотоксического действия (МТТ-тест) фармакологических веществ (ФВ) 2.Острая токсичность ФВ 3.Исследование токсичности ФВ с целью выявления пороговых доз (DRF-протокол) 4.Изучение подострой (субхронической) токсичности ФВ 5.Изучение острой токсичности ФВ для наружного применения 6.Исследование хронической накожной токсичности (21 день) ФВ для наружного применения 7.Исследование хронической токсичности на неполовозрелых особях 8.Исследование хронической токсичности (1, 3, 6 и 9 мес.), кумулятивное действие на половозрелых особях 9.Исследование хронической токсичности ФВ на кроликах с оценкой местно- раздражающего действия

18 18 ИССЛЕДОВАНИЯ СПЕЦИФИЧЕСКОЙ ТОКСИЧНОСТИ Исследование аллергизирующего действия ФВ 1.Оценка анафилактогенной активности (реакция общей анафилаксии, анафилактический шок) 2.Кожный тест – активная кожная анафилаксия 3.Конъюнктивальная проба 4.Реакция гиперчувствительности замедленного типа (ГЗТ) 5.Реакция иммунных комплексов Исследование иммунотоксического действия ФВ 1.Определение титра антител (оценка гуморального иммунного ответа) 2.Оценка гиперчувствительности замедленного типа (ГЗТ; оценка клеточного иммунного ответа) 3.Оценка влияния препарата на фагоцитарную активность перитонеальных макрофагов (оценка клеточного иммунного ответа) 4.Определение влияния препарата на пролиферативную активность Т- и В-лимфоцитов, а также синтез IL-2, IL-4 и IFNγ. ВИДЫ ДОКЛИНИЧЕСКИХ ИССЛЕДОВАНИЙ

19 19 Репродуктивная токсичность 1.Исследование влияния на генеративную функцию ФВ 2.Исследование эмбрио- и фетотоксического влияния ФВ, регистрируемого в антенатальный период, с оценкой тератогенного действия 3.Исследование антенатального повреждающего действия ФВ, регистрируемого в постнатальный период ВИДЫ ДОКЛИНИЧЕСКИХ ИССЛЕДОВАНИЙ

20 20 Мутагенность 1.Учет доминантных летальных мутаций 2.Учет микроядер в полихроматофильных эритроцитах периферической крови мышей 3.Тест Эймса Оценка кардио-токсичности на морских свинках по изменениям на ЭКГ Фармакокинетика ВИДЫ ДОКЛИНИЧЕСКИХ ИССЛЕДОВАНИЙ

21 21 ВИДЫ ДОКЛИНИЧЕСКИХ ИССЛЕДОВАНИЙ А. ПИЩЕВАРИТЕЛЬНЫЙ ТРАКТ И ОБМЕН ВЕЩЕСТВ Изучение гастропротекторных ФВ Изучение противоязвенного действия ФВ на модели перевязки пилорического отдела желудка по методу Shay Определение противоязвенной активности ФВ на модели индометациновой язвы у крыс Оценка цитостатического действия ФВ в отношении Helicobacter pylori Изучение гепатозащитных ФВ Оценка активности ФВ на модели острого токсического гепатита, индуцированного четыреххлористым углеродом Оценка активности ФВ на модели алкогольного гепатоза Изучение спазмолитического эффекта ФВ Оценка спазмолитического эффекта ФВ на модели ex vivo Оценка спазмолитического эффекта ФВ на модели in vivo Оценка активности ФВ на модели экспериментального панкреатита у кроликов Изучение влияния ФВ на нормализацию состава желчи на модели литогенной диеты

22 22 А. ПИЩЕВАРИТЕЛЬНЫЙ ТРАКТ И ОБМЕН ВЕЩЕСТВ 1.Изучение влияния ФВ на потребление пищи, ожирение и развитие сахарного диабета II типа под влиянием золотой тиоглюкозы 2.Оценка активности ФВ на модели диабета 2-го типа, индуцированного введением стрептозотоцина 3.Оценка активности ФВ на модели диабета 2-го типа, индуцированного введением аллоксана 4.Изучение влияния ФВ на индуцированную гиперфагию «Диета кафетерия» 5.Оценка эффективности ФВ на модели экспериментального, дительно-текущего сахарного диабета с формированием «диабетической стопы». 6.Изучение гиполипидемического действия ФВ 7.Изучение антиатеросклеротического действия ФВ на кроликах 8.Изучение антиатеросклеротического действия ФВ на морских свинках Изучение механизмов антиатерогенного действия ФВ 1.Оценка антипролиферативного действия ФВ на клетки эпителиоцитов 2.Определение влияния ФВ на энзиматическую активность ГМГ-КоА- редуктазы 3.Оценка противовоспалительного действия ФВ in vivo на модели каррагенинового пузырька. ВИДЫ ДОКЛИНИЧЕСКИХ ИССЛЕДОВАНИЙ

23 23 ВИДЫ ДОКЛИНИЧЕСКИХ ИССЛЕДОВАНИЙ C. СЕРДЕЧНО-СОСУДИСТАЯ СИСТЕМА Изучение антигипоксических ФВ Изучение гипотензивных ФВ 1.Оценка влияния ФВ на активность ангиотензин- превращающего фермента (АПФ) in vitro 2.Изучение антигипертензивного влияния ФВ на модели спонтанно-гипертензивных крыс Изучение ФВ для лечения нарушений коронарного кровообращения Изучение ФВ для лечения нарушений мозгового кровообращения Изучение ФВ для лечения нарушений мозгового кровообращения на модели перевязки общих сонных артерий Изучение ФВ для лечения нарушений мозгового кровообращения на модели субарахноидального кровоизлияния Изучение активности ФВ на модели легочной гипертензии, индуцированной кроталином Изучение активности ФВ по влиянию на кровоток в сосудах хориоаллантоисной оболочки куриного эмбриона Оценка активности ФВ на модели диабета, с оценкой капилляропротекторного действия Оценка активности ФВ на модели хронической сердечной недостаточности (ХСН) по тотальному типу

24 24 ВИДЫ ДОКЛИНИЧЕСКИХ ИССЛЕДОВАНИЙ R. ДЫХАТЕЛЬНАЯ СИСТЕМА 1.Изучение активности ФВ на модели аллергического воспаления и гиперреактивности дыхательных путей у морских свинок 2.Исследование активности ФВ на модели острого риносинусита 3.Исследование активности ФВ на моделях химически-индуцированного плеврита 4.Исследование активности ФВ на моделях химически-индуцированного бронхита 5.Исследование активности ФВ на модели ХОБЛ, индуцированной сигаретным дымом 6.Исследование активности ФВ на модели LPS- индуцированного острого респираторного дистресс- синдрома 7.Исследование активности ФВ на моделях химически-индуцированной пневмонии 8.Исследование активности ФВ на модели экспериментального тонзиллита

25 25 М. КОСТНО-МЫШЕЧНАЯ СИСТЕМА Изучение противовоспалительных фармакологических веществ 1.Изучение противовоспалительной активности ФВ на модели хронического (адьювантный артрит) воспаления у крыс-самок линии Wistar 2.Оценка противовоспалительной активности ФВ на модели подострого воспаления: формалиновый артрит у крысы 3.Оценка противовоспалительной активности ФВ на модели воспаления: каррагениновый воздушный мешочек у крыс 4.Оценка противовоспалительной активности ФВ на модели воспаления: Каррагенин-индуцированный отек лапы крысы 5.Оценка влияния ФВ на энзиматическую активность циклооксигеназы-1/-2 6.Оценка влияния ФВ на энзиматическую активность 5-липооксигеназы 7.Оценка влияния ФВ на продукцию про- и противовоспалительных цитокинов (ИЛ-1, ИЛ-6, ИЛ-8, ФНО-α, ИЛ-10) в культуре клеток и у крыс 8.Оценка влияния ФВ на внутриклеточный сигналинг (активацию МАР- киназ p38, JNK1/2, ERK1/2) в культуре клеток 9.Оценка влияния ФВ на активацию транскрипционных факторов (NF-kB и др.) в культуре клеток Оценка активности ФВ на модели экспериментального остеопороза у самок крыс линии Wistar ВИДЫ ДОКЛИНИЧЕСКИХ ИССЛЕДОВАНИЙ

26 26 ВИДЫ ДОКЛИНИЧЕСКИХ ИССЛЕДОВАНИЙ G. МОЧЕПОЛОВАЯ СИСТЕМА Оценка активности и механизма действия ФВ на модели хронического простатита Оценка активности ФВ на модели эректильной дисфункции Изучение мочегонного действия ФВ в методике водного диуреза на крысах

27 27 Спасибо за внимание