Организация и проведение сличительных испытаний (грипп птиц, болезнь Ньюкасла), обзор результатов 2012-2013 гг. Чвала Илья Александрович, зав. реф. лаб. - презентация

1 Организация и проведение сличительных испытаний (грипп птиц, болезнь Ньюкасла), обзор результатов гг. Чвала Илья Александрович, зав. реф. лаб. вирусных болезней птиц, ФГБУ «ВНИИЗЖ»

2 ГОСТ Р ИСО/МЭК Общие требования к компетентности испытательных и калибровочных лабораторий ISO/IEC 17043:2010 Conformity assessmentGeneral requirements for proficiency testing, «Оценка соответствия. Общие требования к проверке квалификации», Межлабораторные сравнительные испытания при аккредитации и инспекционном контроле испытательных лабораторий. Методика и порядок проведения. Р Правила организации проведения межлабораторных сличительных испытаний и профессионального тестирования специалистов учреждений, осуществляющих лабораторные исследования в области ветеринарии (утв. Федеральной службой по ветеринарному и фитосанитарному надзору 25 января 2010 г.) Нормативные документы

3 Участие Референтной лаборатории вирусных болезней птиц в международных МСИ Istituto Zooprofilattico Sperimentale delle Venezie, Падуя, Италия (FAO/OIE референтная лаборатория), DEFRA, Animal Health and Veterinary Laboratories Agency, Вэйбридж, Великобритания (OIE референтная лаборатория), GD Animal Health Service, Дэвентер, Голландия, С учетом Laboratory Proficiency Testing (OIE) -laboratories/proficiency-testing/

4 Задачи МСИ Laboratory Proficiency Testing (OIE) Оценка способности лабораторий проводить исследования с использованием конкретного метода/тест-системы, Оценка достоверности исследований конкретного специалиста, Проверка точности калибровки оборудования, Оптимизация используемого или аппробация нового метода, Приведение количественных результатов в соответствие (устранение межлабораторных отличий)

5 Программа МСИ Стандартные условия исследования (в т.ч. методы, оборудование, диагностические тест- системы, и др.), Количество проб для каждого из методов исследования (раундов), Выбор штаммов для изготовления шифрованных проб, Гарантия качества: однородность, активность и специфичность, стабильность, надлежащая маркировка и условия хранения/транспортировки, Сбор и анализ результатов, Оценка результатов (статистические методы?), Корректирующие меры

6 Перечень нормативной документации, разрешенной для использования в государственных ветеринарных лабораториях при диагностике болезней животных, рыб, пчел, а также контроля безопасности сырья животного и растительного происхождения от 30 июля 2009 г. N /563 ГОСТ Птица сельскохозяйственная, синантропная, дикая и экзотическая. Методы лабораторной диагностики гриппа ГОСТ : Птица сельскохозяйственная. Методы лабораторной диагностики болезни Ньюкасла Ветеринарные правила лабораторной диагностики гриппа А птиц (Приказ Минсельхоза России от 3 апреля 2006 года N 105) Методические указания по лабораторной диагностике болезни Ньюкасла и классической чумы птиц (гриппа птиц) ГУВ МСХ СССР 1972 год МУ по определению уровня антител к вирусу ньюкаслской болезни в реакции торможения гемагглютинации Департамент ветеринарии N /988 от Стандартные методы?

7 Полимеразная цепная реакция Тест-система для обнаружения вируса гриппа А методом ПЦР, НПО «Нарвак», Тест-система для обнаружения и дифференциации вируса гриппа А подтипов Н5 и Н7 методом ПЦР, НПО «Нарвак», Тест-система для выявления и дифференциации вируса гриппа птиц методом полимеразной цепной реакции «ГРИПП», вариант EPh, ФГУН ЦНИИЭ Роспотребнадзора, г. Москва, Тест-система для выявления и дифференциации вируса гриппа птиц методом полимеразной цепной реакции «ГРИПП» вариант FRT, ФГУН ЦНИИЭ Роспотребнадзора, г. Москва, Тест-система для обнаружения вируса гриппа А методом ПЦР, ООО «Ветбиохим», г. Москва, Тест-система для обнаружения и дифференциации вируса гриппа А подтипов Н5 и Н7 методом ПЦР, ООО «Ветбиохим», г. Москва, в отдельных случаях наименования тест-систем приводились недостаточно полно, или без указания варианта проведения исследований (в режиме «реального времени» или ОТ-ПЦР).

8 Реакция торможения гемагглютинации Набор для выявления антител к вирусу гриппа птиц подтипа Н5 в РТГА, ФГБУ «ВНИИЗЖ», Набор для выявления антител к вирусу ньюкаслской болезни в РТГА, ФГБУ «ВНИИЗЖ», Набор антигенов и сывороток для диагностики гриппа птиц в РТГА, ОАО «Покровский завод биопрепаратов», Набор компонентов для выявления антител к вирусу ньюкаслской болезни птиц в РТГА, ООО «Кронвет», Набор антигенов и сывороток для диагностики гриппа птиц в РТГА, ООО «Щелковский завод фармацевтических и ветеринарных препаратов». не все участники испытаний предоставили сведения по наименованиям и сериям использованных наборов

9 Оборудование

10 Laboratory Proficiency Testing (OIE): количество проб не менее 3/раунд 2013 год: ПЦР – 5 проб (антиген вируса гриппа различных подтипов, «нормальный» (отрицательный) антиген), РТГА – 4 сыворотки крови кур (гипериммунные сыворотки к вирусам гриппа и ньюкаслской болезни, нормальная (отрицательная) сыворотка)

11

12

13 Вирус ньюкаслской болезни

14 Положительная сыворотка АГ Н5N1 IZSVe АГ Н5N2 IZSVe АГ Н5N3 IZSVe АГ Н5N9 IZSVe АГ Н5N3 Производит ель 1 АГ Н5N3 Производител ь 2 АГ Н5N1 «Новосибирск ий» ФГБУ «ВНИИЗЖ» АГ Н5N2 Приморский ФГБУ «ВНИИЗЖ» Н5N1, IZSVe1:20481:1024 1:2561:512 Н5N2, IZSVe1:10241:20481:1024 1:512 1:1281: 256 Н5N3, IZSVe1:1024 1:512 1:256 Н5N9, IZSVe1:1024 1:5121:1024 1:2561:5121:1281:256 Н5N3, Производитель 1 1:32 1:161:32 1:641:1281:81:16 Н5N3, Производитель 2 1:16 1:81:16 1:64 1:8 Н5N1, «Новосибирский» ФГБУ «ВНИИЗЖ» 1:1024 1:5121:1024 1:512 1:256 Результаты РТГА (Н5) с использованием референтных сывороток и антигенов, отечественных наборов

15 A/mallard/Italy/3401/2005 H5N1 A/turkey/Italy/1980 H5N2 A/duck/Italy/775/2004 H5N3 A/chicken/Italy/22A/1998 H5N9 A/chicken/Italy/1067/1999 H7N1 A/turkey/Italy/9289/2002 H7N3 A/macaw/England/628/1980 H7N7

16

17 THE WHO INFLUENZA REAGENT KIT FOR IDENTIFICATION OF INFLUENZA ISOLATES Produced and distributed by: WHO COLLABORATING CENTER FOR SURVEILLANCE, EPIDEMIOLOGY AND CONTROL OF INFLUENZA Located at: Centers for Disease Control and Prevention Influenza Division Virus Surveillance and Diagnosis Branch, G Clifton Road, NE Atlanta, Georgia 30333, U.S.A. Telephone: Fax: In Collaboration with Influenza Reagent Resource (IRR) and American Type Culture Collection (ATCC)

18 Технология изготовления шифрованных проб Изученные штаммы, свободные от контаминации, Получение высокоактивных, специфичных и стабильных образцов, Проверка показателей с использованием различных методов и тест-систем на всех этапах производства, сроках хранения Объем проб: антигены по 1мл, сыворотки по 0,5мл, т.е. в количестве, достаточном для тестирования испытуемым методом, возможно исследование дополнительными методами

19 Анализ результатов - качественный Статистическая обработка данных не проводится ввиду: использования тест-систем различных производителей (особенности наборов и реагентов), особенностей методов РТГА и ПЦР (ОТ- или ОТ-реального времени), уровень оснащенности лабораторий (использование оборудования различных производителей). Результат МСИ (для каждого образца): удовлетворительный, неудовлетворительный, сомнительный

20 Корректирующие меры Стажировка специалистов лаборатории – участника МСИ в профильных лабораториях, Расширение перечня применяемых тест- систем и методов, Совместный анализ и устранение ошибок (организатор и участник)

21 Наиболее распространенные ошибки МСИ-2012 ПЦР - техническая ошибка?, контаминация? РТГА (идентификация антигена и выявление антител) – низкая активность положительных сывороток (от 1:16-1:32), использование единственного набора (без последующего подтверждения), неспецифическая реакция.

22 Рекомендации Участникам МСИ Использование тест-систем нескольких производителей, Использование дополнительных методов (РДП, ИФА, варианты ПЦР), Проведение исследований параллельно несколькими специалистами, Анализ полученных результатов до отправки организатору, Подробный отчет о результатах исследований, с комментариями специалистов

23 Спасибо за внимание!