Тема диссертации: Биохимические механизмы регуляции апоптотической и биоэнергетической функции митохондрий мелатонином и его метаболитами. Выполнено: Аспиранткой. - презентация

1 Тема диссертации: Биохимические механизмы регуляции апоптотической и биоэнергетической функции митохондрий мелатонином и его метаболитами. Выполнено: Аспиранткой 1-го года обучения кафедры биохимии Кузнецовой Е.И Научный руководитель: к.б.н.,доцент Семак И.В.

2 Содержание: Актуальность исследования Цели и задачи Методы исследования Результаты Выводы

3 Актуальность темы В настоящее время показано, что окислительный стресс играет важную роль в патогенезе различных заболеваний. Существенную роль при этом может играть дисфункция митохондрий, которые в физиологических условиях являются основным источником АФК в клетке. В качестве одного из серьезных последствий окислительного стресса в настоящее время рассматривается окислительное повреждение белков и перекисное окисление липидов, сопровождающееся потерей свойственных им функций. Также окислительный стресс способен вызывать набухание митохондрий, опосредованное открытием митохондриальных пор, расположенных во внутренней мембране митохондрий. А в соответствии с митохондриальной теорией апоптоза, открытие данных пор, индуцированное окислительным стрессом, рассматривают как начальную стадию программированной гибели клетки. Поэтому поиск новых природных антиоксидантов не теряет своей актуальности

4 Цели и задачи Целью данной работы является исследование влияния мелатонина и его метаболитов на повреждение белков, липидов и на набухание митохондрий в условиях окислительного стресса. Задачи: Изучить в экспериментах in vitro способность мелатонина и его метаболитов (N-ацетилсеротонина, 6-ОН-мелатонина и АФМК) предотвращать окислительное повреждение митохондриальных белков и липидов в системе генерации АФК– Fe2+/аскорбат. Изучить способность мелатонина и его метаболитов регулировать набухание митохондрий, индуцированное ГПТБ(1мМ) и Са 2+ (50мкМ)

5 Методы исследования Выделение митохондриальной фракции митохондрий Определение содержания белка в митохондриальной фракции печени крыс по Петерсону SDS- электрофорез в полиакриламидном геле Определение содержания ТБК-активных продуктов в митохондриальной фракции печени крыс Набухание митохондрий

6 Результаты В ходе исследований получены следующие результаты :

7 Интенсивность окрашивания электрофоретических полос, соответсвующих нативному белку с молекулярной массой 16,4 кДа митохондриальной фракции печени крыс в системе Fe 2+/ аскорбат, окрашенных Кумасси R-250: 1 - белок митохондриальной фракции печени крыс; 2 - белок митохондриальной фракции печени крыс в системе Fe 2+ /аскорбат ; 3 - в присутствии 500мкМ соединения ; 4 - в присутствии 100мкМ соединения.

8 Интенсивность окрашивания электрофоретических полос, соответсвующих белковым агрегатам с молекулярной массой кДа митохондриальной фракции печени крыс в системе Fe 2+ /аскорбат, окрашенных Кумасси R-250: 1 - белки митохондриальной фракции печени крыс; 2 - белки митохондриальной фракции печени крыс в системе Fe 2+ /аскорбат ; 3. - в присутствии 500мкМ соединения ; 4 – в присутствии 100мкМ соединения.

9 Содержание ТБК-активных продуктов в митохондриальной фракции печени крыс в системе Fe 2+ /аскорбат. Примечание: Достоверность рассчитывалась по отношению к содержанию карбонильных соединений в контроле-*** - p (n=3).

10 Влияние мелатонина(500мкМ), N-ацетилсеротонина (500мкМ) и 6-ОН- мелатонина(500мкМ) на набухание митохондрий печени, индуцированное Са2+(50мкМ)

11 Выводы Мелатонин, N-ацетилсеротонин и 6-гидроксимелатонин в концентрациях 500мкМ и 100мкМ частично предотвращают окислительную деградацию белка с молекулярной массой 16,4 кДа и образование высокомолекулярных белковых агрегатов с молекулярной массой 118кДа в системе генерации АФК - Fe2+ /аскорбата. Мелатонин, N-ацетилсеротонин, 6-гидроксимелатонин и АФМК (10нМ-1мМ) снижают накопление ТБК-активных продуктов и карбонильных соединений в дозозависимой манере в системе генерации АФК - Fe2+/аскорбата. Мелатонин(500мкМ), N-ацетилсеротонин(500мкМ) и 6-ОН- мелатонин(500мкМ) способны снижать уровень набухания индуцированное Са2+(50мкМ) на 5,9%, 7,8% и 7,9% соответсвенно.

12 Спасибо за внимание! END