Метод исследования кормов на анаэробы

Метод исследования кормов на анаэробы ГОСТ , Правила бак исследования кормов, утв. ГУВ МСХ СССР г. Метод основан на способности анаэробов расти в отсутствии кислорода воздуха, характерной морфологии, культуральных свойствах и на выявлении патогенности культур путем заражения лабораторных животных

Метод определения анаэробов Посев производится в две пробирки со средой Китт-Тароцци и в среду Вильсон- Блера по 1 мл из разведения 1:10. Для уничтожения вегетативных форм микроорганизмов одну из пробирок после посева прогревают при 80 ° С 20 минут. Из анаэробных микроорганизмов в кормах предусматривается обнаружение Cl. perfringens, Cl. вotulinum. и их токсинов. Среду Китт-Тароцци перед посевом регенерируют – прогревают на кипящей водяной бане 30 минут и охлаждают под струей холодной воды до 45°С.

Результаты посевов регистрируют в первый день Почернение среды Вильсон- Блера в течение 1-3 часов Быстрое начало роста на среде Китт- Тароцци (через 4-5 часов)

Подтверждение принадлежности выделенных анаэробных микроорганизмов к роду Clostridium Из выросших культур готовят препараты и окрашивают их по Граму и одним из методов для выявления бактериальных спор. Анаэробы (сульфитредуцирующие клостридии) представляют собой грамположительные палочки, расположенные в одиночку, попарно, в виде цепочек или скоплений. Споры овальные или сферические, суп терминальные или терминальные.

Выделение чистой культуры Делают посев на 2-3 чашки с кровяным агаром по Цейслеру, выдерживают их в анаэробных условиях при температуре 37С в течение часов, после чего просматривают рост в чашках и отбирают культуры, которые классифицируют по морфологическим и биохимическим свойствам.

Биохимические свойства анаэробов Название МолокоЖелатин Мозговая среда Свернутая сыворотка Cl.septicum Медленное свертывание (2-5 дн), запах кислый. Разжижение через 3-5 дн. Нет почернения. Не разжижается. Инволюционные формы и споры. Cl.oedematiens Медленное свертывание (4-10 дн). Разжижение через 3-5 дн. Нет почернения. Не разжижается. Инволюционные формы и споры. Cl.hystoliticum Свертывается через 1 сутки. Разжижается быстро. Почернение через 3-6 дн. Разжижается медленно. Cl.perfringens Бурное свертывание (4-6 ч). Газообразование бурное, сыворотка прозрачная. Разжижение на 3-5 дн. Нет почернения. Не разжижается. Инволюционные формы и споры. Cl.botulinum Пептонизируется.Разжижается.Чернеет медленно и слабо. Разжижается.

Биологические исследования проводят на морских свинках или белых мышах путем внутрибрюшинноййго заражения бульонной культурой. При положительном результате подопытные животные гибнут через часов

Идентификация отдельных возбудителей Для идентификации отдельных возбудителей одного вида ставят опыт нейтрализации токсина специфической сывороткой. Для этого минимальную смертельную дозу культуры в смеси с 0,2-0,5 мл соответствующей типоспецифической сыворотки выдерживают в термостате 45 минут и вводят мышам внутрибрюшиннойй. Для контроля испытуемую культуру или фильтрат вводят мышам без сыворотки. Вид и тип микроорганизма определяют по выживаемости мышей, получивших соответствующую сыворотку.

Исследование кормов на ботулотоксин При исследовании кормов на ботулизм (наличие токсинов) в качестве подопытных животных используют белых мышей. При этом могут быть применены два способа: а) Нейтрализация токсина противоботулиновой сывороткой (антитоксином). Корм предварительно растирают в ступке со стерильным физраствором (1:4) и настаивают в течение 1-2 часов при комнатной температуре. Настой центрифугируют и фильтруют через ватно-марлевый фильтр. К 0,5 мл фильтрата добавляют 0,2 мл поливалентной противоботулиновой сыворотки. Смесь выдерживают 1 час при комнатной температуре, затем одному животному вводят подкожно 0,5 мл фильтрата, другому – смесь фильтрата с сывороткой в той же дозе.

Исследование кормов на ботулотоксин б) Разрушение токсина кипячением фильтрата. Фильтрат готовят как в пункте (а). Одну половину фильтрата кипятят в течение 30 минут. Затем одному животному внутрибрюшиннойй вводят 0,5-1,0 мл некипяченого фильтрата, другому – в этой же дозе прокипяченного. Положительным результатом биопробы по первому и второму способам, считают гибель мышей, наступившую как от фильтрата необработанного противоботулиновой сывороткой, так и от фильтрата не подвергнутого кипячению.