Free Powerpoint TemplatesPage 1Free Powerpoint Templates МОРФОЛОГИЧЕСКИЕ ИЗМЕНЕНИЯ ПОЧЕК ПРИ ОБЩЕЙ АЛКОГОЛЬНОЙ ИНТОКСИКАЦИИ И ОБЩЕМ ПЕРЕОХЛОЖДЕНИИ ОРГАНИЗМА У КРЫС Сибирский государственный медицинский университет Кафедра судебной медицины с курсом токсикологической химии г. Томск год Выполнила студентка лечебного факультета VIкурса Никулина Олеся Научные руководители, д. м. н., проф. Алябьев Федор Валерьевич., д.м.н., профессор Серебров В. Ю.

Free Powerpoint TemplatesPage 2 Актуальность Выбирая данную тему, мы ориентировались на её вчерашнюю, сегодняшнюю и очевидно завтрашнюю актуальность. Проблема алкоголизма была, остается и, по-видимому, еще долго будет оставаться актуальной в России, как в социальном, так и в медицинском плане, а также в аспекте сохранения здорового генофонда людей. Со злоупотреблением алкоголем связано 75% дорожно-транспортных происшествий в ночное время и до 50% автокатастроф в дневное время, 50% всех преднамеренных убийств и 25% всех самоубийств (данные для Северной Америки). В России показатель смертности от отравлений этиловым спиртом и его суррогатами является одним из самых высоких в мире. Алкогольная интоксикация часто является фактором, способствующим наступлению смерти от сердечно - сосудистых заболеваний, переохлаждения и т.п. и, наконец, не так уж редко сама по себе является причиной смерти. Наименее изученным является морфофункциональное состояние почек при действии различных стрессоров различной силы и продолжительности. В единичных работах описаны морфологические изменения почек при многократном охлаждении животных в эксперименте, а также при смертельном переохлаждении у людей. В судебной медицине до сих пор не разработаны критерии дифференциальной диагностики причины смертельного исхода от действия алкогольной интоксикации и низкой температуры, приводя к тому, что выводы о причине смерти не всегда являются категоричными и доказанными. Знание последствий общего переохлаждения и интоксикации алкоголем тканей почек представляет интерес не только для морфологов, но и для судебно- медицинских экспертов, патологоанатомов.

Free Powerpoint TemplatesPage 3 Цели работы Изучить морфологические изменения почек в динамике общего переохлаждения организма и алкогольной интоксикации

Free Powerpoint TemplatesPage 4 Задачи Изучить реакцию различных морфофункциональных зон почек в динамике воздействия низкой температуры (-10°С, -18°С) и интоксикации алкоголем (2 мл\кг, 4 мл\кг, 8 мл\кг) Изучить морфологические изменения стромы и сосудов почек в динамике гипотермии (-10°С, -18°С) и интоксикации алкоголем (2 мл\кг, 4 мл\кг, 8 мл\кг) Выявить хронологические различия в изменениях морфофункционального состояния почек при действии низкой температуры (-10°С, -18°С) и интоксикации алкоголем (2 мл\кг, 4 мл\кг, 8 мл\кг)

Free Powerpoint TemplatesPage 5 Материал и методы исследований В эксперименте использовали 205 беспородных половозрелых белых крыс-самцов массой г. Животных содержали в клетках по 5 особей в лаборатории кафедры судебной медицины с курсом токсикологической химии СибГМУ при температуре градуса по Цельсию, с равными периодами светлого (8.00 – 20.00) и темного (20.00 – 8.00) времени суток при свободном доступе к воде и пище, одинаковой для всех крыс. За сутки до эксперимента животных лишали пищи. Время начала воздействия в каждой серии эксперимента часов. Животных подвергали экспозиции холода в клетках по 2-3 особи на открытом воздухе при температуре -10 С и - 18 С. Также животным по 2-3 особи интрагастрально через зонд вводили 40% этанол в расчете 2 мл, 4 мл и 8 мл абсолютного алкоголя на килограмм массы тела животного. Крыс выводили из эксперимента в течение 8 часов с интервалом 1 час путем декапитации под эфирным наркозом.

Free Powerpoint TemplatesPage 6 Контрольную группу составили 5 интактных крыс- самцов. При вскрытии органы выделяли единым органокомплексом. Для гистологического исследования почки извлекали, отпрепаровывали от окружающей ткани и рассекали напополам. Для световой микроскопии одну часть фиксировали в нейтральном 10% формалине и проводили заливку в парафин. Срезы толщиной 5 мкм, полученные на санном микротоме, депарафинировали, окрашивали гематоксилином и эозином. Статистическая обработка результатов была проведена с использованием пакета STATISTICA 6.0 с применением непараметрического теста Манна-Уитни и корреляционного анализов. Статистически значимыми результаты считались при p

Free Powerpoint TemplatesPage 7 Схема эксперимента Фактор воздействия Время взятия материала 1 час2 часа 3 часа 4 часа5 часов6 часов7 часов8 часов Холод (–10 О С) Холод (–18 О С) % этиловый спирт (2 мл\кг) % этиловый спирт (4 мл\кг) % этиловый спирт (8 мл\кг) Контроль5

Free Powerpoint TemplatesPage 8 Критерии оценки морфологических изменений почек Кровенаполнение Лейкоцитарная инфильтрация стромы Лимфоцитарная инфильтрация боуменовой капсулы Выраженность диффузной инфильтрации Дистрофические изменения в клетках канальцев Некрозы клеток канальцев

Free Powerpoint TemplatesPage 9 КРИТЕРИИ ОЦЕНКИ ГИСТОЛОГИЧЕСКИХ СРЕЗОВ (В БАЛЛАХ) Параметр1 балл2 балла3 балла4 балла Количество нейтрофилов, лимфоцитов, моноцитов 0 – 1 клетка в поле зрения 2 – 4 клетки в поле зрения 5 – 8 клеток в поле зрения 9 и более клеток в поле зрения Выраженность диффузной инфильтрации нет, либо 2 – 4 клетки в поле зрения 5 – 8 клеток в поле зрения 9 – 20 клеток в поле зрения более 20 клеток в поле зрения Степень кровенаполнения сосуды спавшиеся слабое полнокровие умеренное полнокровие выраженное полнокровие Дистрофические изменения в клетках канальцев 2 – 4 клетки в поле зрения 5 – 8 клеток в поле зрения 9 – 20 клеток в поле зрения более 20 клеток в поле зрения Некрозы клеток канальцев 1 – 2 в поле зрения или нет 3 – 5 клеток в поле зрения 6 – 9 клеток в поле зрения Более 10 клеток в поле зрения

Free Powerpoint TemplatesPage 10 Результаты исследования

Free Powerpoint TemplatesPage 11 ТОКСИЧЕСКОЕ ДЕЙСТВИЕ ЭТАНОЛА: 1. Прямое - Мембранотропное - Конформационное - Этерификация жирных кислот 2. Опосредованное - Метаболическое действие - Метаболическое действие - Конформационное действие ацетальдегида - Конформационное действие ацетальдегида - Угнетающее влияние ацетальдегида на белкового синтеза - Угнетающее влияние ацетальдегида на белкового синтеза - Оксидативный стресс - Оксидативный стресс ДЕЙСТВИЕ ХОЛОДА: Разобщение процессов электронного транспорта Разобщение окислительного фосфорилирования и образования энергии Дистрофические и некротические изменения канальцевых клеток

Free Powerpoint TemplatesPage 12 Токсическое действие этанола Повреждение эпителия канальцев Нарушение реабсорбции Na + ИШЕМИЯ Активация РАО Спазм артериол Дистрофия и некроз эпителия почечных канальцев Ишемия коркового слоя Сброс крови через юкстамедуллярные нефроны ХОЛОД Гипотензия Гипотония

Free Powerpoint TemplatesPage 13 Морфологическое состояние почек при действии низкой температуры (-10°С, -18°С) Кровенаполнение органа в течение всего периода наблюдения не постоянно. На препаратах часа гипотермии ткань органа полна умеренно и резко расширенными сосудов. Причем чаще всего просвет их умеренно заполнен кровью, однако нередко попадаются сосуды, просвет которых полностью заполнен эритроцитами. В первые 3 часа эксперимента происходит выраженное расширение просвета сосудов, в которых можно наблюдать группы эритроцитов. Начиная с 4 часа наблюдения происходит частичное спадение сосудов, однако умеренное полнокровие все же остается. При исследовании состояния клубочкового аппарата можно отметить, что сохраняется прежняя организация клеток в клубочке, между которыми появляются уже в течение первого часа холодового воздействия единичные лейкоциты, а также к концу эксперимента увеличивается количество одиночных лимфоцитов, располагающихся неравномерно до 3-4 клеток в поле зрения. За оставшийся промежуток времени одиночные лимфоциты можно обнаружить в единичных полях зрения. Дистрофические и некротические изменения канальцевых клеток наступают ко 2-му и 3-му часу наблюдения соответственно и продолжают нарастать до конца эксперимента.

Free Powerpoint TemplatesPage 14 Морфологические состояние почек при алкогольной интоксикации, вызванной интрагастральным введением 40% этанола в расчете 2 мл, 4 мл и 8 мл абсолютного алкоголя на килограмм массы тела крысы Кровенаполнение органа в течение всего эксперимента не постоянно. Умеренное полнокровие наблюдается ко второму часу наблюдения и продолжается до 4 часа эксперимента. Начиная с 5 часа, а для введения этанола в дозе 2 мл/кг, с 4 часа эксперимента, наблюдается спадение сосудов и возвращение к контрольным значениям, однако умеренное полнокровие все же остается. В расширенных просветах сосудов группы эритроцитов.. При исследовании состояния клубочкового аппарата можно отметить, что организация клеток в клубочке сохраняется, и в течение первого часа алкогольной интоксикации появляются единичные нейтрофилы, а также к 5 часу эксперимента увеличивается количество одиночных лимфоцитов, располагающихся неравномерно до 3-4 клеток в поле зрения. Дистрофические и некротические изменения клеток канальцев наступают к первому часу наблюдения и продолжают нарастать до конца эксперимента, причем токсический эффект тем выражение, чем выше доза этанола.

Free Powerpoint TemplatesPage 15 Дистрофия и некроз эпителия проксимальных канальцев после 7 часов АИ, вызванной введением этанола в дозе 8 мл/кг. Окраска гематоксилином и эозином. Большое увеличение.

Free Powerpoint TemplatesPage 16 Кровенаполнение при воздействии холода -10°С и -18°С Кровенаполнение при интоксикации, вызванной интрагастральным введением 40% этанола в дозах 2 мл/кг, 4 мл/кг и 8 мл/кг Баллы * * * * ** * * * * * * * * * * * - статистически значимые различия с контрольной группой (p

Free Powerpoint TemplatesPage 17 Лейкоцитарная инфильтрация стромы при воздействии холода -10°С и -18°С Лейкоцитарная инфильтрация стромы при интоксикации, вызванной интрагастральным введением 40% этанола в дозах 2 мл/кг, 4 мл/кг и 8 мл/кг Баллы * ** * * * * ** * * * * * * * - статистически значимые различия с контрольной группой (p

Free Powerpoint TemplatesPage 18 Лимфоцитарная инфильтрация боуменовой капсулы при воздействии холода -10°С и -18°С Лимфоцитарная инфильтрация боуменовой капсулы при интоксикации, вызванной интрагастральным введением 40% этанола в дозах 2 мл/кг, 4 мл/кг и 8 мл/кг Баллы * ** * * * - статистически значимые различия с контрольной группой (p

Free Powerpoint TemplatesPage 19 Выраженность диффузной инфильтрации при воздействии холода -10°С и - 18°С Выраженность диффузной инфильтрации при интоксикации, вызванной интрагастральным введением 40% этанола в дозах 2 мл/кг, 4 мл/кг и 8 мл/кг Баллы * *** ** * * * * * ** * ** * ** * * ** * * * * * ** * * * * * * - статистически значимые различия с контрольной группой (p

Free Powerpoint TemplatesPage 20 Дистрофические изменения в клетках канальцев при воздействии холода - 10°С и -18°С Дистрофические изменения в клетках канальцев при интоксикации, вызванной интрагастральным введением 40% этанола в дозах 2 мл/кг, 4 мл/кг и 8 мл/кг Баллы * ** *** ** * * * ** * * * * * * * ** * * * ** * * * * ** ** * * * * - статистически значимые различия с контрольной группой (p

Free Powerpoint TemplatesPage 21 Некрозы клеток канальцев при воздействии холода -10°С и -18°С Некрозы клеток канальцев при интоксикации, вызванной интрагастральным введением 40% этанола в дозах 2 мл/кг, 4 мл/кг и 8 мл/кг Баллы * * * * *** **** * * * * * ** * *** * * * ** * * * * * * ** * * * * * * - статистически значимые различия с контрольной группой (p

Free Powerpoint TemplatesPage 22ВЫВОДЫ При общей гипотермии и интоксикации алкоголем в динамике восьмичасового воздействия изменяется морфология всех зон почек, о чем свидетельствуют повышение кровенаполнения дистрофические и некротический изменения клеток канальцев. Морфологические признаки усиления функциональной активности различных структурных отделов почек при общей гипотермии и интоксикации алкоголем отмечаются уже через 1 час воздействия. При этом вовлечение различных морфофункциональных отделов почек в адаптивную реакцию происходит постепенно в течение восьмичасового периода. в Не было найдено достоверно значимых хронологических различий в изменениях морфофункционального состояния почек при действии низкой температуры и интоксикации алкоголем.

Free Powerpoint TemplatesPage 23 Выявлено, что в динамике общего действия низкой температуры воздуха (-10°С и -18°С) значимые дистрофические изменения клеток канальцев наблюдаются к 3 часу, а некротические - к 4 часу эксперимента и нарастают до 8 часа наблюдения. Кровенаполнение органа достоверно повышается ко 2 часу эксперимента, однако, к 4 часу происходит постепенное сужение просвета сосудов. Установлено, что при увеличении дозы вводимого этанола, его токсический эффект на структурные элементы почек усиливается, что проявляется в более раннем и выраженном развитии дистрофических и некротических изменений клеток канальцев. Введение этанола в дозе 2 мл/кг вызывает минимальные структурные изменения. Интоксикация, вызванная введением этанола в дозах 4 мл/кг и 8 мл/кг, характеризуется резким (к 1 часу) увеличением дистрофических изменений и некрозов канальцевых клеток и их плавным нарастанием до конца эксперимента. Максимальное кровенаполнение органа при введении этанола в дозах 2 мл/кг, 4 мл/кг и 8 мл/кг наблюдается к 3 часу наблюдения и к 4 часу начинается постепенное уменьшение просвета сосудов, не достигая нормализации к концу наблюдений. Алкогольная интоксикация и общее переохлаждение по-разному влияют на морфофункциональное состояние почек. Этанол обладает более выраженным токсическим дозозависимым эффектом. Реакция сосудистой системы почки при введении этанола (доза абсолютного алкоголя 2 мл/кг, 4 мл/кг и 8 мл/кг) и при общем переохлаждении (температура воздуха –10°С и –18°С) различий не имеет.

Free Powerpoint TemplatesPage 24 СПИСОК ИСПОЛЬЗУЕМОЙ ЛИТЕРАТУРЫ Десятов В.П., Бендик И.С., Григорьев М.В. О комбинированном действии охлаждения и алкоголя. Материалы судебных медиков Казахстана. Алма-Ата, 1968, Десятов В.П., Шамарин Ю.А., Шнайдер А.Д., Бунин Ю.Н. Дифференциальная диагностика отравления этиловым алкоголем и смерти от охлаждения. //Теория и практика судебно-медицинской травматологии. – Ижевск, – с Кузнецов В. А. Морфологические изменения в почках при смерти от холода. В кн.: Теоретические и практические проблемы действия низких температур на организм. АН СССР, Л., Науменко В. Г., Митяева Н. А. Гистологический и цитологический методы исследования в судебной медицине (руководство). -М Нефрология: руководство для врачей \ Под ред. И.Е. Тареевой. – М.: Медицина, – 2-е изд., перераб. и доп. – 688 с. Пермяков А. В., Витер В. И. Патоморфология и танатогенеза алкогольной интоксикации Ижевск, 2002-С. 91. Enzymology in human alcohol metabolism / T. K. Li // Adv. Enzymol V. 45 Happel J., Prendergast P. Experimental evaluation of prolonged hypothermia. Arch. Surg., 1955, 71, 3,