Федеральный медицинский биофизический центр им. А.И. Бурназяна, ФМБА РФ Россия, Москва, Живописная ул. 46 А.О. Малышева, Г.Е. Кодина, О.Е.Клементьева, В.Н.Корсунский, Н.А. Таратоненкова Федеральное медико-биологическое Агентство Наноколлоидные системы, меченные радионуклидами для интраоперационной визуализации

Объективная оценка состояния лимфатической системы является важной задачей в медицине, особенно в онкологии. В последнем случае важно также визуализировать и иметь возможность дифференцировать состояние лимфоузлов непосредственно в ходе хирургического удаления раковых опухолей с целью выявления лимфогенного метастазирования при злокачественных опухолях различной локализации. Лимфосцинтиграфия «сторожевого» лимфатического узла нашла широкое применение в онкологической практике: - особенно успешно применяется при обследовании больных раком молочной железы и меланомой ; - изучается возможность применения при злокачественных опухолях головы, шеи, легких, желудочно-кишечного тракта и т. д. Актуальность темы исследования

В настоящее время оптимальными РФП для выявления «сторожевых» лимфатических узлов признаны наноколлоидные препараты, меченные технецием-99м. «Сторожевой» лимфатический узел – первый лимфоузел, к которому оттекает лимфа от злокачественной опухоли. Фильтруя афферентную лимфу, он становится «капканом» для опухолевых клеток. Поэтому считается, что если «сторожевой» лимфоузел не поражен метастатическим процессом, то все остальные региональные узлы интактны. Диагностика лимфатических узлов осуществляется при помощи стационарного гамма-томографа, а их интраоперационный поиск проводится при помощи портативного гамма-зонда.

Методика поиска и удаления «сторожевого» лимфоузла

Качественная визуализация сторожевых лимфатических узлов зависит от размера частиц и способа их введения. Качественная визуализация сторожевых лимфатических узлов зависит от размера частиц и способа их введения. - Частицы с диаметром менее 50 нм могут накапливаться не только в СЛУ, но и в последующих узлах; - Частицы с диаметром более 100 нм медленно мигрируют от места введения. Средний диаметр коллоидных частиц для подкожного или перитуморального введения не должен превышать 100 нм. Средний диаметр коллоидных частиц для подкожного или перитуморального введения не должен превышать 100 нм.

Интраоперационная визуализация с наноколлоидом 99m Тс

РФП для выявления сторожевых лимфоузлов Радиоколлоидные препаратыДиаметр частиц (нм) 99m Тс-НSA (NanoColl) (GE Amersham) < 80 99m Тс - сульфид сурьмы 3 – 50 99m Тс – серный коллоид (H 2 S) < 40 99m Тс – серный коллоид (тиосульфат) m Тс – Re 2 S 7 (NanoCis) 100 (70% 31,6 нм) 99m Тс – цистеин- рений В нашей стране для исследования лимфатической системы долгое время закупался зарубежный препарат «NanoCis», поставки которого прекращены в 2007 г.

Для детектирования сторожевых лимфоузлов можно предложить два отечественных препарата: «Нанотех, 99m Tc» - новый радиофармацевтический препарат успешно прошел доклинические испытания и в настоящее время готовятся документы для прохождения клинических испытаний; «Нанотех, 99m Tc» - новый радиофармацевтический препарат успешно прошел доклинические испытания и в настоящее время готовятся документы для прохождения клинических испытаний; «Технефит, 99m Tc» - уже выпускаемый отечественный радиофармацевтический препарат для диагностики различных заболеваний печени. После внесения изменений в способ его получения в клинических условиях (а именно фильтрование через стерильный фильтр с размером пор 100 нм) его можно применять для визуализации сторожевых лимфоузлов. «Технефит, 99m Tc» - уже выпускаемый отечественный радиофармацевтический препарат для диагностики различных заболеваний печени. После внесения изменений в способ его получения в клинических условиях (а именно фильтрование через стерильный фильтр с размером пор 100 нм) его можно применять для визуализации сторожевых лимфоузлов. Радикал («Амплитуда») – отечественное гамма- детектирующее устройство для поиска «сторожевых» лимфатических узлов

Препарат «Нанотех, 99m Tc» готовят из набора реагентов, состоящего из двух флаконов, и элюата из генератора 99 Mo/ 99m Tc. Флакон 1 представляет собой золь гептасульфида рения, который образуется в результате взаимодействия в кислой среде перрената натрия и тиосульфата натрия с добавлением аскорбиновой кислоты. Флакон 2 содержит лиофилизированный реагент, состоящий из пирофосфата натрия и безводного дихлорида олова.

Приготовление препарата «Нанотех, 99m Тс»: Во флакон 2 вводят 2 мл воды для инъекций, перемешивают до полного растворения лиофилизата. Во флакон 1, содержащий 1 мл золя Re 2 S 7, вводят 0,5 мл раствора из флакона 2 и 2,0 мл элюата из генератора 99 Mo/ 99m Tc, тщательно перемешивают и помещают в кипящую водяную баню на 30 минут. Затем содержимое флакона охлаждают до комнатной температуры.

Определение размера частиц Определение среднего диаметра частиц золя и готового препарата проводили на приборе NICOMP 380 ZLS (США). Средний диаметр частиц золя от 45 нм до 90 нм Средний диаметр частиц готового препарата от 20 нм до 30 нм В препарате не наблюдали изменения размера частиц при его хранении в течение 4 часов

Определение радиохимической чистоты (РХЧ) препаратов Бумажная хроматография Ватман 1 – МЭК Коллоид находится на старте Пертехнетат-ионы продвигаются с фронтом растворителя РХЧ препарата не менее 95 % Определение РХЧ проводили с использованием сканера MiniScan (США).

Проведение доклинических испытаний Объект исследований - кролики породы Шиншилла. Способ введения - в межпальцевый промежуток правой задней лапы вводили 0,2 мл препарата (активность 1 мКи) и проводили динамическую сцинтиграфию задних конечностей. Аппаратура - цифровая двухдетекторная гамма-камера TOSHIBA с параллельным коллиматором, матрица 128*128. Исследования - динамическая сцинтиграфия покадрово с интервалом между кадрами 1 мин. Исследование начинали сразу же после введения препарата. Кроме того, была оценена фармакокинетика изученных препаратов в отдельных органах и скорость выведения препаратов из места их введения.

«Нанотех, 99m Tc» Динамическая сцинтиграфия препарата «Нанотех, 99m Tc» с 1 по 16 минуту после введения Препарат быстро покидает место введения и, проходя по лимфатическим сосу- дам, накапливается в подколенном и паховом лимфатических узлах. Препарат быстро покидает место введения и, проходя по лимфатическим сосу- дам, накапливается в подколенном и паховом лимфатических узлах. Через 1 мин визуализирует- ся лимфатический сосуд, а на 4 мин отчетливо виден паховый лимфатический узел. Через 1 мин визуализирует- ся лимфатический сосуд, а на 4 мин отчетливо виден паховый лимфатический узел. Через 7 мин после введения препарат в следовых количествах обнаруживается в области почек, а к 11 мин отчетливо визуализиру- ются почки и мочевой пузырь. Через 7 мин после введения препарат в следовых количествах обнаруживается в области почек, а к 11 мин отчетливо визуализиру- ются почки и мочевой пузырь.

Динамическая сцинтиграфия препарата «NanoCis» с 1 по 16 минуту после введения Через 3 мин в области по- чек регистрируется повы- шение уровня активности и к 6 мин начинается ви- зуализация почек. Через 3 мин в области по- чек регистрируется повы- шение уровня активности и к 6 мин начинается ви- зуализация почек. Через 6 мин происходит визуализация сначала подколенного, а затем и пахового лимфоузлов. Через 6 мин происходит визуализация сначала подколенного, а затем и пахового лимфоузлов. Препарат характеризуется медленным выведением из места введения. Препарат характеризуется медленным выведением из места введения. Следует отметить вероятное поступление препарата в кровь сразу после его введения, что создает фоновую активность, распределенную по всему телу животного. Следует отметить вероятное поступление препарата в кровь сразу после его введения, что создает фоновую активность, распределенную по всему телу животного.

Распределения препаратов через 30 мин после введения Препарат «Нанотех, 99m Тс» Препарат «Нанотех, 99m Тс» Следует отметить высокий уровень накопления активности в паховом лимфоузле. Следует отметить высокий уровень накопления активности в паховом лимфоузле. Препарат «NanoCis» Препарат «NanoCis» К 30 минуте исследования хорошо визуализируются почки, мочевой пузырь и паховый лимфатический узел.

99m «Технефит, 99m Тс» Сцинтиграфическое исследование крыс и кроликов после подкожной инъекции препарата «Технефит, 99m Тс», фильтрованного через фильтр «Millipore» с размером пор 100 нм, показало, что исследуемый коллоид может успешно использоваться для лимфосцинтиграфии и визуализации «сторожевых» узлов с 15 минуты до 24 ч после введения. Сцинтиграммы крыс, выполненные через 2 ч после инъекции А – препарат «Технефит, 99m Тс», фильтрованный через фильтр с размером пор 100 нм. Накопление препарата в месте введения (МВ) составляло 54,2 % от общей введенной дозы, накопление в паховом лимфатическом узле (ЛУ) - 1,3 % от введенной дозы, Б – нефильтованный препарат «Технефит, 99m Тс». Накопление препарата в месте введения (МВ) 81,3 % от общей введенной дозы, накопление в паховом лимфатическом узле (ЛУ) – 0,57 % от введенной дозы. ЛУ МВ А Б

ВЫВОДЫ В настоящее время для интраоперационной визуализации «сторожевых» лимфоузлов разработаны два отечественных препарата: 99m успешно прошел доклинические испытания и в 2012 г. начнутся клинические испытания; «Нанотех, 99m Тс» - успешно прошел доклинические испытания и в 2012 г. начнутся клинические испытания; 99m выпускаемый ООО «Диамед» препарат, широко используемый в клинической практике для диагностики различных заболеваний печени. Составлены и поданы документы для расширения области его применения. Разрешение на новое использование препарата будет получено в конце 2011 г. «Технефит, 99m Тс» - выпускаемый ООО «Диамед» препарат, широко используемый в клинической практике для диагностики различных заболеваний печени. Составлены и поданы документы для расширения области его применения. Разрешение на новое использование препарата будет получено в конце 2011 г.

СПАСИБО ЗА ВНИМАНИЕ