ОЦЕНКА СПЕРМЫ

Общая макроскопическая оценка Микроскопическая оценка Лабораторная оценка Биологическая проба Оценка спермы

Цвет Норма – желтоватый или желтоватый с сероватым оттенком Запах Не имеет или легкий запах жиропота Консистенция Характерная без примесей Макроскопическая оценка

Цвет Норма – желтоватый или желтоватый с сероватым оттенком Патология : Сероватый (голубоватый) – олигоспермия Розоватый – признак свежей травмы Буро-красный – старая травма Коричневый – заболевания простаты Зеленоватый – примесь гноя Макроскопическая оценка

Запах Норма – без запаха или легкий запах жиропота Патология – гнилостный – при хронических гнойных процессах в семенниках и придаточных половых железах – в сочетании с зеленоватым цветом. Макроскопическая оценка

Консистенция Бык – сливкообразная Баран – сметанообразная Жеребец и хряк – консистенция молока Кобель : 1 фракция – жидкая прозрачная 2 фракция – мутная сливкообразная 3 фракция – жидкая прозрачная Примесь хлопьев – воспаление пузырьковидных желез Макроскопическая оценка

Наличие примесей: Клетки плоского, переходного эпителия, семенных канальцев (зернистые) Форменные элементы крови – эритроциты и лейкоциты Густота спермиев Г – густая С – средняя Р - редкая Подвижность спермиев –(поступательное движение) – определяется в баллах по 10-балльной шкале Микроскопическая оценка

Патологии густоты: Олигоспермия – малое количество спермиев Аспермия – отсутствие спермиев Патологии подвижности спермиев: Единичные (менее 10 %) спермии с прямолинейно- поступательным движением (Е) Сперма с манежным движением спермиев (М) Неподвижные спермии Микроскопическая оценка

Определение процента живых и мертвых спермиев методом дифференциальной окраски; Определение интенсивности дыхания спермиев по времени обесцвечивания метиленовой сини; Определение концентрации спермиев в счетной камере; Определение концентрации спермиев при помощи фотоэлектроколориметре; Определение концентрации спермиев хряка с помощью оптического стандарта мутности; Определение концентрации спермиев жеребца по стандартам; Определение абсолютной выживаемости спермиев; Определение процентного соотношения нормальных и патологических спермиев; Оценка спермы, сохраняемой при низких температурах; Оценка состояния акросомы спермиев. Лабораторная оценка

Определение процента живых и мертвых спермиев методом дифференциальной окраски Обоснование: при смешивании спермы с водным раствором эозина мертвые и ослабленные спермии окрашиваются красителем. Методика: на предметном стекле смешивают каплю спермы и 2-3 капли 5%-ного водного р-ра эозина У жеребцов – конго-рот 1г на 100 мл 7%-ного раствора глюкозы), делают мазок и просматривают под микроскопом (ув. в раз) не менее 500 спермиев подряд. Результат: П=Ж*100/500, где П – процент живых спермиев, а Ж – количество неокрашенных спермиев. Лабораторная оценка

Определение интенсивности дыхания спермиев по времени обесцвечивания метиленовой сини. Обоснование: основан на использовании спермиями кислорода синьки. Методика: при т С на предметном стекле смешивают каплю спермы и каплю 0,01% раствора метиленовой синьки. Смесь набирают в стеклянную трубочку дл. 6-8 см и каналом диам. 0,8-1 мм так чтобы высота столбика была 2 см, трубочку помещают на лист белой бумаги. Засекают время обесцвечивания. Результат: непригодна для осеменения бык – более 30 мин (н – 5-10/10-30), баран (н 3-7/8-12) – более 12 мин Лабораторная оценка

Определение концентрации спермиев в счетной камере: Оборудование: камера Горяева, Смесители (меланжеры) эритроцитарный – для спермы быка и барана, лейкоцитарный – для спермы жеребца и хряка. Методика: сперма смешивается в меланжере с 3%-ным р-ром натрия хлорида, сбоку камеры на сетку наносят каплю разбавленной спермы. Считают спермии в 5 больших квадратах (80 малых) по диагонали. Результат вычисляют по формуле С=400*П*Д/NP* , где С- концентрация, П- подсчитанные спермии, Д – степень разбавления N- число квадратов (80), Р – глубина камеры. Результат – млрд. в мл. Лабораторная оценка

Определение концентрации спермиев хряка с помощью оптического стандарта мутности. стандарт, 1%-ный р-р хлорида натрия, микропипетки, газетный лист. Результат по формуле: К=50(п+0,1), где К – концентрация спермиев млн..мл. п – объем добавленного раствора, мл, 50 – коэффициент. Определение концентрации спермиев жеребца по стандартам. серия стандартов, имитирующая сперму жеребца разной концентрации млн/мл, 7% -ный раствор глюкозы для разбавления при необходимости. Методы основаны на сравнении образцов спермы с эталонами (запаянными пробирками с определенными оптическими характеристиками. Лабораторная оценка

Определение абсолютной выживаемости спермиев – продолжительность жизни спермиев при разных степенях разбавления синтетическими средами. Методика: 11 стерильных нумерованных пробирок по 2 мл 1-2 по 0,5 мл неразбавленной спермы по 0,5 мл синтетической среды, 1 пробирка - контроль далее –последовательный перенос 0, 5 мл разбавленной спермы из предыдущей пробирки в следующую. Получаем разбавление в 2, 4, 8, 16, 32, 64, 128, 256, 512, Пробирки закрывают и ставят в штативе в термостат при 0 С. Ежедневно оценивают активность спермиев при Т 40, добавляя к капле спермы 2 капли 2,9% р-ра цитрата натрия. Оценку активности проводят до полной гибели всех спермиев во всех пробирках. Лабораторная оценка

Оценка результатов: S=Eat, где E – знак суммы, a – активность спермиев, t – показатель времени. Показатель времени определяется по формуле: t=((Tп+1) – (Тп-1))/2, Где Т- продолжительность опыта Тп+1 – время от начала опыта до последующего определения Тп-1 – время от начала опыта до предыдущего определения Хорошая сперма быка и барана, разбавленная синтетической средой в раза должна иметь показатель выживаемости более 1400, хряка -900, жеребца Лабораторная оценка

Определение процентного соотношения нормальных и патологических спермиев. На приготовленный мазок спермы кладут фильтровальную бумагу и наливают раствор красителя (фуксин-эозин или метиленовую синь). Краску на стекле смывают водой и высушивают на воздухе. Просохший мазок просматривают под микроскопом (ув ) и подсчитывают в нескольких полях не менее 200 спермиев. Определяют процент нормальных и патологических спермиев. Лабораторная оценка

Оценка спермы, сохраняемой при низких температурах. Подвижность спермиев в охлажденной сперме, допускаемой для дальнейшего хранения и осеменения. Лабораторная оценка температураКРСМРСКобылы ,5

Оценка состояния акросомы. В акросоме –гиалуронидаза и ингибитор акрозина. Сам акрозин – под акросомой в протоплазме спермия и во внутренней ядерной мембране. Проводят с помощью светового микроскопа с фазово-контрастным устройством. Разводят сперму 1:10 3%-ным р-ром цитрата натрия. Для обездвиживания можно добавить каплю формалина. Характеристика акросомы: 1.Акросома в виде колпачка плотно охватывает головку спермия. 2.Набухание акросомы. Контуры размыты и утолщены, наблюдается потеря оптической плотности. 3.Передняя часть акросомы сильно деформирована, сама акросома видна фрагментами. 4.Акросома потеряна полностью, передняя часть головки сужена, оптически менее плотная. Лабораторная оценка

Аппарат для комплексной оценки качества спермы

Используют здоровый ремонтный молодняк. Осеменение естественное на здоровых животных. Норма – оплодотворяющая способность при первом осеменении не менее 70%. Биологическая проба.

Исследование колититра и смывов с препуция. Определение микробной и грибковой загрязненности спермы и препуция. Определение стерильности синтетических сред ля разбавления спермы. Бактериологический контроль подготовки приборов и инструментов для работы. Определение микробной и грибковой загрязненности воздуха помещений. Санитарная оценка работы племпредприятия

Многократно последовательно разводят сперму и смыв из препуция стерильным физраствором 1:10, 1:100 – 1: , и высевают на среду Булижа. Выдерживают при 37-37,5 сутки и проверяют рост. При наличии группы коли цвет среды меняется, а в трубочках образуется газ. Норма для спермы 1:1 или 1:10, для препуция 1:100 Исследование колититра.