Лекция 34 Методы исследования липидного белков Перфильева Г.В. 2013г. ГБОУ ВПО КрасГМУ имени профессора В.Ф. Войно – Ясенецкого Минздравсоцразвития России Фармацевтический колледж.

План лекции: Методы исследования обмена липидов Подготовка обследуемых Получение биологического материала Условия хранения биологического материала Примечания

Методы исследования белкового обмена: Ферментативный метод – при этом не происходит освобождения глицерина из ФЛ, а только гидролиз ТАГ под действием специфических липаз. По сравнению с химическими ферментативный метод определения липидов обладает более высокой специфичностью и точностью, удобен для автоматизации.

Электрофорез используют для определения ЛП обычно, основанный на электрофоретической подвижности ЛП, он является наиболее достоверным. Электрофорез ЛП проводится на одной из поддерживающих сред: геле агарозы или бумаге. При электрофорезе ЛП на электрофореграмме обнаруживают, как правило, три основных полосы с последовательно увеличивающейся подвижностью, соответствующие ЛПНП, ЛПОНП, ЛПВП, если в сыворотке присутствовали хиломикроны они остаются на старте.

ЛП могут быть выделены путем метода ультрацентрифунирования в солевых растворах, который базируется на оценке плотности ЛП. Для обнаружения ХМ и ЛПОНП существует метод наблюдения, основанный на том, что при 0 0 С в течение ч ХМ поднимаются на поверхность образуя сливкообразный слой, ЛПОНП остаются во взвешенном состояние, что делает пробу мутной во всем объеме плазмы. турбидиметрический метод определения ЛПНП, основанный на образовании гепаринлипопротеинового комплекса, способного осаждаться без денатурации в присутствии хлорида кальция.

Для характеристики обмена липидов можно определять различные показатели в венозной крови, сыворотке, плазме: холестерин фракции холестерина фосфолипиды триглицериды липипротеиды

Подготовка обследуемых: взятие материала для исследования липидов проводится натощак, не менее чем через часов после приема пищи; время взятия биологического материала с 7 до 9 ч утра, доставка в лабораторию не позднее 10 ч утра; исключение алкоголя должно быть не менее, чем за 24 часа до взятия биоматериала, что особенно важно для таких показателей как ТАГ, Хс, ЛПВП; за неделю до взятия крови из диеты следует исключить жиры, за две недели – препараты, снижающие уровень липидов; сдавливание сосудов при наложении жгута должно быть минимальным и не превышать 1 мин;

физическая и мышечная нагрузка, тренировки должны быть исключены как минимум за 3 дня до взятия крови; для исключения влияния положения тела, обследуемый должен находится в покое, сидеть или лежать не менее 5 мин, в связи с изменением концентрации ряда компонентов при переходе пациента из горизонтального положения в вертикальное;

Получение и хранение биологического материала: Желтушные, гемолизированные, хилезные сыворотка или плазма не пригодны для исследования. в качестве антикоагулянта при получении плазмы рекомендуется использовать ЭДТА; отделение полученной плазмы проводят не позднее чем через 2 ч; сыворотку и плазму можно хранить в закрытом сосуде в холодильнике в течение 5 дней, при – 20 0 С в течение 3 месяцев, повторное оттаивание и замораживание сыворотки не допускается.

Домашнее задание Пустовалова Л.М. Основы биохимии для медицинских колледжей Стр