Донцов В.И. МГМСУ им.Евдокимова, ИСА РАН ФЛЮОРЕСЦЕНТНЫЕ ЗОНДЫ В ИССЛЕДОВАНИИ КЛЕТОЧНОГО СТАРЕНИЯ

ФЛЮОРЕСЦЕНТНЫЕ ЗОНДЫ – молекулы, флюоресценция которых зависит от определенных факторов среды (рН, ионов Ме 2+, вязкости и т.п.). Обычно могут окрашивать клетки прижизненно.

ФЛЮОРЕСЦЕНТНЫЕ ЗОНДЫ – ТЕСТЫ НА СИСТЕМНЫЕ МЕХАНИЗМЫ КЛЕТКИ Акридин оранжевый (АО) 9-Амино- акридин (9-АА) Вязкос т ь м е м б р а н м б р а н Пирен рН Родамин 123(энергия) СР(Са 2+ ) Фура-2 (Са 2+ ) Лизос омы омы Х-Gal

Акридиновый оранжевый как тест на активный хроматин клеток селезенки Клетка селезенки мыши Клетки селезенки в окне программы «Цитоскан»

Снижение реактивности хроматина на КонА с возрастом в клетках селезенки мышей (при повышенном фоне). Молодые Старые

G 1 /S блок у старых мышей (клетки селезенки) – недостаток факторов роста G 1 /S блок Молодые Ста рые

Повышение реакции на Родамин 123 у митохондрий старых мышей

Флюоресценция старых выше за счет больших и средних клеток (предбластов)

Снижение реактивности на КонА митохондрий с возрастом Мол одые Ста рые

Возрастные изменения рН клеток селезенки Связывание 9- Аминоакридина (закисление) рН 7,2 7,6 +9-АА + (-) Клетка

Возрастные изменения микро вязкости мембран клеток селезенки у старых мышей Изменение спектра Пирена при добавлении клеток селезенки Возрастные изменения микро вязкости

Реакция на А23187 (ионофор Са 2+ ) в без кальциевой среде (выход Са 2+ из внутренних депо)

Эффект блокаторов СР на А23187 Снижение входа Са 2+ в СР Снижение выхода Са 2+ в СР Пассивный выход Са 2+ Активный выход Са 2+

Возрастное снижение реактивности на А23187

Снижение устойчивости СР и МХ с возрастом к блокаторам Эффект кофеина Эффект ДНФ

Отсутствие возрастных изменений на КонА (внешний Са 2+ )

Экспрессия в старых клетках лизосомальной гидролазы при рН=6 (x-Gal, фибробласты,Зубова и др.,2005)

ОБЩИЕ ВЫВОДЫ: 1. С возрастом ухудшается состояние внутренней среды клеток (рН, вязкость…). 2. С возрастом качественно изменяются функции клетки (рН опт. лизосом…). 3. С возрастом снижается общая реактивность клеток (Са 2+ механизмы…). 4. С возрастом наблюдается напряжение компенсаторных механизмов клетки (энергообеспечение, активный хрома- тин, Са 2+ механизмы…). В целом, функция системных механизмов клетки ухудшается, перенапрягается и качественно изменяется.