Значение современной иммунодиагностической тест-системы ЕАА (анализ активности эндотоксина) в оценке комплексной интенсивной терапии инфекционно-септических осложнений у кардиохирургических больных. М.Г. Плющ, М.Б. Ярустовский, М.В. Абрамян, О.О. Подщеколдина, З.В. Попок, Б.С. Мамазакирова, Д.А. Попов Научный центр сердечно-сосудистой хирургии им. А.Н. Бакулева РАМН

РОЛЬ ЭНДОТОКСИНА В ПАТОГЕНЕЗЕ СЕПСИСА G.Guadagni et al. Critical Care Neph. Ch.284:

Эндотоксин описан в 1892 Ричардом Пфайфером. Липидная часть А эндотоксина всех видов грамотрицательных бактерий является мишенью при анализе активности эндотоксина.

Метод А. Качественный гель-тромб тест. Метод В. Количественный гель-тромб тест. Точность определения содержания эндотоксина этим методом не очень высокая. Поэтому в Европейской фармакопее метод называется полуколичественным анализом. Несмотря на это, количественный гель-тромб тест достаточно широко используется в научно-исследовательских работах. Метод С. Кинетический турбидиметрический тест. Метод D. Кинетический хромогенный тест. Метод Е. Хромогенный тест по конечной точке. Метод F. Турбидиметрический тест по конечной точке. «Бактериальные эндотоксины», Европейская фармакопея. Модификации методов LAL-теста

ия Определения уровня эндотоксина в плазме крови проводили при помощи гель-тромб теста ( вариант методики в Техническом Бюллетене BioWhittaker (Cambrex) 12) Принцип метода: эндотоксин Профермент Коагулаза фермент Коалулоген Коагулин В основе лежит реакция взаимодействия эндотоксина и лизата амебоцитов Limulus, полученного из амебоцитов мечехвоста рода Limulus. В ходе реакции эндотоксин вызывает помутнение лизата и образование геля. Концентрация эндотоксина измеряется в единицах эндотоксина на 1 мл (ЕДэ/мл)

ЕАА – определение уровня активности эндотоксина ЕАА - представляет собой экспресс-анализ цельной крови, позволяющий диагностировать наличие LPS в крови при грамотрицательной бактериальной инфекции, а также прогнозировать риск возникновения тяжелого сепсиса. ЕАА является единственным количественным лабораторным тестом утвержденным Управлением по санитарному надзору за качеством пищевых продуктов и медикаментов США (FDA). В России тест-система зарегистрирована 18 августа 2009 года (ФСЗ 2009/04982).

ПРИНЦИП МЕТОДА ЛЮМИНОЛЬНОЙ ХЕМОЛЮМИНИСЦЕНЦИИ Принцип метода: Присутствующий в крови эндотоксин распознается и связывается антиэндотоксиновыми антителами (иммуноглобулины М), после чего доставляется к нейтрофилам через комплементные рецепторы. В присутствии зимозана нейтрофилы подвергаются респираторному взрыву, который сопровождается излучением света. Количество испускаемого света, определяемого на хемолюминометре пропорционально количеству эндотоксина.

Определение активности эндотоксина (EAA) методом хемолюминисценции

Интерпретация результатов EAA < 0,40 – характеризует низкую концентрацию эндотоксина в крови и невысокий риск развития инфекционно-септических осложнений. ЕАА 0,40-0,59 – характеризует средний уровень концентрации эндотоксина в крови и представляет повышенный риск развития тяжелого сепсиса ЕАА > 0,60 – характеризует высокий уровень концентрации эндотоксина в крови и предс- тавляет высокий риск развития тяжелого сепсиса

Зависимость уровня активности эндотоксина (EAA) от концентрации LPS John Marshall et al., Journal Infect. Dis., 2004, 190, 527 Пограничная зона высокий EAA низкий EAA

Зависимость между уровнем активности эндотоксина и тяжестью состояния пациентов (Ya.Kakihara, анализ одноцентрового исследования, 2007) Контроль (Пациенты без SIRS и инф.) 0.18±0.09 n=12 SIRS Пациенты без инфекции 0.33±0.19 n=17 Сепсис 0.39±0.16 n=14 Тяжелый сепсис 0.65±0.25 n=32 СШСШ 0.78±0.34 n=16 P

Уровень активности эндотоксина- как предиктор летальности Klein D, Monti G, Bottiroli S et al. Crit Care Med dec. 2009

Характеристика больных Обследованы 48 взрослых пациентов с инфекционно- септическими осложнениями после операций на сердце. Средний возраст 55,5 (51-61,5) лет. 36 больным выполнена хирургическая коррекция клапанной патологии 7 больным произведено шунтирование коронарных артерий 3 пациентам выполнено хирургическое лечение гипертрофической кардиомиопатии 2 больным проведена ортотопическая трансплантация сердца

Определение активности эндотоксина (ЕАА) (Spectral Diagnostics Inc, Canada) LAL-тест (BioWhittakker, Сambrex, USA) Прокальцитонин ( PCT B.R.A.H.M.S., Germany) Бактериологическое исследование Количество лейкоцитов Количество тромбоцитов Лабораторные исследования

48 пациентов 1 группа n=3 ЕАА0,6 71%

Дизайн исследования Одноцентровое, проспективное исследование 34 пациентам, которые имели повышенные уровни EAA ( 0,6) и были в стабильном клиническом состоянии в комплекс интенсивной терапии включена LPS-сорбция, проводимая с использованием селективных сорбентов - применялись сорбционные колонки Toraymyxin – PMX-F (Toray, Japan). Проводились 2 стандартные процедуры LPS-сорбции для каждого пациента. Мониторинг лабораторных тестов: до первой процедуры, в течение 24 часов после нее и через 24 часа после второй процедуры

48 пациентов 1 группа n=3 ЕАА0,6 71% Без LPS –сорбции 17,6% n=6 ЕАА-0,79 LAL-0,72 Выживаемость 33% LPS-сорбция- 82,4% n=28 ЕАА-0,76 LAL-1,44 Выживаемость 57%

Динамика клинических и лабораторных показателей до и после LPS-сорбции (n=34) Показатель До LPS-сорбцииПосле 2 процедуры LPS-сорбции р ЕАА 0.73 ( )0.58 (

Зависимость между уровнем ЕАА и 28-дневной выживаемостью Выживаемость, %

ЗАКЛЮЧЕНИЕ ЕАА является ранним предиктором развития тяжелых инфекционно-септических осложнений. ЕАА быстрый (30 мин), информативный, надежный экспресс- тест количественного анализа. ЕАА позволяет на ранних сроках определить показания к проведению патогенетической интенсивной терапии. ЕАА способствует оценке эффективности терапии. ЕАА –прогностически значимый маркер при комплексной интенсивной терапии инфекционно-септических осложнений после кардиохирургических вмешательств.