Генотипирование по локусам CCR5(Δ32) и ApoE (ε2, ε3, ε4) Балыгина И., Букина Ю., Голикова Е., Горохова Е., Сульгин А., Павленко Д., Попкова А., Шарипова. - презентация

1 Генотипирование по локусам CCR5(Δ32) и ApoE (ε2, ε3, ε4) Балыгина И., Букина Ю., Голикова Е., Горохова Е., Сульгин А., Павленко Д., Попкова А., Шарипова Р. Рецептор CCR5 в клеточной мембране. CCR5 (C-C рецептор хемокина 5, C-C chemokine receptor type 5). Белок CCR5 экспрессируется преимущественно Т-клетками, макрофагами, дендритными клетками и клетками микроглии. Видимо, CCR5 играет роль при воспалительной реакции на инфицирование. Однако роль этого белка в иммунном ответе до конца не ясна. CCR5 вовлечен в патогенез развития ВИЧ – инфекции. При попадании в организм человека, вирусу иммунодефицита необходимо провзаимодействовать с клеточными рецепторами на поверхности лимфоцитов: основной - CD4 и корецептор - CCR5. Благодаря корецепторам осуществляется более плотная адгезия и наиболее эффективное проникновение вируса в клетку. Без этих белков-корецепторов, также как без CD4- рецептора, вирус проникнуть в клетку не может. CCR5-Δ32 - генетический вариант CCR5. CCR5-Δ32 представляет собой делецию 32 пар оснований, приводящую к нарушению адгезивных свойств кодируемого ею белка CCR5 Т-клеток. Делеция части гена CCR5 приводит к невозможности присоединения вируса ВИЧ к Т–клетке М М Генотип +/+ Генотип +/ Δ 32 Потенциально снижает риск развития болезни Аполипопротеин E (АпоЕ, apolipoprotein E, APOE) Aполипопротеин Е синтезируется в печени и в головном мозге. Он играет существенную роль в метаболизме липидов. В головном мозге aполипопротеин Е необходим для доставки холестерина от глиальных клеток мозга до нейронов Аллельный полиморфизм гена ApoE обусловлен заменой двух аминокислотным остаткам, что приводит к изменению биологических свойств aполипопротеина Е. Существует три основные изоформы белка ApoE 2 (e2), ApoE 3 (e3) и ApoE 4 (e4). Аллели отличаются друг от друга лишь точечными мутациями, приводящими к замене аминокислот аргинина на цистеин в двух положениях в белке. Активность АроЕ белка зависит от аллельного состояния его гена. Изоформа ApoE 2 отличается нарушением в связывании с липопротеиновым рецептором низкой плотности ( LDL - рецептором). Изоформа e4 белка АроЕ имеет Arg вместо Cys в позиции дисульфидного связыванияв (положении 112 его аминокислотной последовательности) и, следовательно, не может образовывать димеры, в отличие от изоформ e2 и e3 изоформ При болезни Альцгеймера (БА), как уже отмечалось выше, была отмечена корреляция между генотипом АроЕ и плотностью амилоидных бляшек. У носителей генотипа e4/e4 количество амилоидных отложений на 20-30% выше, чем у носителей генотипов e3/e4 и e3/e3. Гомозиготы по аpоЕ4, имеют повышенный риск развития болезни Альцгеймера в 5-15 раз ( Corder E.H.,1993 ). Также предполагается, что аллель e2 обладает протектирующим свойством. В ряде популяций показано, что он ассоциирован с пониженным риском развития БА и более поздним возрастом начала заболевания Было проведено генотипирование российской популяционной выборки (N=40) по локусу ССR5(Δ32) Освоенные методики : выделение ДНК (сорбентный метод), полимеразная цепная реакция, ПДРФ (полиморфизм длин рестрикционных фрагментов), гель-электрофорез ДНК (в агарозном и полиакриламидном геле), анализ данных секвенированием по Сенгеру с помощью капиллярного электрофореза Было проведено генотипирование российской популяционной выборки (N=34) по локусу ApoE (e2/e3/e4) методом ПЦР-ПДРФ и секвенированием по Сэнгеру с помощью капиллярного электрофореза Частоты встречаемости аллелей в исследованной выборке практически не отличаются от частот в европейских популяциях М генотип+/++/Δ32Δ32 /Δ32 Кол-во (частота %) 31 (77,5%) 9 (22,5%) - частота % российские популяцие 78-83%22-25% Частоты встречаемости аллелей в исследованной выборке практически не отличаются от частот в европейских (российских) популяциях генотипЕ2/е3Е2/е4Е3/е3Е3/е4Е4/е4 Кол-во (частота %) (88%) 4 (12%)- частота % российские популяцие 13%4%65%17%1%