© Владимиров Ю. А. Применение Клеточной Хемилюминесценции. - презентация

1 © Владимиров Ю. А. Применение Клеточной Хемилюминесценции

2 © Владимиров Ю. А. План лекции Клеточная хемилюминесценция Примеры применения –Активность фагоцитов –Действие токсических веществ –Действие света (лазера) –Лекарственная несовместимость Заключение Физико-химические стимулы –Латекс –Сульфат бария –Электропорация Химические стимулы –Ca 2+ ионофоры –Иммунные комплексы –fMLP –FMA –Поверхность апоптотических клеток Введение –История –Установка –Пример кривых ХЛ Принцип метода –Реакции при стимуляции клеток –Активаторы свечения

3 © Владимиров Ю. А. Robert Allen and Yury Vladimirov

4 © Владимиров Ю. А. Photometric set of the chemiluminometer Motor Tube Thermostated Cuvette Shutter Photo multiplier

5 © Владимиров Ю. А. Выделение активных форм кислорода нейтрофилами При взаимодействии со стимулом, например бактериями, фагоциты выделяют супероксидные радикалы и другие активные формы кислорода. Время Хемилюминесценция 2 минСтимул ХЛ-ответ клеток меняется после лазерного облучения. Дозы облучения

6 © Владимиров Ю. А. Time course of liniimol-dependent chemiluminescence from human neutrophils Fig Time course of liniimol-dependent chemiluminescence from human neutrophils,. Cells were exposed to fMetLeuPhe (left-hand graph) or to phorbol myristate acetate (right-hand graph) at 37 o C. (A) 10 5 cells, (B) 5 x 10 5 cells; (C) 10 6 cells. Diagram adapted from Agents and Actions, 21, 104 (1987) by courtesy of Dr C. Dahlgren and the publishers. In the left-hand curve, the first peak is probably related to extracellular events (such as HOCI production by myeloperoxidase) and the second to intracellular events.

7 © Владимиров Ю. А. Хемилюминесценция при окислении люминола

8 © Владимиров Ю. А. Люцигенин дает свечение при взаимодействии с супероксидом (blue-green luminescence) + ROOH or R=O + photon N X R CH NH 2 Lucigenin - N X O CH - 3 3

9 © Владимиров Ю. А. Стимулы Физические –Электрические импульсы –Адгезия Химические –Ca 2+ -ионофор –fMLP –FMP Физико-химические –Опсонизированный зимозан –НИЛИ

10 © Владимиров Ю. А. ХЛ нейтрофилов стимулированных латесом

11 © Владимиров Ю. А. Измерение ХЛ цельной крови с BaSO 4 Изотонический буфер 20 млl Кровь 1 BaSO4 Разведенная кровь 2 BaSO 4 + лейкоциты Эритроциты ФЭУ 3

12 © Владимиров Ю. А. ХЛ ответ осажденных лейкоцитов Хронический псориас Трофичская язва ног Хроническая ИБС Острый гепатит Доноры Туберкулез Бронхиальная астма Лстрый псориас n=18 Амплитуда ХЛ ответа, отн. ед. N =10 n=4 n=8 n=6 n=18 n=66 n=

13 © Владимиров Ю. А. Измерение электро-стимулированной ХЛ Кровь 20 мкл шприц 1 электро- поратор +- 2 термостати- рованная кювета шторка ФЭУ разведение крови 3

14 © Владимиров Ю. А. Электростимулированная ХЛ крови 500 В Время, мин ХЛ, отн. ед. Гиперхолестеринемия Здоровые доноры После УФ-ОК Амплитуда ХЛ-ответа До УФ-ОК А Б Влияние амплитуды импульсов, В

15 © Владимиров Ю. А. Электро-стимулированная хемилюминесценция крови Vladimirov et al До и после УФ-облучения крови (УФОК) Клиника Гумбольдского университета, Берлин Гиперхолестеринемия Доноры После УФ- ОК Амплитуда ХЛ-ответа До УФ- ОК

16 © Владимиров Ю. А. Вопросы к зачету 1.Клеточная хемилюминесценция. Какие клетки используются, как проводятся измерения? Основные узлы прибора. Форма кривых и от чего она зависит. 2.Активаторы хемилюминесценции, используемые при изучении клеток крови. Принцип их действия и специфичность. 3.Хемилюминесценция нейтрофилов крови различных групп больных. 4.Метод измерения хемилюминесценции клеток, осаждаемых на адсорбенте. 5.Электропорация клеток крови. Принцип метода и его применение.