Докладчик: студентка 3 курса Датиева И.А. Научный руководитель: д.б.н. Чопикашвили Лидия Васильевна Северо-Осетинский Государственный Университет им. К.Л.Хетагурова. - презентация

1 Докладчик: студентка 3 курса Датиева И.А. Научный руководитель: д.б.н. Чопикашвили Лидия Васильевна Северо-Осетинский Государственный Университет им. К.Л.Хетагурова Биолого-Технологический факультет Кафедра зоологии Владикавказ 2013

2 1) Оценка и анализ факторов окружающей среды, в том числе мутагенных и канцерогенных свойств лекарственных препаратов 2) Использование БАВ-ов растительного происхождения, не вызывающих побочные эффекты. Необходимость комплексной оценки влияния этих веществ на основные этапы мутагенеза. Актуальность проблемы

3 4) Использование тестов на мутагенность для прогноза канцерогенных свойств 3) В настоящее время большинство исследований мутагенных свойств химических соединений проводится с помощью теста Эймса. И значительно меньше исследований выполнено на млекопитающих in vivo. Цель исследования: Изучить генотоксический эффект «кларитромицина» и его модификацию биологически активного вещества Ginkgo Biloba в клетках костного мозга млекопитающих.

4 Задачи: 1) Провести серию экспериментов in vivo по выявлению генотоксичности лекарственного препарата «кларитромицина». 2) Выявить эффективность модификации генетического эффекта «кларитромицина» с помощью биологически активного вещества Ginkgo Biloba.

5 Научная новизна: В доступной нам литературе мы не встретили материалы по генетической модификации «кларитромицина» и его коррекции биологически активным веществом Ginkgo Biloba. Это послужило основанием для выбора темы исследования.

6 Практическая значимость: На кафедру педиатрии СОГМА будут представлены результаты исследования по генетической активности «кларитромицина» и его коррекции биологически активным веществом Ginkgo Biloba.

7 Методика Форда-Хамертона – культивирование клеток костного мозга млекопитающих Исследуемые препараты: -Кларитромицин -Гинкго Билоба Животные: 16 белых крыс линии Wistar массой г, в каждой группе по 4 крысы Материалы и методы исследования

8 Костный мозг млекопитающих является наиболее широко используемой моделью для исследования мутагенной активности химических соединений in vivo. Это связано, во-первых, с тем, что клетки костного мозга имеют высокую пролиферативную активность и, во-вторых, простотой приготовления препаратов. Морфология хромосом большинства видов лабораторных животных хорошо изучена.

9 Тестирование проводили на крысах, анализировали и учитывали как число метафаз с аберрациями, так и общее число структурных нарушений хромосом..

10 Методическим условием является использование колхицина, разрушающего веретено деления и останавливающего клеточное деление на стадии метафазы. Хромосомы в присутствии колхицина укорачиваются в результате продолжающейся конденсации, следовательно, в препарате они легче отделяются одна от другой. Кариотипы при простой (а) и дифференциальной (б) окраске

11 Метод учета хромосомных аберраций в клетках костного мозга млекопитающих является составной частью практически всех комплексов методов оценки мутагенных свойств у химических веществ, принятых почти во всех странах мира проводящих такую оценку.

12 Крыса линии Wistar Введение испытуемого препарата Взвешивание животного Длительность каждой точки эксперимента составляла 7 дней. Металлический зонд вводили в ротовую полость на корень языка крысы и малыми порциями, исследуемый препарат заглатывался животными. Животные содержались в условиях вивария, в отдельных пластмассовых клетках по 4 штуки. Лекарственные препараты вводили животным 7 суток, исходя из их веса.

13 3 группа 7 суток Варианты эксперимента 7 суток 1 группа Негативный контроль 2 группа 7 суток Позитивный контроль 1 Кларитромицин 0,75 мг на 100 г Позитивный контроль 2 Кларитромицин 1,5 мг на 100 г 4 группа 7 суток Настойка листьев Ginkgo Biloba

14 Характеристика используемого лекарственного препарата «Кларитромицин» Фармакологическая группа Макролиды и азалиды Характеристика Полусинтетический антибиотик из группы макролидов.

15 Характеристика используемого лекарственного препарата «Гинкго Билоба».

16 Результаты исследований: Нами были изучены спектры хромосомных аберраций, представленные одиночными и парными фрагментами. Одиночные фрагменты доминировали в негативном контроле – это аберрации хроматидного типа. Аберрации хромосомного типа – парные фрагменты во всех вариантах эксперимента представлены почти равномерным количеством, за исключением четвертого варианта эксперимента, где парных фрагментов было в два раза меньше по сравнению с предыдущими.

17 Таким образом, на основании анализа полученных научных исследований по оценке цитогенетического эффекта «Кларитромицина» в клетках костного мозга млекопитающих, нами установлено, что «Кларитромицин» не является мутагеном. Настойка листьев Ginkgo Biloba проявляет выраженный анти мутагенный эффект. Коэффициэнт защиты, который проявился во всех вариантах эксперимента составляет

18 Всего проанализировано 2000 метафазных пластинок. Материалы исследования представлены в диаграмме 1 «Оценка цитогенетического эффекта кларитромицина в клетках костного мозга млекопитающих.»

19

20

21

22 Спектр Аберраций

23

24 Выводы: В результате проведенных экспериментов нами было установлено, что: 1) Лекарственный препарат, полусинтетический антибиотик из группы макролидов «Кларитромицин» не является мутагеном. При проведении in vitro теста на хромосомные аберрации в обоих случаях был получен отрицательный результат.

25 Таким образом, не мутагенные эффекты кларитромицина открывают новые перспективы для его клинического применения. По последним научным данным, не выявлено мутагенного действия кларитромицина в ряде тестов in vitro (тест с сальмонеллами/микросомами млекопитающих, тест доминантных леталей у мышей, микроядерный тест на мышах и др.). Результат теста Эймса с метаболитами кларитромицина был отрицательным.

26 2) Настойка листьев Ginkgo Biloba обладает выраженным антимутагены эффектом и проявляет коэффициент защиты Также, по последним научным данным, в экспериментах на животных экстракт Ginkgo Biloba предупреждал развитие рака желудка. При добавлении экстракта Ginkgo Biloba в клеточные культуры наблюдали торможение роста и гибель клеток рака молочной железы и мочевого пузыря. В клинических исследованиях выявлено, что экстракт Ginkgo Biloba обладает антиэстрогенным действием, что снижает риск рака молочной железы; защищает ДНК клеток от вредного действия ионизирующей радиации и ультрафиолета.

27 Благодарю за внимание! Датиева И А.