Микробиология Тема 1. Питательные среды

Питательные среды необходимы для получения чистых культур микроорганизмов, изучения особенностей их морфологии и физиологии, а также для сохранения микроорганизмов в виде чистых культур в лабораторных и производственных условиях.

Классификация питательных сред. По консистенции: 1. Полужидкие 2. Жидкие 3. Сыпучие 4. Плотные 5. Сухие По составу: 1. Естественные 2. Искусственные 3. Синтетические По назначению: 1. Простые 2. Специальные 3. Элективные 4.Дифференциально- диагностические

Наиболее широко используемые питательные среды: 1. Мясопептонный бульон (МПБ) 2. Мясопептонный агар (МПА) 3. Среда Эндо 4. Среды Гисса с углеводами 5. Реактив Андреде 6. Накопительная среда (для Pseudomonas sp., Staphylococcus sp) 7. Солевой агар с маннитом 8. Среда для выявления пигмента 9. Среда Сабуро 10. Кровяной Агар 11. Среда Левина 12. Среда Китта-Тароцци 13. Среда Кесслер 14. Среда с мочевиной 15. Пептонная вода 16. Щелочной агар 17. Среда Эйкмана

Мясопептонный бульон К 100 мл мясной воды прибавляют 1 г пептона и 0,5 г хлорида натрия, кипятят 10 минут, добавляют 0,05 нормальный гидроксид натрия до рН 7,4, снова кипятят 30 мин до выпадения осадка. Фильтрулют, доливают водой до первоначального объёма, стерилизуют 30 минут при 120 градусах Цельсия. Используют для культивирования сапрофитных бактерий.

Мясопептонный агар (МПА) - основная плотная питательная среда, используемая для выращивания хемоорганотрофных бактерий. Готовят на основе МПБ, добавляя к нему 1,5 - 3% агара, или на мясной воде, добавляя к ней 1 % пептона, 0,5% натрия хлорида и 1,5 - 3% агара. Смесь кипятят до растворения, осветляют, пропускают в горячем виде через ватно-марлевый фильтр, устанавливают рН, разливают в бутыли и стерилизуют при 120°С в течение мин.

Среда Эндо Среда Эндо дифференциально-диагностическая питательная среда, предназначенная для выделения энтеробактерий. Названа по имени предложившего её японского бактериозога Сигэру Эндо ( ). Состав среды: пептона 1%, лактозы 1 %, двузамещенного фосфорнокислого калия (К 2 НРO 4 ) 0,35%, агар-агара 1,5%. Все ингредиенты, за исключением лактозы, растворяют в воде при кипячении или в автоклаве. Во избежание карамелизации сахара лактозу добавляют после растворения всех остальных компонентов среды. Кроме лактозы, среда не должна содержать никаких других углеводов, поэтому при ее изготовлении не рекомендуется использование мясной воды; можно применять любой пептон или гидролизат белков. Индикатор готовят ex tempore и добавляют к расплавленной питательной основе. Среда может быть использована сразу после приготовления без предварительной стерилизации; при необходимости ее стерилизуют в течение 30 мин. при t° 110°; рН готовой среды 7,47,6. Индикатором служит соединение основного фуксина с сернистокислым натрием.

Среды Гисса с углеводами Среды с углеводами и индикатором, используемые для определения сахаролитических св-в микробов в процессе их идентификации. Сухие коммерческие среды содержат углевод (глюкозу, лактозу, сахарозу, маннит, мальтозу и др.), индикатор ВР (смесь водного голубого и розоловой к-ты), питательный агар и соли минеральные. Правильно приготовленная: среда должна иметь светло-розовый цвет и не прорастать в течение суточной инкубации в термостате при 37°С. Иссл. к-ру засевают уколом петли в столбик среды, инкубирулют в термостате при 37°С сутки или более в зависимости от идентифицируемого вида. Перекрашивание среды в синий или голубой цвет указывает на ферментацию сахара с образованием к-ты; такое же перекрашивание среды и появление в ее толще пузырьков - на ферментацию сахара с выделением к-ты и газа. При отсутствии ферментативной активности у микроба среда мутнеет, но цвета не меняет. Жидкие среды готовят на 1% пептонной воде, рН 7,4, с 0,5-1% концентрацией углевода и индикатором Андреде или бромтимоловым синим. В пробирки со средой опускают поплавки. Среду стерилизуют в автоклаве при 112°С в течение 30 мин. Образование к-ты регистрирулют по изменению цвета среды (соответственно в розовый и желтый), образование газа -по накоплению его в поплавках Начальный и при отсутствии ферментации цвет среды- соломенно-желтый с индикатором Андреде и желто-зеленый с индикатором бромтимоловым.

Реактив Андреде Часто используемый в бактериоз. работе индикатор рН среды, особенно при определении ферментации углеводов бактериями. Для приготовления И. А. в 100 мл дистил. воды растворяют 0,5 г кислого фуксина, прибавляют 15 мл 4% р-ра натрия гидроксида, выдерживают смесь при комнатной температуре 24 ч, доливают 1-2 мл щелочи, снова выдерживают ее 24 ч. Стерилизуют И. А. автоклавированием перед употреблением или вместе с питательной средой, в к- рулю его доливают в соотношении 1:20. В щелочной и слабокислой среде И. А. бесцветный; переход в красный цвет происходит при рН 5,5 и ниже.

Среда Сабуро Сабуро среды группа питательных сред для грибов. Пробная среда сабуро., используемая для первичного выделения грибов, состоит из 2% агарового геля, 1% пептона, 4% мальтозы, рН 6, Стерилизуют 15 мин при 120°С. Для хранения грибов применяют С.с «сохранения», в к-рой по сравнению с пробной С.с. отсутствует углевод. В пептонном агаре С.с., применяемом для выделения возбудителя фавуса, содержание пептона увеличено до 3%. Бульон С.с. включает те же компоненты, кроме агара; используют для выращивания грибницы при извлечении из грибов АГ.

Кровяной агар Специальная бактериоз. среда, служащая для выделения бактерий (напр., стрептококков) и установления их гемолитической активности. Для приготовления К расплавленному и охлажденному до 45°С (не выше) 2% МПА добавляют 5-10% подогретой стерильной дефибринированной крови барана, кролика, лошади, человека, смешивают и разливают по чашкам Петри, выдерживают сутки в термостате на возможную бактер. контаминацию. К-ру засевают штрихом или бляшкой.

Среда Левина (лактозоэозинметиленовый агар) - дифференциально- элективная среда для выделения энтеробактерий. Позволяет отличить лактозоферментирулющие (образуют темно-синие или черные колонии) от неферментирулющих лактозу к-р (колонии цвета среды). Протей формирует изолированные оранжевые колонии. Среду готовят добавлением к 100 мл 1,5% МПА, рН 7,2 - 7,4, 2 мл 0,5% водного р-ра метиленового синего, 1,5 мл 2% р-ра эозина, 2 г лактозы и 0,2 г двухосновного калия фосфата, затем разливают ее по чашкам Петри. Среда имеет светло- фиолетовый цвет.

Среда Китта-Тароцци (Китта Тароцци) - жидкая элективная среда для анаэробов. Для ее приготовления нарезанную мелкими кусочками печень (мясо) заливают трехкратным количеством МПБ, рН 7,4 - 7,6, кипятят 30 мин, фильтрулют. Просушенные кусочки печени раскладывают по 3 -4 г в пробирки и заливают 7-8 мл бульона. Стерилизуют при 120°С в течение 30 мин. Перед употреблением Т. с. прогревают и заливают стерильным нейтральным парафиновым маслом.

Среда Олькенитского (трех сахарная среда с мочевиной) - состав: 1 г лактозы, 1 г сахарозы, 0,1 г глюкозы, 1 г мочевины, 0,02 г соли Мора, 0,03 г гипосульфита. Растворяют в небольшом количестве воды на водяной бане и добавляют к 100 мл расплавленного и охлажденного до 50°С МПА, размешивают, фильтрулют через марлю, устанавливают рН 7,2 - 7,4 и доливают 0,4 мл 0,5% р-ра фенолового красного. Готовая среда имеет бледно- розовый цвет. Применяют для накопления и дифференциации энтеробактерий. Позволяет определить у иссл. к-ры ферментацию углеводов, мочевины, образование сероводорода.

Среда Плоскирева Сухая селективная питательная среда, основными компонентами которой являются желчные соли, лактоза и индикатор; используется для выделения дизентерийных бактерий и возбудителей сальмонеллезов.

Среда Эйкмана Среда, содержащая пептон, поваренную соль и глюкозу; используется при исследовании воды на присутствие в ней кишечной палочки.

Спасибо за просмотр