НОВЫЕ ПОДХОДЫ К ГЕНОДИАГНОСТИКЕ И ТЕРАПИИ АТЕРОСКЛЕРОЗА И.А. Собенин, д.м.н. НИИ общей патологии и патофизиологии РАМН

Смертность в ЕС и России European Cardiovascular Disease statistics 2010

Стандартизованные показатели смертности от ИБС и ОНМК European Cardiovascular Disease statistics 2010 ИБС ОНМК

стратегические – атеросклероз не рассматривается как самостоятельная научная и медицинская проблема – большая часть населения нуждается в профилактике атеросклероза – отсутствует система надежной первичной профилактики атеросклероза тактические – отсутствуют надежные алгоритмы определения сердечно-сосудистого риска – отсутствует класс средств для массовой профилактики атеросклероза Проблемы

Задачи разработка новых методов оценки риска развития атеросклероза и его клинических проявлений (решение – комплексный анализ генетических и фенотипических факторов риска) создание класса средств для массовой профилактики атеросклероза (решение – использование нелекарственных средств, обладающих антиатеросклеротическим действием)

Создание метода комплексной оценки риска развития сердечно-сосудистых заболеваний и их осложнений на основе анализа генотипа и фенотипа

Участники исследования Условно здоровые лица Больные ИБС Всего Мужчины Женщины Всего

Измеряемые биомаркеры фенотипические – антропометрические (пол, возраст, индекс массы тела) – клинические (артериальное давление, гипертрофия левого желудочка миокарда, курение, гипертония, сахарный диабет) – липидные (общий холестерин, холестерин ЛНП, холестерин ЛВП, триглицериды, липидный индекс атерогенности, холестерин ЦИК*) – инструментальные (толщина интимо-медиального слоя сонных артерий – 12 показателей*, атеросклеротические бляшки*) генетические – семейный анамнез (отягощенная наследственность по ИБС, гипертонии, сахарному диабету) – мутации митохондриального генома (11 маркеров и их сочетания*) * разработано в рамках данного исследования

Разработаны ультразвуковые критерии предрасположенности к атеросклерозу в российской популяции, скорректированные по половой принадлежности и возрастной группе Результаты получены на выборке их 1200 человек, не имеющих клинических проявлений атеросклероза (условно здоровых лиц). Ультразвуковое сканирование сонных артерий проводили в В-режиме с использованием линейного датчика 7,5 МГц. Толщину интимо-медиального слоя общих сонных артерий определяли с использованием аппаратно-программного комплекса MAth (IMT, Франция). Принадлежность к 1-й квартили распределения следует расценивать как низкую предрасположенность к атеросклерозу, ко 2-3 квартили распределения – как возрастную норму, к 4-й квартили – как высокую предрасположенность к атеросклерозу. мужчины женщины ТИМС, мм возрастная группа

Разработан метод количественного определения степени гетероплазмии митохондриального генома

Пример: детекция мутации G A а) теоретическая высота пиков нуклеотидов при гомоплазмии при отсутствии замены G A в 100% митохондриальных хромосом б) теоретическая высота пиков нуклеотидов при гомоплазмии при наличии замены G A в 100% митохондриальных хромосом в) практическая пирограмма исследуемого образца ДНК (22% хромосом имеют мутантный аллель, то есть степень гетероплазмии составляет 22%)

Идентифицированы митохондриальные мутации, ассоциированные с атеросклеротическими поражениями артерий человека и клиническими проявлениями атеросклероза ГенМутацияКоэффициент корреляции ТИМСАСБИБСИМ MT-RNR1insG-0,168 *-0,127NS MT-TL1C T0,363 **0,333 **0,153 *0,147 * MT-ND1T C0,152 *0,330 **0,168 *0,110 MT-TL2G A0,308 **0,372 **0,153 *0,146 * MT-ND5G A-0,357 **-0,498 **-0,197 *-0,130 MT-ND6G ANS -0,162 *NS MT-CYBG A (1)NS-0,164 *NS-0,130 MT-CYBG A (2)0,317 **0,221 **NS ТИМС – средняя толщина интимо-медиального слоя общих сонных артерий; АСБ – наличие и степень выраженности атеросклеротических бляшек в бассейне сонных артерий; ИБС – наличие ишемической болезни сердца; ИМ – перенесенный инфаркт миокарда.

атеросклеротическая нагрузка суммарная мутационная нагрузка Коэффициент корреляции между атеросклеротической и мутационной нагрузкой составляет 0,120 при P

Выявлена связь суммарной мутационной нагрузки в лейкоцитах крови человека со степенью выраженности каротидного атеросклероза

Чувствительность и специфичность генетических маркеров в отношении бессимптомного атеросклероза Положительным реальным состоянием является наличие атеросклеротической бляшки. Площадь под ROC-кривой 0,975 (95% ДИ 0,954-0,966, p

Разработан метод комплексной оценки риска ишемической болезни сердца на основе анализа генотипа и фенотипа Показатель Разработанный метод Фрамингемский алгоритм Преимущество разработанного метода Чувствительность87,6%66,7%в 1,3 раза Специфичность86,7%60,0%в 1,5 раз Точность86,9%61,9%в 1,4 раза Разрешающая способность 72,4%40,0%в 1,8 раз

AUC=0.77 AUC=0.82 Алгоритм оценки риска ИБС на основе анализа фенотипических маркеров ФакторФрамингемМосква Возраст ++ САД ++ ДАД -+ Курение ++ ГЛЖ ++ Гипертония -+ Диабет ++ Холестерин +- Холестерин ЛНП -+ Холестерин ЛВП ++ ТИМС -+ Бляшка -+ Московское исследование,

Разработка средств для массовой профилактики атеросклероза

Принципы разработки патогенетическое действие – антиатерогенное – антицитокиновое биологически активные компоненты природного происхождения

Внутриклеточный холестерин и атерогенность сыворотки крови пенистые клетки из атеросклеротической бляшки клетки из непораженной артериальной интимы окраска Oil Red O до после

изменение атерогенности, квартили динамика ТИМС, мкм/год * * с коррекцией по возрасту, САД, ДАД, холестерину ЛНП, холестерину ЛВП p=0.029 для тенденции Изменение атерогенных свойств сыворотки крови и течение каротидного атеросклероза СНИЖЕНИЕатерогенностьПОВЫШЕНИЕ

Снижение атерогенности и регрессия атеросклероза * * * плацебо Алликор * * * * плацебо Алликор динамика атерогенности динамика толщины ИМС

Тест-система Ex Vivo изучение свойств сыворотки в условиях клеточной культуры 6ч6ч4ч4ч0ч0ч2ч2ч получение сыворотки крови однократная доза исследуемого препарата

Заключение Разработан способ оценки риска атеросклероза, сердечно- сосудистых заболеваний и их осложнений, основанный на количественном анализе точечных мутаций митохондриального генома и их сочетаний (гаплотипов) Разработан способ оценки риска атеросклероза, сердечно- сосудистых заболеваний и их осложнений, основанный на количественном ультразвуковом измерении толщины интимо- медиального слоя общих сонных артерий Разработана математическая модель комплексной оценки риска сердечно-сосудистых заболеваний с использованием генетических и фенотипических маркеров Разработаны средства для профилактики атеросклероза, обладающие патогенетическим действием и пригодные для массового применения