Теоретические основы полимеразной цепной реакции.

Презентация:



Advertisements
Похожие презентации
ПОЛИМЕРАЗНАЯ ЦЕПНАЯ РЕАКЦИЯ
Advertisements

МИНИСТЕРСТВО ОБРАЗОВАНИЯ НАУКИ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ Федеральное государственное образовательное учреждение высшего образования «БРЯНСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ.
Полимеразная цепная реакция в реальном времени. Изобретение ПЦР Полимеразную цепную реакцию (ПЦР, PCR) изобрел в 1983 году американский ученый Кэри Мюллис.
Полимеразная цепная реакция Генерозова Анна, 9 класс «А»
Prezentacii.com. это эффективный способ получения in vitro большого числа копий специфических нуклеотидных последовательностей.
Некоторые методы молекулярной биологии Денис Ребриков.
Полимеразная цепная реакция Метод, который перевернул современную молекулярную биологию.
Информация о компании ЗАО «НПФ ДНК-Технология» Основана в 1993 году Специализация: производство оборудования и реактивов для ПЦР, лабораторная диагностика.
Некоторые методы молекулярной биологии Дей Е.В.. Полимеразная цепная реакция Принцип ПЦР сформулировал Гобинд Корана в 1971 В 1983 Кэри Мюллису удалось.
Синтез ДНК. Полимеразная цепная реакция. ЛЕКЦИЯ 5.
РУДН. Кафедра биологии и общей генетики Лекция РУДН. Кафедра биологии и общей генетики Гигани Ольга Олеговна Лекция Синтез ДНК. Нарушения в структуре ДНК.
ПЦР – метод амплификации, т.е. получения большого числа копий нужного гена или его фрагмента в условиях in vitro. Реакционная смесь для получения нужной.
ЭЛЕКТРОФОРЕЗ ФРАГМЕНТОВ ДНК. Мост из фильтровальной бумаги Агарозный гель Лунки для образцов ДНК Электрод Буферный раствор Направление движения ДНК Источник.
Молекулярно-генетические методы диагностики. Полимеразную цепную реакцию (ПЦР, PCR) изобрел в 1983 году американский ученый Кэри Мюллис (Kary Mullis).
Любое число можно представит в развернутом виде: =5*100+6*10+3*1= =5* * *10 0 Или: =7* * *10.
Методы молекулярной диагностики. Использование молекулярных методов привело к увеличению специфичности, чувствительности диагностики инфекционной и неинфекционной.
Зачем зоологам молекулярно- генетические методы? Алексей Болдырев м.н.с. Институт физиологии им. А.А. Богомольца.
Wet Lab Смирнов Арсений Пензенцева Евгения. ДНК (4 нуклеотида: А, Т, G, C) 3.
Опыт применения метода ПЦР в диагностике менингитов различной этиологии Областная детская инфекционная клиническая больница г.Харьков Кухарь Д.И. к.мед.н.
СРС Тема: Молекулярно-биологические методы: гибридизация НК, ПЦР, секвенирование ДНК. Прикладная иммунология. Выполнила:Кыстаубаева Ж.А. 219 группа ОМФ.
Транксрипт:

Теоретические основы полимеразной цепной реакции

Механизм ПЦР основан на явлении обратимости тепловой денатурации ДНК

нагревание

нагревание

При охлаждении раствора денатурированной ДНК происходит её ренатурация - восстановление двухцепочечной структуры

охлаждение

Основные термины и понятия: 1. Праймер 2. Отжиг праймера (annealing) 3. Термостабильная ДНК-полимераза 4. Амплификация ДНК 5. Ампликон

ПЦР-цикл состоит из трёх шагов

95 C Шаг 1: денатурация ДНК

Шаг 1: денатурация ДНК

95 C Шаг 1: денатурация ДНК

40-50 C Шаг 2: отжиг праймеров

72 C Шаг 3: элонгация цепей

Шаг 3: элонгация цепей

72 C Шаг 3: элонгация цепей

72 C Шаг 3: элонгация цепей

72 C Шаг 3: элонгация цепей

72 C Шаг 3: элонгация цепей

72 C Шаг 3: элонгация цепей

72 C Шаг 3: элонгация цепей

72 C Шаг 3: элонгация цепей

72 C Шаг 3: элонгация цепей

72 C Шаг 3: элонгация цепей

72 C Шаг 3: элонгация цепей

72 C Шаг 3: элонгация цепей

В результате одного цикла число цепей удвоилось

В следующем цикле новосинтезированные цепи являются матрицами для синтеза новых цепей

95 C

40-50 C

72 C

Число копий вновь удвоилось

Число ПЦР-продуктов нарастает экспоненциально 1

2

4

8

16

Число ПЦР-продуктов нарастает экспоненциально 32

Число ПЦР-продуктов нарастает экспоненциально 64

Число ПЦР-продуктов нарастает экспоненциально 128

Число ПЦР-продуктов нарастает экспоненциально 256

Число ПЦР-продуктов нарастает экспоненциально 512

Число ПЦР-продуктов нарастает экспоненциально 1024

Число ПЦР-продуктов нарастает экспоненциально 2048

В результате 30 циклов получается около 2 30 копий или

Состав ПЦР-смеси: 1. ДНК-проба

Состав ПЦР-смеси: 1. ДНК-проба 2. Праймеры

Состав ПЦР-смеси: 1. ДНК-проба 2. Праймеры 3. Нуклеозид-3-фосфаты

Состав ПЦР-смеси: 1. ДНК-проба 2. Праймеры 4. Термостабильная ДНК-полимераза 3. Нуклеозид-3-фосфаты

Состав ПЦР-смеси: 1. ДНК-проба 2. Праймеры 4. Термостабильная ДНК-полимераза 5. Буфер для ПЦР 3. Нуклеозид-3-фосфаты

Состав ПЦР-смеси: 1. ДНК-проба 2. Праймеры 4. Термостабильная ДНК-полимераза 5. Буфер для ПЦР 3. Нуклеозид-3-фосфаты 6. Ионы Mg 2+

Определение результатов ПЦР

+ После электрофореза поместим гель на источник УФ-света

ампликоны

Kary B. Mullis

В 1993 г. за изобретение ПЦР Кэри Мюллису присуждена Нобелевская премия в области химии «за изобретение метода полимеразной цепной реакции»

Кэри Б. Мюллис НЕОБЫЧАЙНАЯ ИСТОРИЯ О ТОМ, КАК РОДИЛАСЬ ПОЛИМЕРАЗНАЯ ЦЕПНАЯ РЕАКЦИЯ В мире науки (Scientific American) Июнь N г. или в Интернет