МИНИСТЕРСТВО ОБРАЗОВАНИЯ НАУКИ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ Федеральное государственное образовательное учреждение высшего образования «БРЯНСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ. - презентация

1 МИНИСТЕРСТВО ОБРАЗОВАНИЯ НАУКИ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ Федеральное государственное образовательное учреждение высшего образования «БРЯНСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ УНИВЕРСИТЕТ ИМЕНИ АКАДЕМИКА И.Г. ПЕТРОВСКОГО» ЕСТЕСТВЕННО-НАУЧНЫЙ ИНСТИТУТ ЕСТЕСТВЕННО-ГЕОГРАФИЧЕСКОГО ФАКУЛЬТЕТА КАФЕДРА ХИМИИ Курсовая работа: ВЛИЯНИЕ КОНЦЕНТРАЦИИ ИОНОВ МАГНИЯ НА ПРОВЕДЕНИЕ ISSR-PCR С IS3 ПРАЙМЕРОМ Направление подготовки Химия Профиль подготовки Аналитическая химия Выполнила: студентка 1 курса 5 группы очной формы обучения Симоненко Е.Н. Научный руководитель: Заякин В.В. проф., д.б.н. Брянск 2017

2 Цель: изучить влияние разных концентраций MgCl 2 на проведение ISSR-ПЦР. Задачи: подготовить литературный обзор по теме курсовой работы; научиться выделять ДНК и проводить электрофорез в агарозном геле; освоить методику проведения ISSR-ПЦР; оценить влияние разных концентраций ионов магния на ход ISSR-ПЦР.

3 Полимеразная цепная реакция Каждый цикл ПЦР состоит из следующих этапов: Денатурация Отжиг Элонгация

4 Inter-microsatellite-PCR ISSR-PCR - это амплификация участков ДНК, фланкируемых микро сателлитами. В результате ISSR-ПЦР амплифицируется большое число фрагментов, представленных на электрофореграмме дискретными полосами.

5 Компоненты ПЦР Вода деионизированная 10X полимеразный буфер MgCl 2 dNTP Mix ISSR-праймер Taq ДНК-полимеразу Dream Геномная ДНК

6 Используемые концентрации ионов магния п/п концентрация MgCl 2 1 эксперимент 125 ммоль 25 ммоль 30,5 ммоль 40,05 ммоль п/п концентрация MgCl 2 2 эксперимент 10,25 ммоль 20,5 ммоль 35 ммоль 410 ммоль 520 ммоль

7 Результаты М - ДНК-маркер 100 bp Kb (11 фрагментов от 100 до 1500 bp); 1 – концентрация ионов Mg2+ 25 ммоль; 2 - концентрация ионов Mg2+ 5 ммоль; 3 - концентрация ионов Mg2+ 0,5 ммоль; 4 - концентрация ионов Mg2+ 0,05 ммоль; 5 - концентрация ионов Mg2+ 0,25 ммоль; 6 - концентрация ионов Mg2+ 0,5 ммоль; 7 - концентрация ионов Mg2+ 5 ммоль; 8 - концентрация ионов Mg2+ 10 ммоль; 9 - концентрация ионов Mg2+ 20 ммоль.

8 Выводы 1. Собрана и проанализирована литература по механизмам, условиям проведения ПЦР и роли ионов магния в этой реакции. 2. Освоены методики выделения ДНК CTAB методом, горизонтального электрофореза ДНК в агарозном геле и методика проведения ISSR- PCR. 3.Установлено, что при проведении ПЦР с Taq ДНК полимеразой и праймером IS3 оптимальная концентрация ионов магния составляет 5 мМ.

9 Спасибо за внимание!