Ознакомление с методами сохранения спермы при разных температурных режимах
План занятий: 1. Преимущества при разбавление спермы 2. Хранение спермы при различных температурах
При правильном применении разбавителей спермы создаются следующие преимущества: 1) получается больший объем спермы, что имеет важное практическое значение для интенсивного использования ценных производителей; 2) в сперме, смешанной с некоторыми разбавителями, спермии переходят из активного в анабиотическое состояние; 3) удлиняется срок переживаемости спермиев вне организма вследстствие замены секретов придаточных половых желез искусственной средой и ослабления концентрации в сперме токсическихвеществ.
Разбавитель для краткосрочного хранения спермы РеактивыДозы для спермы быкабар ана жере бца хряк а петуха и индюка гуса ка Вода дистиллированная (мл)... Глюкоза медицинская (г)..... Фруктоза (г) Натрий лимоннокислый (г).... Натрий глутаминовокислый (г).. Натрий двууглекислый (г).... Аммоний сернокислый (г).... Трилон Б (хелатон-3) (г)..... Желток куриного яйца (мл) ,8 2? ~ ,38 0,05 0,18 0,26 3 4** 100 1,8* 1,8 2? ,31* 1,31 0,57 1,67
Все компоненты для приготовления разбавителей должны быть химически чистыми, проверенными на токсичность и соответствовать ГОСТу, указанному в инструкции по искусственному осеменению. Компоненты хранят в сухом темном месте в плотно закрытых банках. Биологический контроль является обязательным для новой серии каждого препарата, особенно антибиотиков, добавляемых в разбавитель, так как некоторые из них могут оказаться губительными для спермиев. Для приготовления разбавителей необходимо применять только дистиллированную воду. В ней нет хлористых соединений, разрушающих оболочку спермиев
В сперме быка и барана при хранении начинают образовываться молочная кислота и другие продукты обмена. Для их нейтрализации, задержки набухания коллоидов цитоплазмы, оболочки спермиев, уменьшения их проницаемости вводят в состав разбавителей лимонно кислый натрий (цитрат), являющийся естественным буфером сперму - (его рН 7,88,0). Поскольку в сыворотке спермы жеребца и хряка содержится много солей, то в разбавитель для спермы таких животных лимоннокислый натрий не вводят или добавляют в очень незначительном количестве.
Одним из первых факторов внешней среды, действующих на свежеполученную сперму, является температура. При ее понижении (особенно ниже плюс 18°) спермин подвергаются температурному шоку и гибнут. Для ослабления шока в разбавитель вводят желток куриного яйца, содержащий около 7% неокисленного лецитина. Он одновременно является питательным веществом, предохраняющим расходование липидов спермиев. Яйца должны быть обязательно свежими, с ярко окрашенным желтком, от здоровых кур, получающих полноценные корма и достаточное движение
В разбавитель добавляют пенициллин, стрептомицин и белый стрептоцид или смесь из перечисленных препаратов, выпускаемый под названием «Спермосан-3», в дозах, рекомендуемых «Ветеринарными правилами при воспроизводстве сельскохозяйственных животных».
Ни антибиотики, ни сульфаниламидные препараты не прекращают размножения микроорганизмов, обусловливающих глубокие морфологические изменения спермиев. Некоторые авторы рекомендуют вводить в разбавители для спермы хряков быков окситоцин, карбохолин и другие препараты для усиления моторики матке и повышения процента оплодотворяемости самок.
Подготовленный разбавитель подогревают на водяной бане до 35°. При более высокой температуре желток в разбавителе свернуться. При низкой температуре спермин погибнут от температурного шока, так как не успеют проявиться защитные свойства, наступающие через несколько минут после разбавления спермы. Поэтому сперма и разбавитель должны иметь одинаковую температуру. Перед разбавлением необходимо оценить качество спермы и разбавителя.
Для оценки разбавителя на чистое предметное стекло смешивают каплю проверенной на активность спермы и к ней добавляет 23 капли разбавителя, пробу накрывают покровным стеклом и исследуют под микроскопом. Понижение активности спермиев - свидетельство непригодности, а отсутствие заметных изменений в сперме служит основанием для использования разбавителя.
Минимальные показатели спермы, допускаемой к разбавлению и краткосрочному хранению, и степени ее разбавления Концентрация спермиев (млрд/мл) Активность спермиев (баллы) Степень разбавления минималь ная максимал ьная Бык 0,581:91:31 Баран 2,081:11:3 Хряк 0,1571:11:5 Жеребец 0,1551:11:3 Петух 2,071:11:2 Гусак 0,471:11:2
При осеменении свиней фракционным методом А. В. Квасницкий предложил ряд разбавителей, назначение которых заполнить полости рогов матки, поэтому их называют заполнителями: 1) глюкозо-солевой (30 г глюкозы и 4,5 г NaCl на 1 л дистиллированной воды); 2) солевой (9 г NaCJ на 1 л дистиллированной воды); 3) молочный (свежий обрат коровьего молока). Эти заполнители оказывают на слизистую оболочку матки более благоприятное действие, чем желточно- цитратные и другие разбавители.
Хранение спермы. При хранении неразбавленной и разбав ленной спермы вне организма происходят изменения плазмы и нарушение акросомного аппарата спермиев.
Изучение физиологических свойств спермиев показало, что сохранение спермы вне организма животного и эффективное использование ее возможно при соблюдении следующих двух условий. 1. Сперма может сохраняться при неактивном состоянии спермиев. Чем меньше активность спермиев, тем более длительно можно xранить сперму. Уменьшать активность спермиев удается: а) понижением температуры; б) созданием условий, угнетающих обмен веществ спермиев (кислая среда, добавление хелатона); в) разведением секретов придаточных половых желез растворами, не возбуждающие спермиев и не разрушающими их липопротеидного покрова. 2. Предотвращение интоксикации спермиев бактериотоксинами и бактериолизинами. Для этого необходимо получать сперму чистой и затем смешивать ее с разбавителями.
Кратковременное хранение спермы при температуре тающего льда (2 4°) является распространенным методом хранения барана и жеребца. Температура, близкая к 0°, значит переживаемость спермиев и замедляет обменные процессы; гемоголиз спермиев быка и барана тормозятся в 2025 раз посравнению с интенсивностью этих процессов при температуре тела животных.
Хранение спермы в жидком азоте позволяет значительно улучшить породные качества разводимого скота, так как в тысячи раз увеличивается количество осеменяемых самок спермой ценных производителей. Осеменение коров такой спермой возможно на протяжении ряде лет.
Оценка спермы на пунктах искусственного осеменения. На пунктах искусственного осеменения оценивают только активность движение спермиев. Для проверки качества спермы, сохраняемой при температуре 24°, открывают термос, берут из флакона каплю спермы, кладут на предметное стекло и исследуют под микроскопом подвижность спермиев. Пробу надо брать быстро, чтобы не допускать нагревание спермы.
На предметное стекло наносят каплю теплого (38°) 2,8З % раствора лимоннокислого натрия или 1%-ного раствора бикарбоната натрия, добавляют к ней каплю оттаянной спермы, покрывают покровным стеклом и определяют активность спермиев по общим правилам. Для искусственного осеменения используют оттаянную сперму с активностью не менее 4 баллов. Согретую сперму вновь замораживать нельзя.