ИНФЕКЦИИ МОЧЕВОЙ СИСТЕМЫ СОБАК Материалы XIX Международного ветеринарного конгресса, Москва, 16ю г. БАКТЕРИАЛЬНЫЕ к.в.н. Шуляк Б.Ф.

У здоровых животных мочевая система (МС), за исключением дистального отдела уретры, свободна от бактериальных агентов. Бактерии попадают в МС через наружные половые органы, реже гематогенным путем (лептоспиры, сальмонеллы и др.). Инцидентность инфекций у собак составляет % ? МОЧЕВАЯ СИСТЕМА И БАКТЕРИИ

Клинические последствия бактериальных инфекций МС зависят от ряда факторов: патогенности возбудителя, локализации инфекции, состояния иммунной системы животного, наличия у него болезней другой этиологии, своевременности и рациональности лечения, рациона и т.д. Комплексное влияние этих факторов определяет многообразие форм течения инфекций МС (от бессимптомной бактериурии до острого пиелонефрита и септицемии). КЛИНИЧЕСКИЕ ПРОЯВЛЕНИЯ ИНФЕКЦИЙ МС

ТИПЫ ИНФЕКЦИЙ МОЧЕВОЙ СИСТЕМЫ Абортивная = элиминация бактерий Острая = заболевание летальный исход Хроническая = рецидивы заболевания Латентная

Данные анамнеза, результаты клинического обследования и общего анализа мочи позволяют лишь предполагать наличие у животного инфекции МС. Окончательный диагноз можно поставить только после: 1. изоляции возбудителя 2. определения уропатогенности изолята 3. оценки степени бактериурии ДИАГНОСТИКА ИНФЕКЦИЙ МОЧЕВОЙ СИСТЕМЫ

Для получения достоверных результатов необходимо стандартизировать все этапы бактериологического анализа мочи: *Преаналитический **Аналитический ***Учет и анализ результатов

ПРЕАНАЛИТИЧЕСКИЙ ЭТАП Сбор проб мочи ± Хранение проб мочи Доставка в лабораторию

СБОР ПРОБ МОЧИ При естественном мочеиспускании (высок риск контаминации проб) Через катетер (высок риск травмирования уретры и мочевого пузыря, а механической диссеминации патогенных бактерий) Пункцией мочевого пузыря (не позволяет судить о наличие инфекций в уретре)

Взятие проб мочи с помощью катетера Катетеризация кобеля Катетеризация суки

Правильно Неправильно Цистоцентез мочеточник уретра «Слепая» пункция МП у кобеля

Пробы мочи следует собирать в чистые стерильные, надежно закрывающиеся контейнеры. Использование контейнеров специального назначения облегчает отбор из них проб для анализов без риска случайной контаминации посторонней микрофлорой и попадания мочи (потенциально инфекционный материал!) на объекты внешней среды, одежду и руки специалистов. Контейнеры для проб мочи

Моча прекрасная питательная среда для бактерий, титр которых в ней прогрессирующе возрастает с течением времени. Оптимально, когда пробу мочи высевают на питательную среду сразу же после взятия. Максимальная продолжительность этого срока при нахождении мочи в условиях комнатной температуры 2 ч. В холодильнике ее можно хранить не более 12 ч. Если использовать в качестве консерванта борную кислоту, то срок хранения проб мочи в холодильнике можно увеличить до 24 ч. Борная кислота снижает жизнеспособность некоторых бактерий, в т.ч. псевдомонад. Хранение и доставка проб мочи в лабораторию

ПОСЕВ НА ПИТАТЕЛЬНЫЕ СРЕДЫ ИДЕНТИФИКАЦИЯ ИЗОЛЯТОВ ОПРЕДЕЛЕНИЕ ТЯЖЕСТИ БАКТЕРИУРИИ ИНТЕРПРЕТАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ БАК.АНАЛИЗА ХИМИЧЕСКИЕ ЭКСПРЕСС- МЕТОДЫ (±) ОПРЕДЕЛЕНИЕ ЧУВСТВ-ТИ К АНТИБИОТИКАМ НЕПОСРЕДСТВЕННАЯ ДЕТЕКЦИЯ БАКТЕРИЙ, ЛЕЙКОЦИТОВ И МВР (визуальные и автоматические методы) 13 АНАЛИТИЧЕСКИЙ ЭТАП

БАКТЕРИОСКОПИЯ 1. Нативных проб 2. Седимента 3. Концентрата (получ.фильтрацией) ХИМ. МЕТОДЫ 1. Нитритный 2. Аденозин триптофазный 3. Каталазный 4. Глюкозо- оксидазный и др. 5. Выявление метаболитов бактерий. 6. Обнаружение маркеров воспалительной реакции АВТОМАТИЗИРОВАННЫЕ МЕТОДЫ Проточная цитометрия и др. методы детекции частиц (в т.ч. бактерий) 14 ОБНАРУЖЕНИЕ БАКТЕРИЙ В МОЧЕ

15 Успех бактериологического анализа мочи в значительной степени зависит от качества и спектра используемых в лаборатории питательных сред. УНИВЕРСАЛЬНЫЕ СЕЛЕКТИВНЫЕ ХРОМОГЕННЫЕ ПОЛИФАЗНЫЕ ПИТАТЕЛЬНЫЕ СРЕДЫ

16 МПА Кровяной агар CLED Универсальные среды (кровяной агар, CLED и др.)

17 Колумбийский CNA агар с кровью без крови Агар МакКонкиМ Селективные среды (МакКонки, Колумбийский CNA

18 Хромогенные среды (Uriselect ¾ и др.) БактерииКолонииХарактеристики Диаметр, ммЦветβ-глюкуронидазаβ-глюкозидазаИндолТриптофан-дезаминаза E.coli2-3Фиолетовый++ P.mirabilis2Оранжево- коричневый + E.faecalis0,5-1Светло-голубой+ P.stuartii2Оранж-коричн.+± S.aureus1-2Белый

Алгоритм идентификации бактерий на среде Uriselect 3

20 Полифазные среды Среда Энтеро ПЛЮС (Новамед) (для дифференциации энтеробактерий)

Культуральные свойства Морфология бактерий Тинкториальные свойства Биохимические свойства ИДЕНТИФИКАЦИЯ ИЗОЛЯТОВ

25 Дифференциация энтеробактерий

БИОХИМИЧЕСКИЕ ТЕСТ-СИСТЕМЫ ДЛЯ УСКОРЕННОЙ ИДЕНТИФИКАЦИИ УРОПАТОГЕНОВ Результаты учитывают визуально (цвету содержимого лунок) или с помощью компьютерных программ ( LaChema)

Первичные (самостоятельно вызывают поражения органов мочевой системы): E. coli, Staph. intermedius, лептоспиры. Вторичные (проявляют патогенные свойства реже - преимущественно на фоне других инфекций, при ослаблении иммунитета, после инвазивных диагностических и лечебных процедур): стафилококки, стрептококки, протеи, энтеробактеры, энтерококки. Сомнительные: псевдомонады, клебсиеллы, коринебактерии КЛАССИФИКАЦИЯ УРОПАТОГЕНОВ СОБАК Большинство остальных бактерий, обнаруживаемых в моче следует считать компонентами нормальной микрофлоры или контаминантами, а не уропатогенами.

КОЛИЧЕСТВЕННЫЙ БАК. АНАЛИЗ МОЧИ Критерии Е.Х. Касса 10 3 = отсутствии воспалительного процесса, контаминация мочи 10 4 = сомнительный результат (исследование следует повторить) 10 5 = на наличие воспалительного процесса 28 Если в посевах обнаруживают 3 или большее количества микроорганизмов, то считают, что исследованная проба контаминирована банальной микрофлорой, и проводят исследование мочи повторно. Изоляция из мочи даже первичных уропатогенов не может служить основанием для постановки окончательного диагноза без подтверждений того, что это не случайная контаминация. Основным критерием этого остается установление диагностического титра уропатогенов в моче (степени бактериурии).

РЕКОМЕНДАЦИИ ЕВРОПЕЙСКОЙ КОНФЕДЕРАЦИИ ЛАБОРАТОРНОЙ МЕДИЦИНЫ (ECLM) Способ взятия мочи Наличие симптомов БМП Обнаруженные уропатогенов Диагностически значимый титр (КОЕ/мл) типчисло При мочеиспускании (средняя порция) + Первичные Вторичные Сомнительные ( ) ( ) 10 5 Любые уропатогены Надлобковая пункция± При цистоскопии или 1-кр. катетеризации ± Из введенного на длительное время катетера Ветеринарным специалистам еще предстоит определить диагностические уровни бактериурии при инфекционных процессах в мочевой системе собак

ПОЛУКОЛИЧЕСТВЕННЫЕ Капельный Погружной Дипстрика/Дипслайда ТОЧНЫЕ КОЛИЧЕСТВЕННЫЕ Серийных разведений Штриховой несекторный Четырехсекторный МЕТОДЫ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ТИТРА БАКТЕРИЙ В МОЧЕ

Штриховой несекторный в ЧП V инокулума, мкл N колоний / чашку Петри Титр (КОЕ/мл)

4-секторный в ЧП Количество колоний в секторах Титр (КОЕ/мл) IIIIIIIV 1-6< х х х Нельзя сосчитать х х 10 6 Нельзя сосчитать Един. колонии 10 8

Капельный Lorrier J.C., Valkenburg H.A. Quantitative Urine Culture by Surface Drop Method. Applied Microbiol, 1969, 5763

Погружной (технология дипслайда) Технология дипслайда начинает «буксовать» при высоком титре бактерий в моче (10 7 и выше) = газонный рост не позволяет подсчитать число колоний

Штриховая технология дипстрика N колоний 50 КОЕ/мл

Дипстрик и Диаслайд – альтернатива традиционному методу посева проб мочи на чашки Петри, признаваемому «золотым стандартом» бактериологического анализа мочи. Позволяют совместить преаналитический и аналитический этапы, высевать мочу на месте ее сбора сразу на несколько сред, транспортировать и инкубировать посевы в закрытом контейнере, одновременно идентифицировать уропатогены и достоверно оценивать тяжесть бактериурии.

ИНТЕРПРЕТАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ БАК. АНАЛИЗА МОЧИ Повторная изоляция того же вида, типа, варианта бактерий = наличие инфекционного процесса. Необходимо определять степень бактериурии при различных патологиях мочевой системы, чтобы дифференцировать инфекционный процесс в мочевых путях от контаминации мочи нормальной микрофлорой и сапрофитами. Ассоциации микроорганизмов чаще встречаются при хронических процессах и коррелируют с низкой степенью бактериурии. Изоляция 3 и большего числа бактерий свидетельствует о контаминации пробы. Изменение степени бактериурии в процессе заболевания или лечения = прогностический признак. Для окончательной трактовки результатов микробиологического исследования следует учитывать данные анамнеза, результаты клинического обследования пациента и другие лабораторные анализы. 39

ЭТАП III. ОПРЕДЕЛЕНИЕ ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТИ ИЗОЛЯТОВ К АНТИБИОТИКАМ Кульминацией бактериологического анализа должно быть определение чувствительности изолятов бактерий к антибиотикам. Для этого пользуются несколькими методами: Cерийных разведений Стандартных дисков Диффузионный (Е-тест) 40

Метод серийных разведений

Метод стандартных дисков Диско-диффузионный метод Окто=диск Диспенсор дисков

Градиентно-диффузионный метод

Интерпретация антибиотикограмм Категория чувствительности микроорганизма Характеристика чувствительности изолята к антибиотику Прогноз применения антибиотика в терапевтических целях Чувствительность Не обладает механизмами резистентности Лечение будет эффективным при использовании обычных доз антибиотика Умеренная чувствительность Субпопуляция, находящаяся между чувствительной и резистентной Лечение будет эффективным при использовании максимальных доз антибиотика или при локализации инфекции в местах аккумуляции антибиотика Резистентность Обладает механизмами резистентности Лечение антибиотиком будет неэффективным

СПЕЦИФИЧЕСКИЕ ИНФЕКЦИИ МОЧЕВОЙ СИСТЕМЫ Прихотливые» уропатогены Не все уропатогены удается выделить на рутинно применяемых с этой целью питательных средах. К их числу относятся лептоспиры и уреаплазмы. Для лабораторной диагностики таких инфекций применяют специальные питательные среды, иммунологические и другие специфические методы диагностики.

Лептоспироз Безжелтушный лептоспироз (штутгардская болезнь ) Серовары : Canis Grippotyphosa Kirschneri Pomona Australis Sejroe Желтушный лептоспироз (болезнь Вейля) Cеровар Ichterohaemorrhagiae Почки поражаются на острой стадии лептоспироза. По мере роста гуморального иммунного ответа этот орган остается одним из немногих мест, где «укрываются» лептоспиры, что ведет к переходу инфекции в латентную форму и регулярному выделению возбудителя с мочой

Схема диагностики лептоспироза Комплексная диагностика лептоспироза Эпизоотологические и анамнестические данные Результаты клинического исследования Обнаружение возбудителя Бактериоскопия Изоляция на Иммунол. тесты Молек. диагн. (кровь, моча, п/м) питат. средах (РИФ, ИФА, РЛА, РСК) (ПЦР, ДНК-зонд) Результатов серологических исследований Результатов биопробы на лаб. ж-х Изоляты лептоспир серотипируют в реакции агглютинации-лизиса

Питательные среды для лептоспир Для изоляции лептоспир применяют среды с 5-10% сыворотки крови кролика или барана (либо сывороточного альбумина) : жидкие (Ногуши-Веньона, Уленгута, Ферворта-Вольфа в модификации Тарасова и др.) = 5-10 дн., культуры бесцветные, опалесцирующие полужидкие (Флетчера и др.) = кольцо помутнения на глубине 1,5-2,0 см; с 1% агара заглубленные колонии с расплывчатыми контурами С 2% агара поверхностные колонии вариабельной прозрачности В качестве селективных факторов в среды добавляют: Фосфомицин + 5-флуорацил Мочевину Соли кобальта Антибиотики (неомицин, рифампицин, фурацилин, фурагин, налидиксовую кту, комбинации рифампицина, полимиксина В, бацитрацина и актидиона)

На фоне заболеваний, сопровождающихся снижением иммунитета и повреждениями мочевой системы другими факторами (химическими, уролитами, небактериальными паразитами), инфекции первичных и вторичных уропатогенов могут протекать тяжелее, и даже сомнительные уропатогены могут вызвать значимые поражения мочевыводящих путей. К числу наиболее опасных небактериальных паразитов, локализующихся в мочевой системе относятся нематоды D.renale и C.plica. Секундарные инфекции МС

Свайник-великан (D.renale) Свайник-великан в почке Яйца D.renale (овальные с крышечкой на полюсах

P EARSONEMA (C APILARIA ) PLICA

Широкий спектр уропатогенов, многообразие и неспецифический характер симптоматики, вызываемых ими болезней МС, а также возможность длительного бессимптомного течения этих бактериозов, диктует необходимость подходить творчески к их диагностике. Опыт и знания ветеринарного врача Ключ успеха на этом пути = + Эффективная лаб. диагностика БЛАГОДАРЮ ЗА ВНИМАНИЕ ! Ключ к успеху