ДИАГНОСТИКА ЗАБОЛЕВАНИЙ ЗАВИСИМОСТИ НА ОСНОВЕ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АНТИТЕЛ К НЕЙРОПЕПТИДАМ И БИОГЕННЫМ АМИНАМ Мягкова Марина Александровна Д.б.н., профессор Главный научный сотрудник Отдела экспериментальной биохимии и иммунологии Департамент здравоохранения города Москвы МОСКОВСКИЙ НАУЧНО-ПРАКТИЧЕСКИЙ ЦЕНТР НАРКОЛОГИИ

Болезни зависимости - нейроиммунопатологии, объединенные общими признаками и механизмом развития. Наркотическая, зависимость от ПАВ Зависимость от азартных игр Алкоголизм Пищевая зависимость … и другие виды

Патологическое влечение Синдром зависимости Абстинентный синдром Вегетативные, психические, соматические нарушения Клиническая динамика состояний зависимости

Концепция нейроэндокриноиммунных взаимодействий Нервная система Иммунная система гипоталамус передняя доля адено- гипофиз задняя доля гипофиз тимус периферические эндокринные железы Эндокринная система либертины, статины окситоцин,вазопрессин АКТГ, СТГ, СТ, ТТГ, ФСГ, ЛГ, гормон роста, пролактин гормоны регулярторные факторы регулярторные факторы

Участие нейротрансмитерных систем в развитии патологии синдрома зависимости: γ-аминомасляная кислота (ГАМК) 5-гидрокситриптамин (серотонин - СТ) дофамин (ДА) норадреналин (НА) β–эндорфин (β-Энд)

Подходы к диагностике состояний зависимости 1.Определение генетической предрасположенности: Ген алкоголдегидрогеназы ADH4: Ген холинергического мускаринового рецептора CHRM2 Ген молекулы клеточной адгезии NrCAM: Ген рецептора серотонина HTR2B 2. Оценка психоэмоционального состояния с помощью вкусового теста (по СТ и НА): Tom P. Heath, Jan K. Melichar, David J. Nutt, and Lucy F. Donaldson Human Taste Thresholds Are Modulated by Serotonin and Noradrenaline J. Neurosci., Dec 2006; 26: – Оценка состояния здоровья на основе определения показателей гуморального иммунитета.

Функции иммунной системы 1896 г. Мечников И.И.: Система фагоцитов предназначена не столько для борьбы с патогенными микроорганизмами, сколько для поддержания «состояния гармонии» или состояния здоровья в условиях постоянного давления Среды. Содержание антител в сыворотке крови: до 20 г Ig Содержание IgG: г Ежедневный ресинтез IgG: 10 г Антитела к чужеродным агентам: 70 % Естественные ауто-Ат: 30 % Антиидиотипические Ат: Ат к рецепторам

Естественные антитела – нормальный физиологический компонент организма Существуют в кровотоке доноров в норме без антигенной стимуляции Связываются с эндогенными биорегуляторами и участвуют в регуляции гомеостаза Являются низкоаффинными и полиспецифичными иммуноглобулинами Существуют в связанной форме в виде иммунных комплексов В их биосинтезе участвуют немутированные эмбриональные гены Выполняют регуляторную и транспортную функцию Первичная защита от инфекций Очищение от стареющих клеток Антигенная презентация Т- клеткам Противоопухолевый контроль Противовоспалительная активность Селекция иммунного репертуара и гомеостаз аутореактивности ОСНОВНЫЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ ОСНОВНЫЕ ФУНКЦИИ

Наши исследования показали: е-АТ существуют в норме в сыворотке крови человека е-АТ обладают низким аффинитетом (Ка 10 5 – 10 7 M -1 ) и полиспецифичны Свойства е-АТ коррелируют с клиническим диагнозом и течением заболевания Репертуары иммунореактивности и уровень е-АТ в сыворотке крови изменяются при патологии Свойства е-АТ могут быть использованы для ранней диагностики заболеваний созданы новые методы выявления е-АТ к эндогенным низкомолекулярным соединениям с различной структурой и физиологическими функциями; разработаны новые методы диагностики различных типов заболеваний

Исследуемый антиген Диапазон Ка, М -1 Группа больныхГруппа доноров β-эндорфин IgGIgMIgGIgM дерморфин серотонин гистамин дофамин Определение К а для антител, выделенных из сыворотки крови доноров и больных.

Схема синтеза коньюгата антигена с полимерной матрицей n Степень модификации 1100% 250% % Выбор оптимальных условий для твердофазного ИФА O=C-NHR H2NH2N Антиген (R) NO 2 O=C-O + NO 2 O=C-O

Схема твердофазного ИФА для определения антител к низкомолекулярным соединениям Регистрация ферментативной реакции Добавление вторичных антител для детекции иммунного комплекса + Сорбция Добавление образца Aг Aг Aг E Aг Aг Aг + E E E Aг Aг Aг E Aг Конъюгат антигена, иммобилизованный на твердой фазе Антитела, специфичные к антигену Вторичные антитела, меченные ферментом

Иммуноферментные тест-системы для определения естественных антител к низкомолекулярным эндогенным биорегуляторам КАТЕХОЛАМИНЫ Дофамин Норадреналин Адреналин БИОГЕННЫЕ АМИНЫ Серотонин Гистамин ОПИОИДНАЯ СИСТЕМА -эндорфины Энкефалины Дерморфин ФАКТОРЫ СИСТЕМЫ СВЕРТЫВАНИЯ КРОВИ Тромбин Антитромбин III 2 -макроглобулин ПЕПТИДЫ РЕНИН- АНГИОТЕНЗИНОВОЙ СИСТЕМЫ Брадикинин Ангиотензин II Вазопрессин

Объект исследования Сыворотки крови пациентов: Образцы предоставлены институтом реабилитации ННЦ наркологии Росздрава

Изменение уровня антител к биогенным аминам и опиоидным пептидам в норме и при заболеваниях зависимости Группа больных и доноров Значение ОD 450 в ИФА в среднем по группе* Серотонин -эндорфин Дофамин Больные наркоманией 1,153 ± 0,0270,941± 0,0161,052± 0,019 Больные алкоголизмом 0,439 ± 0,0230,259 ± 0,0050,329 ± 0,037 Доноры 0,670 ± 0,026 σ = 0,037 0,588 ± 0,021 σ = 0,029 0,721± 0,029 σ = 0,053 Результаты ИФА определения антител к серотонину, -эндорфину, дофамину в группе больных опийной наркоманией, алкоголизмом. * p < 0,01 (в сравнении с донорами)

Нейробиологическая основа развития игровой зависимости: G. Meyera, J. Schwertfegerb, M.S. Extonb, O.E. Janssenc, W. Knappd, M.A. Stadlera, M. Schedlowskie, T.H.C. KruЁgerf. Neuroendocrine response to casino gambling in problem gamblers. Psychoneuroendocrinology (2004) 29, 1272–1280 Результаты ИФА антител к эндогенным биорегуляторам у больных игроманией * p < 0,01 (в сравнении с донорами) 0,74 ± 0, ,06 ± 0,12 Гистамин 0,55 ± 0,07--40,82 ± 0,09 Серотонин 0,52 ± 0,04--40,80 ± 0,06 Дофамин 0,45 ± 0,06100,23 ± 0, эндорфин 0,55 ± 0, ,92 ± 0,12 Ангиотензин ll Кол - во чел. OD 450 Кол - во чел. ОD 450 Ниже нормыВыше нормы Доноры Больные игроманией Средние по группе значения ОD 450 в ИФА * Исследуемый антиген

Сопоставление результатов ИФА с уровнем реабилитационного потенциала (УРП) высокий УРП средний УРП Сравнительные результаты ИФА антител к β-эндорфину, дофамину, серотонину и определения уровня реабилитационного потенциала в группе больных игроманией НормаПониженНорма Группа ll (10 человек) ПовышенНормаПовышен Группа 1 (4человека) Уровень е- Ат к дофамину Уровень е - Ат к - эндорфину Уровень е - Ат к серотонину Диапазон УРП Больные игроманией (14 человек)

Уровень е-Ат к эндогенным биорегуляторам в динамике лечения наркомании, алкоголизма, игромании Обследованы больные: наркоманией – 16 чел. алкоголизмом – 10 чел день норма Уровень е-Ат к β-эндорфину

Уровень е-Ат к дофамину день норма день норма Уровень е-Ат к серотонину

Определение антител к биогенным аминам в сыворотке крови пациентов, употребляющих опийные препараты, может быть использовано для диагностики различных этапов наркотизации Тенденция изменения уровня антител к специфическому антигену у пациентов, употребляющих опиаты

Уровень антител к эндогенным биорегуляторам у здоровых доноров

Свойства е-АТ коррелируют с клиническим диагнозом и могут быть использованы для ранней диагностики заболеваний созданы новые иммуноферментные методы выявления е-АТ к эндогенным низкомолекулярным соединениям с различной структурой и физиологическими функциями Иммунохимическая диагностика заболеваний зависимости «Адимустат»: новый метод диагностики различных типов заболеваний зависимости Е-Ат к: β-эндорфину орфанину серотонину ангиотензину дофамину гистамину

Выявление антител к эндогенным биорегуляторам в сыворотке крови: Антиген β-эндорфин Серотонин дофамин гистамин орфанин ангиотензин Диагностические наборы АДИМУСТАТ

Оформлены все нормативные документы в МЗСР России Получены 2 российских патента Зарегистрирована торговая марка продукта Диагностические наборы АДИМУСТАТ

Оценка психоэмоционального состояния: консультация психолога Выявление социобиологических факторов риска Анкетирование Заключение врача-психолога Тестирование на приборе (полиграф) Генетическое тестирование Диагностика «Адимустат»

Сферы применения Метод «Адимустат» позволяет выявлять антитела к эндогенным биорегуляторам в сыворотке крови человека с помощью твердофазного иммуноферментного анализа (ИФА). Метод может быть использован в следующих направлениях: для оценки развития патологии зависимости(наркомании, алкоголизма, игромании) и определение тяжести заболевания для диагностики и раннего выявления патологических изменений в организме и оценке его адаптационных возможностей. «Адимустат» позволяет определить тяжесть патологической зависимости, а в случае с наркозависимостью оценить наркотический «стаж».

Обучение врачей-лаборантов методам Комплексной методики 7 – 10 ноября 2011 г. МНПЦ наркологии организует Научно-практический семинар по применению Метода диагностики «Дианарк» раннего выявления потребления наркотических веществ Теоретические лекции и практический курс обучения методам: ИХА наркотических веществ в слюне ИФА антител к наркотикам в крови ИФА антител к эндогенным биорегуляторам для оценки иммунного статуса и установления факторов риска развития болезни зависимости

ВЫВОДЫ 1.При развитии болезни зависимости происходит нарушение функционирования иммунной системы, проявляющиеся в изменении синтеза естественных иммуноглобулинов, связывающих нейромедиаторы опиоидной и моноаминовой природы. 2.Обнаружены новые диагностические маркеры, отражающие начальные стадии заболевания зависимости, а также эффективность проводимой терапии. Они могут использоваться в клинической практике, для ранней диагностики, контроля, профилактики и своевременной диспансеризации. 3.Предложен новый метод ранней диагностики развития тяжелых форм заболеваний зависимости, положенный в основу современной медицинской технологии выбора комплексного подхода лечения и реабилитации больных.

Программа Дианарк Спасибо за внимание!