1 Полифлуорофорные олигонуклеотидные зонды ИХБФМ, Лаборатория бионанотехнологий Анохина Виктория Руководители: Купрюшкин М.С., д.х.н. Пышный Д.В. - презентация

1 1 Полифлуорофорные олигонуклеотиды зонды ИХБФМ, Лаборатория бионанотехнологий Анохина Виктория Руководители: Купрюшкин М.С., д.х.н. Пышный Д.В.

2 2

3 3 Цели: Исследовать и охарактеризовать флюоресценцию модифицированных олигонуклеотидых зондов В зависимости от Сочетания флуорофоров Флюорофорного окружения в гибридизационном комплексе

4 4 Используемые ненуклеотидные вставки: Пирен(P): Акридин(A,Acr) Флуоресцеин(Flu ) :

5 5 Спектральные характеристики: Поглощение λmax,нм Флюоресценция λmax,нм Pyr Acr Flu492520

6 6 T6[Pyr][Acr][Flu] 3535 T6[Flu] (F) T6[Pyr][Flu ](PF) T6[Acr][Flu] (AF) T6[Pyr][Acr][Flu](PAF) T6[Pyr][Pyr](PP) T6[Pyr](P) T6[Acr][Pyr](AP) T6[Acr][Pyr][Flu](APF) T6[Pyr][Acr] (PA) T6[Acr] (A) T6[Acr][Acr] (AD) T[Acr]T5[Pyr] (A5P)

7 7 Общая схема получения сентонов ненуклеотидной вставки:

8 8 Получение акридинового производного:

9 9 Морфолиновое производное:

10 10 Аналитическая ВЭЖХ и выделение T6[Pyr][Acr][Flu]:

11 11

12 12 Электрофорез T T6 0,9135 1) T6[Flu] 0,916 2) T6[Pyr][Flu] 0,888 3) T6[Acr][Flu] 0,851 4) T6[Pyr][Acr][Flu] 0,842 5) T6[Pyr][Pyr] 0,859 6) T6[Pyr] 0,878 7) T6[Acr][Pyr] 0,770 8) T6[Acr][Pyr][Flu] 0,820

13 13 Спектры поглощения, полученные на Shimadzu

14 14 Спектры поглощения, полученные на Shimadzu

15 15 Зондовых матрицы: CAAAAAAC N AGCG GTGGCG A GCGCAAAAAACACCGA 0 AGCG GTGGCG A GCGCAAAAAACCACCGA 1 AGCG GTGGCG A (3 ) TTTTTT-X (5) A GCGCAAAAAACCCCACCGA 3

16 16 Термическая денатурация комплексов T6[Acr] и флуоресцентный анализ

17 17 Анализ флуоресценции λ max =520 N Избыток матриц: Измеряли флуоресценцию олигонуклеотидов с конц 10-6 М (с буфером)

18 18 Кривые флуоресцентного плавления для T6[Acr][Flu]

19 19 Анализ флуоресценции λ max =494

20 20 Кривые флуоресцентного плавления для T6[Acr][Pyr][Flu](8), T6[Pyr][Acr][Flu](4), T6[Pyr][Flu] (2)

21 21 Кривые плавления для T6[Pyr][Acr] (4), T6[Acr] (a), T6[Acr][Acr] (AD)

22 22 Общая схема получения сентонов ненуклеотидной вставки:

23 23 Получение акридинового производного:

24 24 Морфолиновое производное: