Некоторые методы молекулярной биологии Дей Е.В.

Полимеразная цепная реакция Принцип ПЦР сформулировал Гобинд Корана в 1971 В 1983 Кэри Мюллису удалось провести ПЦР В 1993 за изобретение ПЦР Кэри Мюллису вручена Нобелевская премия по химии

Инфекции крови (качественное и количественное определение) ИППП Эпидемические инфекции Исследование биоценозов и др. … Выявление патогенов

ПЦР позволяет определять вставки, делеции или однонуклеотидные замены в геномной ДНК Сейчас с помощью ПЦР диагностируют более 200 наследственных заболеваний, таких как: –Фенилкетонурия –Муковисцидоз –Миодистрофия Дюшенна/Беккера –Хорея Гентингтона –Гемофилия А, В –Болезнь Вильсона-Коновалова –и др. … Исследование генома

Исследование мРНК Относительная экспрессия в двух образцах Определение абсолютного кол-ва копий мРНК на клетку

контроль за использованием ГМ организмов (ГМО) контроль за наличием и процентным содержанием ГМ ингредиентов (ГМИ) в пище Определение вида и индивида ПЦР позволяет осуществлять: Мониторинг живых систем

Принцип ПЦР

Экспоненциальная амплификация

Программа амплификации Денатурация ДНК Отжиг праймеров Достройка праймеров Число циклов

Компоненты реакции вода буфер dNTP праймеры полимераза зонды, интеркаляторы масло

Оборудование для ПЦР

«Проявка» хода реакции Флуоресцентные красители и тушение флуоресценции 5-экзонуклеазная активность Taq-полимеразы

Гибридизационные методы Меченые праймеры Sunrise=AmplifluorScorpions Меченые зонды kissing probes= adjacent probes Complementary oligosTaqManBeacons

Разгорание пробы Принцип флуоресцентной детекции

Форма графиков накопления ДНК

начало быстрого падения Е Е почти константа

Результаты ПЦР на образцах с одинаковым количеством ДНК

Вычитание геномов Дей Е.В.

На Земле существует около 2,5 млн видеов живых существ. Все это разнообразие определяют различия в строении геномов отдельных видеов. Организм человека состоит из примерно 210 основных типов клеток, существенно отличающихся фенотипически. Это разнообразие связано с различными вариантами экспрессии одного и того-же генома.

Сравнение кДНК для поиска дифференциально экспрессируемых генов

Сравнение бактериальных геномов для поиска штамма- специфичных генов

Сравнение эукариотических геномов для поиска видео- и раса специфичных последовательностей ?

Для поиска дифференциально представленных молекул применяют методы вычитающей гибридизации

Принцип метода Амплификации после SSH подвержены только молекулы с разными адаптерами

Эффективность применения SSH

Упрощение с варьирующими параметрами Анализ на полиакриламидном геле Стратегия дифференциального дисплея Опухолевая трансформация А В Выделение РНК ~2 x10 4 видеов мРНК АВ

Использование УДД для поисков маркеров различных регионов тела планарии 3c3c 2 а