Бесприборные тест-системы для ветеринарии. Новые возможности и перспективы. Островский М.В. к.в.н. начальник отдела ветеринарии ЗАО «Биоград».

Бесприборные тест-системы ImmunoComb®

Страны, где уже используются эти тест-системы USA* Chile Brazil* France UK Spain Germany Italy Israel Korea India Thailand Philippine s Australia Austria + Central Europe Ecuador Scandinavian Countries Japan* Netherlands Biogal Galed Labs.- создана в 1986 году. Biogal Galed Labs. - создана в 1986 году. Является лидером в области ветеринарных диагностических наборов. Серологические и прямые оценки заболеваний в ветеринарии. Клиенты > 30 стран мира.

Миссия Biogal Galed Labs. : Улучшить здоровье животных, обеспечивая врачей превосходным и уникальным диагностическим инструментом

Что такое ImmunoComb® Что такое ImmunoComb® ? Тест ImmunoComb® является модифицированным иммуноферментным анализом, который может быть описан как точечный анализ с использование вторичных антител, меченых ферментом. Обеспечивает серологические результаты; определяет уровень антител в сыворотке или цельной крови для конкретного заболевания (например, вирусы, микоплазмы, риккетсии).

ImmunoComb ® ассортимент продукции Домашние животные Собаки Кошки Птица С/Х животные КРС МРС Дополнительно: CombScan Сделанные на заказ комплекты С/Х птица Индейки Куры Грызуны Крысы Мыши

ImmunoComb® Основная Продукция для Домашних Животных Хламидиоз (пситтакоз,орнитоз) птиц VacciCheck для собак (ICH,CPV,CDV) Эрлихиоз Лептоспироз Парвовирусная инфекция & Чума плотоядных (IgM & IgG) Бруцеллёз VacciCheck для кошек (FPLV, FHV, FCV) Короновирусная инфекция (FIP) Токсоплазмоз & Хламидиоз

Содержимое набора ImmunoComb ® Проявочная ванна* Гребень* Пинцет * Капиллярные трубки & поршень Comb шкала * Примечание: * во всех наборах. Количество варьируется в зависимости от комплекта. Стандартный набор – 12 тестов (Также Индивидуально) Комплект для лаборатории – 120 тестов

Процедура анализа на Процедура анализа на ImmunoComb®

Анализ результатов Точка контроля Гепатит Парвовирус Чума плотоядных Пример проявочного гребня на вирусный гепатит, парвовирусный энтерит и чуму плотоядных Цветная интенсивность пятен соответствует уровню антител.

3 способа прочитать результаты: (1)на глаз, (2)с помощью шкалы и гребня, (3)с помощью прибора CombScan Качественные результатыЧтение результатов на глаз Полуколичественные результаты Чтение результатов с помощью шкалы Comb Количественные результатыЧтение результатов с помощью Comb сканера Оценка результатов:

Чтение результатов на глаз: Сравните цветовой тон тестового пятна с положительной точкой контроля. 4 варианта интерпретации: Отрицательный Слабоположительный(подозрительный) Положительный Высокоположительный

1.Найдите тон пурпурно-серый на шкале, который наиболее близко подходит к точке Положительного Контроля (верхняя точка). 2.Двигая желтую линейку найдите отметку С+, появившуюся в окошке над цветом, который вы только что нашли. Чтение результатов CombScale:

3. Держите линейку в таком положении на протяжении всего чтения результатов. Этот шаг фактически калибрует С+ и S3, с которыми будут сравниваться точки теста. 4.Удерживая линейку, найдите тон на шкале, который будет наиболее подходить точке результата теста (нижние точки). Значение, которое появится в окошке сверху, является оценкой CombScale (S0- S6).

Чтение результатов CombScan: CombScan Программа, которая использует компьютер и офисный сканер. Гребень помещается в сканер. Программа переводит цветовые результаты на численные значения. Предоставляется бесплатно и это очень удобно при чтении большого количества анализов (в лабораториях).

Преимущества ImmunoComb ® Biogal И вот, тогда Пискун и Джерри поняли, что у г-на Скемперса действительно было конкурентное преимущество.

Серологическое тестирование имеет важное значение в оценке иммунного статуса Серологическое тестирование имеет важное значение в оценке иммунного статуса животного Например: Эрлихиоз и лептоспироз собак, инфекционный перитонит кошек (зоонозы). Диагностика клинических случаев заболеваний. Основное применение серологии - помощь в диагностировании клинических случаев заболеваний (Полуколичественный результат обеспечивает более полный и точный прогноз). Для всех тестов ImmunoComb: Для всех тестов ImmunoComb :

Серологическое тестирование является необходимым в оценке иммунного статуса собак/кошек Основные Преимущества Тестирования Титра : 1.Проверить Иммунный ответ, следующий за вакцинацией (котят/ щенков). 2.Определить, необходима ли вакцинация. 3.Определить, эффективна ли вакцинация. Применимо к: VacciCheck для кошек/собак

Преимущества ImmunoComb® Biogal Иммунофлюоресцент ный Анализ Классический ИФА ImmunoComb® Biogal Необходимо специальное оборудование в лаборатории. Требует аппарата для считывания результатов ИФА. 1. Простой 2. Портативный - идеален для полевых исследований. Необходимо небольшое количество образцов. Необходимо большое количество образцов. Нужно небольшое количество образцов. Долгий срок выполнения анализа. Более длинный срок выполнения анализа. Быстрый срок выполнения анализа. 1.Выполняется опытным специалистом в лаборатории. 2.Субъективный. Выполняется специалистом в лаборатории. 1.Удобный, лёгкий в освоении и использовании. 2.Выполняется непосредственно ветврачом.

Преимущества ImmunoComb® Biogal: Сравнение с одношаговыми (One-Stepтестами Сравнение с одношаговыми (One-Step ) тестами One-Step Test Kits Обеспечивает только качественный результат. Даёт ответ только да/нет. - Положительное пороговое значение для заболевания может давать «ложноотрицательный» результат, поскольку уровень антигена/антител может быть слишком низким, чтобы обнаружить заболевание на ранней стадии. Biogals ImmunoComb ® Обеспечивает количественный результат. Точный и надежный. – ImmunoComb ® определяет относительный уровень титра - диагностирует болезнь на гораздо более низком уровне титра, чем положительное пороговое значение. – ImmunoComb ® может идентифицировать подозрительные случаи заболевания, за которыми в дальнейшем может быть изменение титра. – Более точный в определении, не только если, но также и до какой степени животное заражено. Поверяет несколько антигенов в одном тесте

Какую же выгоду обеспечивает каждая особенность ImmunoComb® ? 1.Независимо от оснащённости в клинике лабораторией у вас сразу же появляется полная комплектация наборов (мини-лаборатория). 2.Для постановки анализа и его учёта не требуется приборное обеспечение. 3.Практичность (можно провести от 1 до 12 анализов, в зависимости от необходимости). 4.Быстрота получения результатов (от 20 до 60 минут). 5.Стабильность (срок хранения до 15 мес.). 6.Простота в использовании, возможность визуального учёта результатов (не требуется специальная квалификация персонала). 7.Надёжность (наличие дополнительного, внутреннего контроля). 8.Безопасность (в комплекте нет инфицированного материала). 9.Экономичность (экономится время и финансовые затраты на исследования). 10.Возможность исследования не только сыворотки или плазмы, но и цельной крови. 11.Возможность хранения и документирования тестов. 12. Чувствительность и специфичность (до 100% - в зависимости от заболевания). 13.Полностью удовлетворяет самым строгим требованиям международных стандартов.

ЭКСПРЕСС-ТЕСТЫ ИХА Вирус кошачьего иммунодефицита (FIV) Лейкемия кошек (FeLV) Парвовироз собак (CPV) Чума плотоядных (CDV) Дирофилярио́з (CDI) Лямблиоз (CFG) Лейшманиоз собак (CLI)

Что такое экспресс-тест ImmunoRun? иммунохроматографического анализа (ИХА)В основе теста лежит метод иммунохроматографического анализа (ИХА) в котором на коллоидное золото, распределенное в тест-полоске, ученые «пришили» особые вещества (моноклональные и поликлональные антитела или антигены), которые способны выявить тот или иной маркер - вестник болезни - по принципу «свой или чужой». классическая реакция "антиген-антителоВ основе иммунохроматографического анализа лежит классическая реакция "антиген-антитело" с образованием иммунных комплексов, которые можно визуально обнаружить на тест-полоске. Принцип действияПринцип действия состоит в том, что при погружении тест-полоски в биологическую жидкость (или другой жидкий образец), она начинает мигрировать вдоль полоски по принципу тонкослойной хроматографии. Вместе с ней движутся нанесенные на нижнюю часть тест-полоски меченые специфические антитела, которые аффинно (прочно и родственно) связываются с анализируемым веществом.

Преимущества экспресс-тестов ImmunoRun (Biogal) Быстрый: Быстрый: - Одношаговая процедура с точным результатам в течение 10 минут. Надежный: Надежный: - Высокая чувствительность, высокая специфичность, высокая точность. Легкий: Легкий: - Простой в использовании и легкий в прочтении результатов. Универсальный: Универсальный: - Экономичный и недорогой тест-набор подходящий для обычной или большой клиники / лаборатории - удобный размер упаковки из 5 или 50 тестов.

Подготовка проб при CDV Подготовка проб при CPV Внесение образца в лунку тест-кассеты набор для исследования на дорофеляриоз ImmunoRun Экспресс-тесты ImmunoRun

Чтение и интерпретация результатов Положительный тест Отрицательный тест Некорректный (повторить) тест

ImmunoRun. таблица данных на г. Название теста ЧувствительностьСпецифичностьСравнительный тест CPV Ag100%98.8% Реакция Гемагглютинации CHW Ag* 94.4%100%Аутопсия CDV Ag100%98.5%ПЦР FIV Ab96.8%99.7%Вестерн-блоттинг FeLV Ag94.7%99.7% С изолированным вирусом Giardia Ag100% Промышленные испытания Leishmania Ab 95.6%98%ИФА * CHW антиген чувствительности: 1 женская особь червя: 85%, 2 ж. особи червя: 100%, более 3 ж. особей червей: 100% более 3 ж. особей червей: 100%

*Нет необходимости в холодильнике – легко хранить и отправлять. *Нет времени ожидания, чтобы тест согрелся перед использованием. * Длительный срок хранения до 24 месяцев.

Спасибо за внимание

Таблица перехода от S-значения в Титрах для Мелких домашних животных Avian ChlamyophilaCanine BrucellaCanine Distemper IgG Хламидиоз птицБруцеллёз собакЧума плотоядных РИФ РН S1 < 1:50S1 = 1:50S1 < 1:8 S2 = 1:50S2 = 1:100S2 = 1:16 S3 = 1:100S3 = 1:200S3 = 1:32 S4 = 1:200S4 = 1:400S4 = 1:64 S5 = 1:400S5 = 1:800S5 = 1:128 S6 1:800S6 = >1:1600S6 1:256

Таблица перехода от S-значения в Титрах для Мелких домашних животных Canine Distemper IgM Canine EhrlichiosisCanine Hepatitis (CAV) Чума плотоядныхЭрлихиоз собакВирусный гепатит РИФ РН S1 < 1:10S1 < 1:40S1 = 1:4 S2 = 1: 50S2 = 1: 40S2 = 1:8 S3 = 1: 250S3 = 1: 80S3 = 1:16 S4 = 1:1250S4 = 1:160S4 = 1:32 S5 = 1:6250S5 = 1:320S5 = 1:64 S6 > 1:6250S6 = 1:640S6 = 1:128

Таблица перехода от S-значения в Титрах для Мелких домашних животных Canine LeptospirosisCanine Parvovirus IgG. Canine Parvovirus IgM Лептоспироз собакПарвовирусная инфекция РМАРТГАРИФ S1 < 1:100S1 < 1:40S1 = 1:10 S2 = 1:200S2 = 1:40S2 = 1:50 S3 = 1:400S3 = 1:80S3 = 1:250 S4 = 1:800S4 = 1:160S4 = 1:1250 S5 = 1:1600S5 = 1:320S5 = 1:6250 S6 = 1:3200S6 1:640S6 > 1:6250

Таблица перехода от S-значения в Титрах для Мелких домашних животных Feline Chlamydia Feline ToxoplasmaFCoV (FIP) Хламидиоз кошекТоксоплазмоз кошекКоронавирусная инфекция РСКРИФ S1 < 1:16 S1 = 1:320

Таблица перехода от S-значения в Титрах для Мелких домашних животных Feline Calicci VirusFeline Herpes VirusFeline Panleokopenia Калицивироз кошекГерпес-вирусПанлейкопения кошек РН РТГА S1 = 1:8S1 = 1:4S1 = 1:20 S2 = 1:16S2 = 1:8S2 = 1:40 S3 = 1:32S3 = 1:16S3 = 1:80 S4 = 1:64S4 = 1:32S4 = 1:160 S5 = 1:128S5 = 1:64S5 = 1:320 S6 = 1:256S6 = 1:128S6 = 1:640 Иммунофлуоресцентный анализ (РИФ) Реакция нейтрализации вируса (РН) Реакция связывания комплемента (РСК) Реакция торможения гемагглютинации (hemagglutination inhibition) (РТГА) Реакция микроагглютинации (РМА)

ОТЛИЧИЕ ИФА ОТ ИХА ИХА -тесты выполнены в виде тест-полоски или тест-кассеты. Подвижной фазой в данном случае является физиологическая жидкость. Для проведения анализа вносится 1-2 капли сыворотки или плазмы в область образца тестовой полосы, далее добавляется 1 капля буфера и через 5-10 минут получается результат в виде окрашенных линий. 1. Не допускается считывание результата после 20 минут, так как окраска линий не стабильна. Из-за этого нет возможности хранения результатов тестов для отчётности и документирования. 2. Чувствительность и специфичность ИХА-тестов не достигает показателей иммуноферментного анализа!!! Надежность и чувствительность зависит, во-первых, от качества используемых в тесте реагентов и, во-вторых, от концентрации антигена в биоматериале. Качество используемых реагентов зависит от способов их получения, очистки и фиксации на полоске. Концентрация антигена – от стадии заболевания и количества биоматериала. 3. Достаточно много фирм Китая производят тестовые полосы или сами тесты (которые в дальнейшем закупают другие страны, производящие ИХА-тесты), несмотря на указанную в инструкции 100% чувствительность и специфичность, в реальности качество данных тестов низкое, разные серии часто не одинаковы, результаты не воспроизводятся, так же много ложноположительных результатов. 4. ИХА-тесты обеспечивают только качественный результат (да-нет). 5. Экспресс-тесты (антигенные) работают только в течение ~ 3-7 дней после заражения (полезны только при первоначальном воздействии). 6.Положительное пороговое значение для заболевания при использовании одношаговых тестов (ИХА) может давать «ложноотрицательный» результат», поскольку уровень антигена/антител может быть слишком низким, чтобы обнаружить заболевание на ранней стадии.