Фактори,що модифікують перебіг ВІЛ-інфекції і ефективність антиретровірусної терапії Л.Р.Шостакович-Корецька,О.А.Кушнєрева,О.О.Волікова Дніпропетровська Державна Медична Академія 2010

Исторические предпосылки По сравнению с 1990 годом средняя продолжительность жизни ВИЧ- инфицированных пациентов, получающих антиретровирусную терапию, увеличилась на 13 лет. Таковы результаты масштабного исследования, опубликованного в журнале Lancet. По мнению экспертов, благодаря современным лекарствам ВИЧ из смертельной инфекции постепенно превращается в хроническое заболевание

Факторы,котоые могут влиять на прогрессирование ВИЧ и ответ на ВААРТ Генетические факторы Оппортунистичес кие инфекции Другие ( социальные, экономические,психологи ческие,физические и т.д) Основные: Иммунологическ ие,вирусологичес кие,коморбидные

Роль генетических факторов Изучение наследственной предрасположенности к многофакторным заболеваниям крайне важно для их диагностики и терапии

Хемокины и хемокиновые рецепторы: роль в патогенезе ВИЧ-инфекции Хемокинами называются секретируемые белки, которые участвуют в процессах созревания, переноса и рециркуляции лейкоцитов. Они также играют важную роль во многих патофизиологических процессах(аллергия, инфекции, аутоиммунные заболевания, воспаление, онкогенез и т.п. Хемокины секретируются рядом клеток иммунной системы (более 40 протеинов).

История 1995год- показана (Cocchi et al.) роль: b хемокины MIP-Ia (macrophage inflammatory protein 1a), MIP-Ib (macrophage inflammatory protein 1b) RANTES (regulated on activation, normal T expressed and secreted) - в супрессивном эффекте Т-клеток CD год –найден хемокиновый рецептор, CXCR-4 - необходимый для проникновения X4-варианта ВИЧ (X4-HIV-1) в клетки. В 1996 году пятью независимыми группами был идентифицирован бета-хемокиновый рецептор (CC) CKR-5 (позже переименованный в CCR-5) как основной корецептор для NSI-подвида ВИЧ. Разные варианты вируса используют или CCR-5, или CXCR-4, или оба сразу и согласно этому названы X4-HIV- 1 (для CXCR-4) и R5-HIV-1 (для CCR-5). CCL3L1 (MIP-1aP)- хемокин с потенциями супрессировать ВИЧ -1 и лиганд для корецептора ВИЧ-CCR5.

Мутации гена CCR5 и ее значение в патогенезе ВИЧ Мутация D32 (Delta32) в гене CCR5 была обнаружена в 1996 г. Делеция 32 п.н., соответствующая второй петле трансмембранного белка, приводит к сдвигу рамки считывания, что вызывает преждевременное окончание трансляции и образующийся белок лишается трех трансмембранных сегментов. Гетерезиготы имеют в два раза более низкое количество рецепторов CCR-5, что замедляет репликацию вируса и прогрессию заболевания. Частота мутантного аллеля у европеоидов 10-20% у других рас - встречается редко.

Роль корецептора CCR5(chromosome 3p21 ) и лиганда CCL3L1q-arm of (chromosome 17) в патогенезе ВИЧ инфекции

Исследование генетических факторов (CCR5,CCl3L1)проводилось в рамках международного гранта по программам совместных исследований ФЦДР (Фонд Цивільних Досліджень та Розвитку США) в сотрудничестве с Лабораторией по Исследованиям ВИЧ/СПИДа при Университете Техаса, Сан Антонио под руководством Сунила Агуйя. «Генетические детерминанты организма, влияющие на восприимчивость к ВИЧ-1 инфекции» Исследование других патогенетических факторов ВИЧ проводилось в рамках НИР кафедры по программе МЗО Украины « » Все исследования проводились на клинической базе городской больницы 21, Днепропетровского городского и обласного СПИД центра при активном участии сотрудников отделений.

Характеристика контингента больных Общее количество пациентов Количество детей – 298 ВИЧ- позитивные дети – 178 (60%) ВИЧ- негативные дети – 120 (40%) Количество ВИЧ+ матерей - 89

Влияние гаплотипов CCR5 на риск прогрессирования ВИЧ-1 инфекции у детей

Распределение числа копий CCL3L1 у ВИЧ-позитивных, ВИЧ- негативных детей и матерей (%)

Влияние числа копий CCL3L1 на риск перинатальной трансмиссии ВИЧ-1 Число копий ССL3L1 Число пар Относительный риск трансмиссии Ребе- нок МатьС учетом перинатальной профилактики Без учета перинатальной профилактики ,00 < ,041,84 2< 2131,211,30 < ,412,9

Влияние числа копий CCL3L1 на риск перинатальной трансмиссии ВИЧ-1

Влияние числа копий CCL3L1 на риск прогрессирования ВИЧ

Роль DRB1 генов HLA системы II класса Главному комплексу гистосовместимости человека - системе HLA - отводится одна из ведущих ролей в генетическом контроле иммунного ответа макроорганизма в норме и при патологии. Комплекс генов HLA состоит из 6 локусов: A, C, B (антигены класса I) и DR, DQ, DP (антигены класса II). Антигены HLA I класса экспрессируются на Т- лимфоцитах и ядерных клетках организма и выполняют роль рестриктирующих элементов для активации CD8+ Т-клеток. Антигены II класса экспрессируются на макрофагах, В-лф. -важны для антигенной презентации и межклеточного взаимодействия иммуных клеток. CD4+ Т-клетки распознают антиген в комплексе с рестриктирующими элементами класса II, тогда как CD8+ Т-клетки - с рестриктирующими элементами класса I.

Целью нашего исследования явилось выявление ассоциации между наличием у больных ВИЧ инфекцией аллелей локуса DRВ1 комплекса гистосовместимости HLA класса II. Обследовано: 104 больных преимущественно с 3-й стадией ВИЧ(женщины - 47%, мужчины – 53%.) Возраст лет: Длительность наблюдения 4,8±1,3 года Методы :типирование генов DRB1 проводилось методом ПЦР так называемым вариантом сиквенс- специфических праймеров (PCR-SSOP). Исследование осуществлялось наборами «HLA-ДНК-ТЕХ» для типирования генов DRB1 производства «ДНК- Технология» (Москва, РФ). Используемые амплификационные тест-системы определяют 15 специфичностей генов DRB1 на уровне алелей.

DRB1 специфичностей в регионе Приднепровья(n -183)* *Данные приведены из материалов докторской диссертации В.В.Маврутенкова(2009)

Результаты изучения распределения DRB1 специфичностей у больных ВИЧ

Сравнение распределения DRB1пецифичностей * Больные ВИЧ DRB1(01)- (10%) DRB1(04)- (10%) DRB1(07)- (13%) DRB1(11)- (15%) DRB1(13)- (13%) DRB1(14)-(4%) DRB1(15)- (10%) DRB1(18)-(1%) Здоровые DRB1(01)- (17%) DRB1(04)- (18%) DRB1(07)- (24.5%) DRB1(11)- (17%) DRB1(13)- (17%) DRB1(14)-(1%) DRB1(15)- (20.7%) DRB1(18)-( 0%) * Панель специфичностей DRB1-локуса ІІ класу ГКГ Асортимент алелей * (15,16) 03* (17,18) 05* (11,12) 06* (13,14) *-широкие специфичности DRB1*1301, 1302, 1303), DR2, (DRB1*1501), DRB1*03011 – специфичности имеющие связь с ВИЧ М.ВСУПОТНИЦКИЙ. « МИКРООРГАНИЗМЫ, ТОКСИНЫ И ЭПИДЕМИИ» М- 2000

Динамика вирусной нагрузки ВИЧ у больных с разными специфичностями DRB1на фоне ВААРТ

Динамика CD4 у больных ВИЧ с разными специфичностями DRB1на фоне ВААРТ

Роль Эпштейн-Барр вируса как фактора модифицирующего течение ВИЧ Обследовано 80 больных. Середний возраст 35 лет (от 20 до 58). Женщин- 51,5 %, мужчин - 48,5 %. ІІ клиническая стадия ВИЧ у 14 (17,5%) ІІІ клиническая стадия - у 56 (70%), IV клиническая стадия - у10 пациентов(12,5%) ВААРТ - 75 (93,75%) больных Методы исследования Серологические маркеры ВЭБ определялись методом (ІФА) -тест системы Вектор-Бест (Россия)- Молекулярно- генетические исследования проводились методом ПЦР Real – Time наборами « Амплисенс» ( Россия)- аналитическая чувствительность набора копий\мл.

Результаты: Серологические маркери ВЭБ инфекции виявлены у 97,5% больных (78 человек). ДНК ВЭБ была виявлена у 33 больных (41,25% ). Клинические признаки ВЭБ –явления фарингіту и лимфоаденопатии. Наибольшая вирусная нагрузка( ДНК ВЭБ) отмечалась у 2-х больных с 4 стадии ВИЧ (6%) копий/мл.и75293 копий/мл. Уровень CD4 был соответственно 300 кл/мкл и 250кл/мкл. Клинически у этих больных отмечалась волосистая лейкоплакия.

Вирусная нагрузка ДНК ВЭБ У больных ВИЧ Среднее ДНК ВЭБ- 5583копий / мл Стандартное отклонение 15332

Корреляция ДНК ВЭБ с уровнем ДНК ВИЧ и CD4 ДНК ВЭБ ДНК ВИЧ CD4 Тест Пирсона P=0.3 Тест Уилкоксона - 2,29, Р0.5

Благодарность Выражаем глубокую благодарность профессору Сунилу Агуйе и коллегам лаборатории генетических исследований ВИЧ США за сотрудничество в рамках научного гранта и возможность проведения генетических исследований Сердечная благодарность коллегам Днепропетровского Городского и Областного –центров СПИД за многолетнее плодотворное сотрудничество

Динамика ВН ВЭБ,ВИЧ и CD4 на фоне ВААРТ РНК ВІЛ СD4 145 ДНК ВЕБ ДНК ВЭБ РНК ВИЧ 35 СD

Резюме Генетические факторы могут оказывать существеннное влияние на течение ВИЧ и ответ на ВААРТ Полиморфизм гаплотипов гена корецептора CCR5 и различия в числе копий гена лиганда СCL3L1 влияют на риск перинатального инфицирования и прогрессирования ВИЧ инфекции у детей.Риск развития ВИЧ и прогрессирования болезни в 10 раз выше при количестве числа копий CCL3L1 меньше 2-х. Как видно из приведенных данных, отмечается взаимосвязь между наличием у больных ВИЧ инфекцией аллелей локуса DRВ1 комплекса гистосовместимости HLA класса II и изменением показателей уровней вирусной нагрузки и СD 4 с учетом проведения ВААРТ. ВЭБ -Инфекция является значимым ко-фактором ВИЧ- инфекции,патогенетическая роль которой требует уточнения. Дальнейшее изучение ко-факторов,оказывающих влияние на восприимчивость и устойчивость в ВИЧ,позволить выйти на более совершенный уровень лечения, управления и профилактики ВИЧ/СПИД