1© ЗАО «Биоград», 2007г. БЫСТРЫЕ БЕСПРИБОРНЫЕ ТЕСТЫ ДЛЯ ДИАГНОСТИКИ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ И ВИРУСНЫХ ГЕПАТИТОВ к.х.н. Дробченко С.Н., проф. Кальво А., проф. Сэмюэльс Ф. ЗАО «Биоград», СПб., Orgenics LTD, Израиль, Orgenics PBS, Франция

© ЗАО «Биоград», 2007г.2 Сокращение времени получения результата анализа способствует привлечению населения к добровольному тестированию на ВИЧ. Получение результатов тестирования в тот же день дает возможность интегрирования посетителей в систему медицинской психологической помощи, проведения немедленного послетестового консультирования, в случае необходимости, своевременного назначения антиретровирусной терапии.

© ЗАО «Биоград», 2007г.3 Классификация серологических тестов (ВОЗ) Классический иммуноферментный анализ ELISA, требующий более двух часов для постановки анализа, Быстрые Простые Тесты (БПТ – RST - Rapid Simple Test), требующие менее двух часов для получения результата.

© ЗАО «Биоград», 2007г.4 4 основные группы Быстрых Простых Тестов (ВОЗ) агглютинационные точечное иммуноферментное связывание с использованием твердой основы (иммунодот - ИммуноКомб) мембранные иммунохроматографические

© ЗАО «Биоград», 2007г.5 Характеристики различных методов серодиагностики (данные ВОЗ) Тип теста (a) Кол-во тестов Время анализа (час:мин) t C° хране- ния Уровень сложности (b) Дополнительное оборудование Чувстви- тельность (%) Специфи чность (%) Серо- конверсия (с) Цена 1 анализа (d) ИФА ELISA Тест a Тест b Тест c :05 1: спец.лаборато-рия, Инкубатор Вошер Ридер Автом.пипетки Агглютационный тест (Agglution test) Тест d Тест e :05 0: Автом. пипетки Нет ИммуноКомб (Immunodot/Immunocomb test) Тест f Тест g :37 0: Автоматические пипетки Мембранный тест (Flow through membrane test) Тест h100:054-82Нет Хромотографический тест (Chromatographic membrane test) Тест i Тест j :03 0: Нет a.Тесты a-j оценены и отобраны ВОЗ b.Уровень 1: небольшой или отсутствующий опыт лабораторной диагностики Уровень 2: требует предварительной подготовки реагентов Уровень 3: особые навыки в приготовлении разведённых серий и интерпретации картины агглютинации Уровень 4: обученный персонал и сложное лабораторное оборудование c Разница в сутках при выявлении позитивного результата в сравнении с референс-тестом d Оптовая специальная цена для ВОЗ, исключая фрахт и прочие издержки

© ЗАО «Биоград», 2007г.6 Агглютационные, мембранные и иммунохроматографические тесты, обеспечивающие короткое время получения результата, менее чувствительны и специфичны, чем Быстрый Простой Тест ИммуноКомб, основанный на иммуноферментном твердофазном анализе.

© ЗАО «Биоград», 2007г.7 При исследовании сероконверсионных панелей было показано, что только тесты ИммуноКомб определяют сероконверсионное состояние на тех же или более ранних сроках, чем референс – ELISA – тесты. В то время, как БПТ, основанные на других технологиях, отстают от референс-тестов на 2 и более дней.

© ЗАО «Биоград», 2007г.8 Концепция ИммуноКомб Концепция ИммуноКомб учитывает особенность появления первых антител, которые отличаются от антител, полученных позднее, во время задержанного иммунного ответа (различные изотипы синтезированных антител, различную аффинность и авидность, направленность на различные эпитопы или различные антигены). Тесты сконструированы на основе высокоочищенных видоспецифических антигенов. Это позволяет избежать перекрестных реакций при обнаружении антител к соответствующему возбудителю и выявить раннюю стадию заболевания.

© ЗАО «Биоград», 2007г.9 Схема стратегий тестирования, предложенных ВОЗ и UNAIDS Стратегия 1 Т1 Т1+Т1- Положит. результат Отрицат. результат Положит. результат 1 Т1+Т2+ Положит. результат 1 Т1 Т1+Т1- Отрицат. результа т Т2 Т1+Т2- Повторить Т1 и Т2 Т1+Т2+Т1-Т2- Отрицат. результа т Т1+Т2- Неопред. результат 2 Стратегия 2 Группа низкого риска Отрицат. результат 3 Группа высокого риска Т1 Т1- Отрицат. результат Т1+ Т2 Т1+Т2+Т1+Т2- Повторить Т1 и Т2 Т1+Т2+Т1+Т2-Т1-Т2- Отрицат. результат Т1+Т2+Т3+ Т3 Т1+Т2+Т3-Т1+Т2-Т3+Т1+Т2-Т3- Положит. результат 1 Неопред. результат 2 Неопред. результат 2 Стратегия 3 Т1, Т2 и Т3 – три различных быстрых простых теста. 1 Для впервые диагностируемых пациентов, результат должен быть подтвержден на втором образце 2 Анализ должен быть повторен на образце взятом через 14 дней 3 При отсутствии любого риска заражения ВИЧ.

© ЗАО «Биоград», 2007г.10 Рекомендации ВОЗ и UNAIDS по выбору стратегии тестирования в зависимости от цели тестирования и от распространенности ВИЧ инфекции Цель тестированияРаспространенность ВИЧ инфекцииСтратегия тестирования Безопасность переливания крови и пересадки органов любая1 Скрининг >10%1 10% 2 Постановка диагноза При наличии симптомов ВИЧ >30%1 30% 2 При отсутствии симптомов ВИЧ >10%2 10% 3

© ЗАО «Биоград», 2007г.11 Характеристики БПТ. (WHO. HIV assays: operational characteristics: report 15, Annex 2, simple/rapid assays, 2004). Наименование теста. ПроизводительЧувствительность (%) Специфичность (%) Рекомендованы как Serodia-HIV-1/2 (Fujirebio)100 Подходящий CAPILLUS HIV-1/HIV-2 (Trinity Biotech plc)10098, 8Наиболее подходящий Immunocomb II BiSpot HIV 1&2 (PBS Orgenics)10099, 7Наиболее подходящий SPAN COMBAIDS VISUAL (Span Diagnostics Ltd.)10088Подходящий HIV TRI-DOT (J. Mitra & Co. Ltd.)99, 699, 7Наиболее подходящий AccuSpot HIV-1 and 2 (Specialty BioSystems Inc.)10086, 3Подходящий BIONOR HIV-1&2 (Bionor A/S)10098, 8Подходящий SEROCARD HIV (Trinity Biotech plc)10097, 9Подходящий HIV 1 & 2 DoubleCheck (Orgenics)10099, 4Наиболее подходящий EasiDot HIV/EasiSpot HIV 1(Nubenco Diagnostics)95, 371, 3 InstantCHEKTM-HIV 1+2 (EY Laboratories Inc)99, 497, 6Подходящий GENIE II HIV-1/HIV-2 (Bio-Rad)10099,7Наиболее подходящий Efoora HIV Rapid 14(Efoora Inc.)96, 298, 9Подходящий OraQuick HIV-1/2 Rapid HIV-1/2 (OraSure Technologies Inc.)98, 1100Наиболее подходящий SD Bioline HIV 1/2 (Standard Diagnostics)10099, 3Наиболее подходящий Hema Strip(R) HIV 1/2 (Chembio Diagnostics Inc.)98, 1100Наиболее подходящий HIV 1/2 STAT-PAK (Chembio Diagnostics Inc.)97, 6100Наиболее подходящий HIV (1+2) Antibody (Colloidal Gold) (KHB Shanghai Kehua Bioengineering Co. Ltd.) 100 Наиболее подходящий GENEDIA(R) HIV 1/2 Rapid (Green Cross Life Science Corp)10099, 7Наиболее подходящий DoubleCheckGold TM HIV 1&2 (Orgenics Ltd.)10096, 9Наиболее подходящий

© ЗАО «Биоград», 2007г.12 Сравнительная характеристика тестов при определение образцов сероконверсионных и низкотитражных панелей

© ЗАО «Биоград», 2007г.13 Образцы сероконверсионной панели, определяемые каждым из тестов относительно референс-теста Monolisa Ag HBs Plus (0 соответсует первому образцу, определяемому референс-тестом)

© ЗАО «Биоград», 2007г.14 Диагностика вирусных гепатитов ИммуноКомб HBsAg ИммуноКомб Anti-HBsAg ИммуноКомб HBc IgM ИммуноКомб HBc IgG ИммуноКомб HCV ИммуноКомб HAV IgM ИммуноКомб HAV Ab NS3 и NS4 NS5 Коровый антиген ВГС Внутренний контроль

© ЗАО «Биоград», 2007г.15 Исследования, проведенные FDA (США), Европейским комитетом по стандартизации, ВОЗ, Минздравсоцразвития показали, что тесты ИммуноКомб по точности, достоверности, надежности определения не уступают ELISA-технологии, при этом, чувствительность и специфичность их достигают, а в некоторых случаях и превосходят аналогичные показатели классического иммуноферментного анализа.

© ЗАО «Биоград», 2007г.16

© ЗАО «Биоград», 2007г Результат анализа в виде окрашенных точек. Верхняя точка: внутренний контроль. Нижняя точка и (или) средняя точки появляются в случае наличия - инфекции. 1. Для индивидуального тестирования гребешок можно согнуть и отломить необходимое количество зубцов. 2. В ряд А ванночки вносятся образцы (сыворотка, плазма или цельная кровь) и контроли. 3. Гребешок вставляется в ряд А и инкубируется (реакция антиген-антитело). 4. Гребешок перемещается из ряда в ряд ванночки в соответствии с инструкцией (промывки и связывание с коньюгатом). 5. Цветная реакция в ряду F.

© ЗАО «Биоград», 2007г.18 В 2007 году по Государственному контракту в рамках Приоритетного национального проекта в сфере здравоохранения тесты ИммуноКомб ® II ВИЧ 1+2 БиСпот поставляются в медицинские учреждения России.

© ЗАО «Биоград», 2007г.19 Цены IDA на БПТ, допущенные FDA, США. Май 2006 года

© ЗАО «Биоград», 2007г.20 Технология ИммуноКомб позволяет диагностировать широкий спектр инфекций: ВИЧ, Гепатиты А, В, С, Цитомегалию, Токсоплазмоз, Хламидиоз, Краснуху, Хеликобактериоз.

© ЗАО «Биоград», 2007г.21 «Быстрые простые методы в диагностике заболеваний TORCH- комплекса»

© ЗАО «Биоград», 2007г.22 «Диагностика и лечение заболеваний желудочно-кишечного тракта, ассоциированных с инфекцией Helicobacter pylori»

© ЗАО «Биоград», 2007г.23 Методические рекомендации и руководства для врачей.

© ЗАО «Биоград», 2007г.24 Использование диагностикумов ИммуноКомб в лабораторном обеспечении лечебно-профилактических учреждений стационарного и амбулаторно- поликлинического типа, включая первичное звено, выездные кабинеты, полевые условия, позволяет оптимизировать процесс диагностики, осуществлять контроль за эффективностью вакцинации и медикаментозной терапии.

© ЗАО «Биоград», 2007г.25 Регистрационное удостоверение ЗАО «Биоград»

© ЗАО «Биоград», 2007г.26 ЗАО «Биоград» 15 лет в России! Адрес:197101, г. Санкт-Петербург, ул. Мира, 14. тел./факс:(812) , , тел.: (812) , web:

© ЗАО «Биоград», 2007г.27 Спасибо за внимание.