Малышева Татьяна Юрьевна Ведущий специалист отделения Биотехнологии ФГБУ «Всероссийский государственный Центр качества и стандартизации лекарственных средств. - презентация

1 Малышева Татьяна Юрьевна Ведущий специалист отделения Биотехнологии ФГБУ «Всероссийский государственный Центр качества и стандартизации лекарственных средств для животных и кормов»

2 Нормативные документы, регламентирующие ввоз на территорию РФ и применение продукции, содержащей ДНК тканей животных Указание Департамента ветеринарии /2350 от г. о запрете на ввоз на территорию РФ любых видов животных белков для кормления животных из стран, в которых регистрировалась губкообразная энцефалопатия КРС; Указание /1825 от г. о порядке импорта в РФ кормов, кормовых добавок и сырья для их производства; Дополнение к указанию от г /1825 от г. Приказ 425 от г. «Об утверждении правил организации государственного ветеринарного надзора за ввозом кормов»

3 3 Всего на наличие ДНК жвачных животных в 2012 году проведено 674 исследования ДНК жвачных животных обнаружена в 13 образцах, из них: ДНК крупного рогатого скота обнаружена в 11 образцах (1,63%) ДНК мелкого рогатого скота обнаружена в 2 образцах (0,29%)

4 Разработан метод сканирующей электронной микроскопии (в качестве арбитражного, письмо Руководителя Россельхознадзора от г. ФС-НВ-2/304 и письмо ФГБУ «ВГНКИ» от г. 61/4) для системы государственного контроля и мониторинга кормов, позволяющий подтверждать молочные ингредиенты в рецептуре и проверять корма с положительным ПЦР-результатом на наличие ДНК жвачных животных. Кукурузная мука Пшеничная мука Мясокостная мука Рыбная мука Соевая мукаЗЦМ

5 В последнее время участились случаи ввоза в РФ контрафактного мяса и продуктов его переработки, что подвергает опасности здоровье потребителей. Так же определение видовой принадлежности используется при проведении биологической судебной экспертизы в случаях браконьерства. случаи фальсификации мясной продукции, в том числе подвергавшейся термической обработке ; Случаи фальсификации рыбной продукции более дешевыми видами; попытки ввоза в Россию мяса индийского водяного буйвола Bubalus bubalis под видом говядины Попытки ввоза в Россию мяса зебу Bos Taurus indicus под видом говядины Видовое определение принадлежности мяса, изъятого у охотников, подозреваемых в браконьерстве Риск заражения животных и человека прионными заболеваниями, относящихся к группе трансмиссивных губкообразных энцефалопатий

6 Методы дифференциации мяса используются для видовой идентификации сырого мяса, малопригодны для определения видовой принадлежности животных белков в составе кормов и продуктов, подвергнутых термической обработке изоэлектрическое фокусирование не позволяет определять видовую принадлежность белка уже после термической обработки при температуре 80 С в течение 30минут реакция иммунодиффузии (РИД) низкая чувствительность, выявляет примесь мясокостной муки в рыбной и куриной муке в концентрации не менее 50% ИФА Традиционными методами идентификации сырого мяса (органолептические, физико- химические и др.) не всегда возможно дифференцировать мясо близкородственных видов животных, однако эту проблему позволяет решить применение молекулярно- генетических методов, основными достоинствами которых являются высокая чувствительность и специфичность, время исследования 3–4 часа, высокая воспроизводимость и низкая себестоимость.

7 Заключение о видовой принадлежности образца Построение филогенетического дерева с помощью специальных программ (Mega, Vector NTI и др.) Сравнение полученной последовательности с находящимися в базе данных NCBI Определение последовательности фрагмента гена цитохрома В Постановка реакции ПЦР со специфическими праймерами на участок гена цитохрома В митохондриальной ДНК Выделение ДНК Правильный отбор и подготовка проб

8 8 В соответствии с Приказом Россельхознадзора 17 от г. подведомственный Россельхознадзору лабораторный центр ФГБУ «ВГНКИ» провел мониторинг готовых мясных продуктов: сосиски «Франкфуртские» (производитель: LANDHOF GmbH&Co KG, Австрия; импортер: ООО «МИТТРЕЙД», Россия). В результате испытаний в данной продукции выявлена ДНК лошадей, кур, крупного рогатого скота и сои, что не соответствует составу, заявленному на этикетке. Сосиски Хельсинкивурст АУРА/Helsinkiwurst Aura (производитель Pajunlemi Oy, Финляндия). В результате испытаний в данной продукции выявлена ДНК лошадей. При проведении мониторинга готовых мясных продуктов в результате молекулярно-генетических исследований образцов сосисок ИКЕА (ТУ , дата изготовления ) и сосисок Бистро (ТУ , дата изготовления ) производства ООО «МПЗ Ремит» (юридический адрес: , г. Москва, Полярная улица, д. 14), а так же в колбасах производства ООО «Мортадель» и ОАО «Мясокомбинат Клинский» обнаружена ДНК лошадей.

9 9 В ходе мониторинга пищевой продукции, проводимого по указанию Россельхознадзора, при исследовании поступивших 6-ти образцов рыбного филе от разных производителей в образце трески филе б/к производства ООО «Талдом-рыба» ТУ , изготовленного г., вместо атлантической трески (Gadus morhua) и тихоокеанской трески (Gadus macrocephalus) обнаружена рыба рода минтай (Theragra) семейства тресковых.

10 Разработаны и унифицированы качественные и количественные методы по идентификации ГМО и ДНК животных в кормах и сельскохозяйственной продукции, которые гармонизированы с методиками, рекомендованными международными организациями (ФАО/ВОЗ) и применяются во всех странах, где осуществляется регулирование данной продукции; Разработан метод для установления видовой принадлежности мяса близкородственных видов животных с помощью полимеразной цепной реакции и секвенирования ПЦР-продукта. Данный метод позволяет исследовать образцы, содержащие однокомпонентное мясо, но непригоден для дифференциации образцов, содержащих два и более вида мяса; Установление пищевой и кормовой безопасности, являются гарантией уверенности потребителя в их безвредности для здоровья человека и животных.

11 Малышева Татьяна Юрьевна Ведущий специалист отделения Биотехнологии ФГБУ «Всероссийский государственный Центр качества и стандартизации лекарственных средств для животных и кормов»

12 12 В соответствии с распоряжением Россельхознадзора ФС-ЕН- 2/14387 от года организованы межлабораторные сравнительные испытания (МСИ) по определению генетически- модифицированных организмов (ГМО) и ДНК жвачных животных, в рамках государственного задания в период с по г. Всего подготовлено 760 контрольных проб для прохождения МСИ по определению генетически-модифицированных организмов для 38 лабораторий; Всего подготовлено 520 контрольных проб для прохождения МСИ по определению ДНК жвачных животных для 26 лабораторий.

13 При подготовке стандартизированной панели для определения ДНК жвачных животных используются образцы контрафактной продукции из архива отделения Биотехнологии, а так же смоделированные пробы, полученные путем лиофилизации мясных продуктов; Для подготовки панелей по определению ГМО используются стандарты, предоставленные фирмами- производителями генетических линий, на конфиденциальной основе, а так же образцы, содержащие ГМО, выявленные при проведении государственного мониторинга. Каждый образец стандартизированной панели перед отправкой участнику МСИ проверяется в 3-х параллелях.

14 14 Д-количество достоверных результатов ЛО - количество ложноотрицательных результатов ЛП - количество ложноположительных результатов Э - эффективностьп Федеральные государственные бюджетные и другие государственные учреждения 2008 г.2009 г.2010 г.2011 г.2012 г.2013 г. ФС-НВ-2/9178 от (23образца/46 позиций) 2-03/40;2-03/39 от (20образцов/40 позиций) 2-03/549 от 14/10/09$2-03/600 от (20образцов/40 позиций) 2-03/361 от (20образцов/4 0 позиций) БК-16-2/169 от (20образцов/40 позиций) письмо б/н от (20образцов/4 0 позиций) ФС-ЕН-2/14387 от г ДЛПЛОЭ (%)ДЛПЛОЭ (%)ДЛПЛОЭ (%)ДЛПЛОЭ (%)ДЛПЛОЭ (%)ДЛПЛОЭ (%)ДЛПЛОЭ (%) 1Калининградская МВЛ , , Брянская МВЛ , Краснодарская МВЛ , Ленинградская МВЛ , Челябинская МВЛ Приморская МВЛ , Московская ГВЛ Новосибирская МВЛ Камчатская МВЛ Магаданская МВЛ Татарская МВЛ ,5 12Иркутская МВЛ Саратовская МВЛ Ставропольская МВЛ , Белгородская МВЛ , Тверская МВЛ Сахалинская МВЛ Тульская МВЛ Белветцентр Кемеровская МВЛ , ГНУ Уральский НИВИ , Томская ОВЛ ,5 23Орловский РЦ ЦНМВЛ , ВНИИЗЖ ГНУ ВНИИ мясной пром. им. В.М. Горбатова Россельхозакадемии ,5 27Мурманская ОВЛ Хабаровский РЦ Башкирский РЦ Забайкальский РЦ Ростовский РЦ Оренбургский РЦ Красноярский РЦ ЦНПВРЛ

15 15 Д-количество достоверных результатов ЛО - количество ложноотрицательных результатов ЛП - количество ложноположительных результатов Э - эффективность пп Федеральные государственные бюджетные и другие государственные учреждения 2008 г.2009 г.2010 г.2011 г.2012 г.2013 г. ФС-НВ-2/9178 от (23 образца) 2-03/40;2-03/39 от (20 образцов) 2-03/549 от 14/10/09$2- 03/600 от (20 образцов) 2-03/361 от (20 образцов) БК-16-2/169 от (20 образцов) письмо б/н от (20 образцов) ФС-ЕН-2/14387 от г ДЛПЛОЭ (%)ДЛПЛОЭ (%)ДЛПЛОЭ (%)ДЛПЛОЭ (%)ДЛПЛОЭ (%)ДЛПЛОЭ (%)ДЛПЛОЭ (%) 1Брянская МВЛ Краснодарская МВЛ Ленинградская МВЛ Челябинская МВЛ Приморская МВЛ Московская ГВЛ Новосибирская МВЛ Камчатская МВЛ Магаданская МВЛ Татарская МВЛ Иркутская МВЛ Саратовская МВЛ Ставропольская МВЛ Белгородская МВЛ Тверская МВЛ Сахалинская МВЛ Калининградская МВЛ Тульская МВЛ Белветцентр Оренбургский РЦ Кемеровская МВЛ ГНУ Уральский НИВИ Томская ОВЛ Орловский РЦ Центр оценки качества зерна ЦНПВРЛ ЦНМВЛ ВНИИЗЖ ГНУ ВНИИ мясной пром. Им. В.М. Горбатова Россельхозакадемии Нижегородский РЦ Мурманская ОВЛ ЦОКЗ Ростовский филиал ЦОКЗ Новороссийский филиал ЦОКЗ Ставропольский филиал ЦОКЗ Воронежский филиал Башкирский РЦ ЦОКЗ Курский филиал ЦОКЗ Приморский филиал Хабаровский РЦ Забайкальский РЦ Самарский РЦ Ростовский РЦ Красноярский РЦ

16 Спасибо за внимание!