МЕТОДЫ ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКИ ЛАТЕНТНОЙ ТУБЕРКУЛЕЗНОЙ ИНФЕКЦИИ: ВЗГЛЯД КЛИНИЦИСТА П.В. Сенчихин НИИ Фтизиопульмонологии ГБОУ ВПО Первый МГМУ им. И.М.Сеченова. - презентация

1 МЕТОДЫ ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКИ ЛАТЕНТНОЙ ТУБЕРКУЛЕЗНОЙ ИНФЕКЦИИ: ВЗГЛЯД КЛИНИЦИСТА П.В. Сенчихин НИИ Фтизиопульмонологии ГБОУ ВПО Первый МГМУ им. И.М.Сеченова МЗ РФ Москва

2 ТУБЕРКУЛЕЗ В РОССИИ Заболеваемость 88,263,063,0 Смертность 21,811,411,4 Заболеваемость детей 15,914,514,5 Первичное инфицирование детей (%) 1,30,8

3 Диагностикумы на основе интерферона-гамма M. tuberculosis: внутриклеточный патоген, не всегда высевается от больных лиц Гуморальный ответ на M. tuberculosis довольно низок Инфицирование микобактериями вызывает сильный иммунный ответ, опосредованный Th1- клетками Специфичные к антигенам микробактерий Т- клетки, секретирующие интерферон-гамма, могут являться точным маркером инфекции

4 T-SPOT.TB является диагностической системой для детекции M. tuberculosis с помощью определения Т-клеток: упрощенный вариант метода ex vivo ELISPOT, разработанный доктором Ajit Lalvani система: диагностический набор + необходимое оборудование (центрифуга, инкубатор, микроскоп) произведено в соответствии с международной системой качества (ISO13485:2003, GMP) T-SPOT ®.ТВ

5 Антигены микобактерий, используемые в тесте T-SPOT ®.TB (ESAT-6 и CFP 10) выделены из региона RD1 M. tuberculosis. Регион RD1 отсутствует у большинства микобактерий, выделяемых из окружающей среды. T-SPOT®.ТВ обладает высокой специфичностью

6 Регион RD1 отсутствует у всех штаммов БЦЖ (потерян во время первоначального выделения M. bovis BCG в период с 1908 по 1931 в Институте Пастера) – T-SPOT®.TB не дает ложно положительных ответов у БЦЖ вакцинированных лиц T-SPOT®.ТВ обладает высокой специфичностью

7 T-SPOT ®.ТВ обладает выдающейся чувствительностью T-SPOT ®.TB оценивает индивидуальные реагирующие Т-клетки в образце можно выявить практически каждую отдельную Т-клетку, таким образом, даже у пациентов с выраженной иммуносупрессией данный тест может выявлять Т-клетки, реагирующие с антигенами микобактерий. T-SPOT.TB выявляет все типы Т-клеток – в данном случае выявляются и CD4 и CD8 типы Т-клеток, таким образом, если популяция одного типа клеток у индивидуума истощена, положительный ответ может быть выявлен по ответу CD8 T клеток. Чувствительность теста является его ключевым преимуществом при обследовании иммунокомпрометированных пациентов

8 Как работает тест T-SPOT ®.ТВ Забор крови и выделение белых клеток крови с применением пробирок BD CPT или фиколла. Добавление очищенных клеток крови и антигенов микробактерий в лунки. Т-клетки в присутствии антигенов микобактерий высвобождают интерферон-гамма Интерферон-гамма захватывается антителами Инкубация, отмывка, добавление вторичных конъюгированных антител к ИФН-гамма Добавление субстрата, развитие цветной реакции и оценка реакции по количеству спотом (пятен) Каждый спот представляет собой индивидуальную Т-клетку, вырабатывающую ИФН-гамма к антигенам микобактерий

9 Тест T-SPOT ®.ТВ Данные по чувствительности Группа обследованных Чувствительность (%) Взрослые, ТОД (n = 85)90,0 Взрослые, ТВЛ (n = 20)85,2 Взрослые, ВИЧ+ (n = 20)84,6 Дети ТОД (n=30)93,3

10 Тест T-SPOT ®.ТВ Данные по специфичности Группа обследованных Специфичность (%) Взрослые, БЦЖ+, Манту «+/-» (n = 30) 93,3 Дети, БЦЖ+, Манту «-» (n=30) 100,0

11 QFT-Gold In Tube является диагностической системой для детекции M. tuberculosis с помощью определения интерферона-гамма система: диагностический набор + оборудование для проведения стандартного иммуноферментного анализа произведено в соответствии с международной системой качества (ISO13485:2003, GMP) QFT-Gold In Tube

12 Антигены микобактерий, используемые в тесте QuantiFERON®- TB Gold IT (ESAT-6, CFP 10, ТВ 7,7) выделены из региона RD1 M. tuberculosis. QuantiFERON®-TB Gold IT обладает высокой специфичностью

13 QuantiFERON®-TB Gold IT

14 QuantiFERON®-TB Gold IT Данные по чувствительности Группа обследованных Чувствительность (%) Взрослые, ТОД (n = 30)86,6 Дети ТОД (n=30)76,6

15 QuantiFERON®-TB Gold IT Данные по специфичности Группа обследованных Специфичность (%) Взрослые, БЦЖ+, Манту «+/-» (n = 30) 100,0 Дети, БЦЖ+, Манту «-» (n=30) 100,0

16 QFT-Gold In Tube vs T-SPOT.TB Тест T-SPOT ®.ТВ QuantiFERON®-TB Gold IT Образец Изолированные и очищенные мононуклеары (4 мл крови). Требуется строго определенное количество клеток на лунку 2-3 мл цельной крови Детекция Число Т-клеток, продуцирующих интерферон гамма Концентрация интерферона гамма, секретируемого Т- клетками Обработка кровиВ течение 8 часов после взятия крови В течение 16 часов после взятия крови АнтигеныESAT-6, CFP 10ESAT-6, CFP 10, ТВ 7,7 Тип клетокCD4, CD8CD4 Срок годности вскрытых реактивов 8 недель при С12 недель при С Источники: инструкции по применению QuantiFERON-TB Gold IT и T-Spot TB

17 СПАСИБО ЗА ВНИМАНИЕ WHO. TB Advocacy Report The Human Face of TB. Modena November 2001